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GC-MS法测定复方鲜竹沥液中特征性成分α-金合欢烯含量及制剂中生姜提取工艺研究
2024年
目的 建立生姜特征性成分α-金合欢烯的GC-MS含量测定方法并研究生姜的提取工艺。方法 利用气质联用技术(GC-MS)对复方鲜竹沥液和生姜挥发油溶液的挥发性成分进行对比分析,找到生姜特征成分α-金合欢烯;将α-金合欢烯作为指标,建立其含量测定方法;研究处方中生姜不同生产工艺α-金合欢烯的含量及转移率。结果 复方鲜竹沥液和生姜挥发油溶液分别鉴定出24个和20个挥发性成分,并得到生姜特征成分α-萜品醇和α-金合欢烯。α-金合欢烯的GC-MS方法学专属性强、线性、精密度、稳定性、重复性均良好,回收率符合要求。测定不同生产工艺的生姜汁中α-金合欢烯含量,发现榨汁提取工艺对生姜中挥发性成分的保留至关重要。结论 该方法稳定可靠,可为优化复方鲜竹沥液中生姜制备工艺提供实验依据。
黄东吴毅丁银平朱徐东朱娜肖小武付辉政
关键词：GC-MS复方鲜竹沥液生姜
中草药重要功能成分α-法尼烯检测方法建立被引量：2
2022年
目的α-法尼烯在一系列中草药中发挥着重要作用。本研究将利用生物合成法合成α-法尼烯,并建立一种灵敏、快速检测细胞提取物中α-法尼烯成分的方法。方法通过构建表达α-法尼烯合酶质粒,将其转入大肠杆菌,诱导该酶在细菌内进行表达并利用大肠杆菌MEP途径的代谢产物法尼基焦磷酸(FPP)作为底物,生产α-法尼烯;经正十二烷萃取,以氦气为载气上样,通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)方法进行分析。检测9.21 min 出峰物质,对其结构进行质谱分析,确定产物为α-法尼烯。结果细胞提取物中α-法尼烯产物含量为3.63 mg/L。GC-MS可以检测浓度低至50 g/L的α-法尼烯。结论通过GC-MS建立了高效灵敏的α-法尼烯检测方法。
郑丹妮陈思哲吴芷玥张一涵崔瑜薛闯康巍
关键词：中草药Α-法尼烯GC-MS
α-法尼烯在巴斯德毕赤酵母中的生物合成被引量：1
2021年
由可再生原料微生物生产α-法尼烯是一种有前途的替代传统石油基工艺的方法。尽管已经报道α-法尼烯可以通过常规模型菌株如大肠杆菌和酿酒酵母异源产生,但是其发酵规模不易扩大。巴斯德毕赤酵母是生产类异戊二烯的良好平台且可高密度培养,具有大规模生产α-法尼烯的潜力。在该项研究中,首先确定tHmg1,IDI1,ERG19,AFSLERG20是甲羟戊酸途径和α-法尼烯合成途径的限速酶基因。然后对限速酶基因进行组合过表达并优化基因拷贝数以平衡代谢路径增大流向α-法尼烯合成的代谢通量,最终获得菌株F16,其α-法尼烯产量为(1.09±0.02)g/L。最后,通过外源添加不饱和脂肪酸促进α-法尼烯分泌到细胞外,当培养基添加20 mmol/L的油酸,在摇瓶中获得最高的α-法尼烯产量约1.40 g/L[0.32 g/g细胞干重(dry cell weight,DCW)]。这是出发菌株F1产量的3.1倍。该研究是首次以巴斯德毕赤酵母作为底盘微生物细胞来生产α-法尼烯,并为其他倍半萜的异源生物合成提供了新的思路。
刘慧刘慧徐建中徐建中
关键词：代谢工程巴斯德毕赤酵母甲羟戊酸途径Α-法尼烯脂肪酸
影响α-Farnesene合酶区域选择性和潜在环化能力的关键氨基酸
倍半萜化合物是最大的一类天然存在的化合物，其具有抗肿瘤、抗菌、除草、抗疟疾等生理活性，在食品、农医药、化妆品等领域中被广泛使用。倍半萜合酶直接调控倍半萜化合物的合成及产物特异性。对倍半萜合酶催化机制和环化机理的解析在实践...
向英
关键词：氨基酸定点突变
结球甘蓝α-法呢烯合成酶基因的鉴定与功能分析
2021年
为阐明结球甘蓝α-法呢烯合成酶基因(BoTPSa)的生物学功能,本研究克隆了BoTPSa基因并分析了其在不同环境胁迫影响下的表达情况。利用大肠埃希菌原核表达系统,异源表达其蛋白和测定其生化功能,并在拟南芥中对BoTPSa的亚细胞定位进行了研究。结果表明:BoTPSa基因与十字花科特别是芸薹属植物的同源基因在碱基序列上高度相似,说明其具有较保守的结构;小菜蛾危害、蚜虫危害、高温胁迫、低温胁迫均能显著诱导BoTPSa基因的表达,并且受小菜蛾虫害诱导的基因表达变化幅度高于其他胁迫处理,说明在结球甘蓝体内BoTPSa可能参与虫害和非生物胁迫反应;BoTPSa蛋白未定位于叶绿体和细胞核中,在体外能催化合成多种萜类产物,是一个多功能酶。综上所述,本研究系统解析了结球甘蓝的α-法呢烯合成酶的功能,为十字花科作物的萜类合酶的功能研究和实践应用提供了理论基础。
张彤汪一萍葛洋NTIRI Eric周文武
关键词：结球甘蓝原核表达亚细胞定位
乌龙茶加工过程中α-法呢烯的形成关键调控基因的筛选与表达分析被引量：9
2020年
为探讨乌龙茶加工过程中做青工序的机械力对香气成分中α-法呢烯的影响及形成机理,本实验以乌龙茶品种黄旦的鲜叶、萎凋叶、摇青叶为供试材料,未摇青等时间摊放叶为对照组,采用GC-TOF-MS方法检测乌龙茶加工过程中α-法呢烯含量,结合转录组和茶树基因组数据库筛选α-法呢烯合成酶(AFS)关键基因,构建系统进化发育树,利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)进行数据验证,并进行α-法呢烯含量与基因表达水平间的相关性分析。结果表明,α-法呢烯的含量在第一次摇青时有所下降,由于机械胁迫的累加,摇青叶中α-法呢烯的含量逐渐增加并在第三次摇青时达到峰值(0.9485%)。筛选获得的CL11384.Contig7_All转录本与茶树α-法呢烯合成酶基因(CsAFS,GenBank登录号:MH125264.1)高度相似,暂命名为CsAFS7基因,该基因表达模式与测序数据相一致。皮尔逊相关系数分析表明,乌龙茶加工过程中α-法呢烯含量与CsAFS7基因的相关表达水平之间存在极显著正相关(r=0.951,P<0.01)。因此,乌龙茶做青过程中α-法呢烯的累积可能受到CsAFS7基因的表达调控。
吴晴阳周子维武清扬倪子鑫赖钟雄孙云
关键词：乌龙茶做青QRT-PCR
一个参与桃α‑Farnesene生物合成的基因及其应用
本发明提供了一个来源于桃的基因PpTPS2，具有SEQ:NO.1所示的核苷酸序列。通过PCR扩增获得PpTPS2全长序列，进化树分析得到PpTPS2聚类在TPS b家族，通过序列比对得到其具有b家族的保守域。在大肠杆菌中...
张波柳洪入陈昆松
文献传递
α-法尼烯合成酶基因转化拟南芥和烟草的研究
植物萜类是植物挥发物的主要组成成分,主要有由半萜、单萜、倍半萜、二萜、四萜等组成。它们在植物香气组成、昆虫诱导、植物防御、生长调控等方面具有重要作用。α-法尼烯是存在于多种植物的叶片、花和果实中的一种倍半萜类挥发性有机化...
张冉
关键词：拟南芥烟草亚细胞定位
文献传递
α-法尼烯合成酶基因转化丰产梨的研究
α-法尼烯是一种存在于生物体中的倍半萜类物质,已知与植物的抗冷性、昆虫的诱导及冷藏苹果和梨果实重大生理病害-虎皮病的发生有关,是苹果果实中重要的香气成分之一。α-法尼烯的生物合成是通过类异戊二烯途径中的甲羟戊酸途径,α-...
王璐
文献传递
鸭梨中α-法尼烯合成酶基因分离与表达分析被引量：2
2009年
研究α-法尼烯合成酶基因的表达特性,了解鸭梨虎皮病发生的分子基础。应用高效液相色谱(HPLC)法检测鸭梨果皮中α-法尼烯含量;经过RT-PCR扩增首次得到了1824bp鸭梨α-法尼烯合成酶基因(GenBank注册号DQ364626),使用Northern杂交法检测了该基因的表达特性。PFS基因在鸭梨果皮中的表达量最高,叶中的次之,茎、花、根中的表达量相对较低;二苯胺(DPA)推迟而1-甲基环丙烯(1-MCP)抑制了低温冷藏的鸭梨果皮中PFS基因的表达和α-法尼烯的释放。α-法尼烯的积累量与PFS基因的表达量之间存在很高的协同性。
张建朋陈新吕慧贞张元湖
关键词：虎皮病基因表达
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