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- 一种基于半理性设计的β-半乳糖苷酶基因异源性表达方法
- 本发明属于酶工程技术领域，公开了一种基于半理性设计的β‑半乳糖苷酶基因异源性表达方法。步骤包括1.引物的设计与合成、β‑半乳糖苷酶基因扩增、表达载体构建与转化、目的基因诱导表达、重组β‑半乳糖苷酶纯化条件优化。本发明产β...
- 王晓辉赵子琪王娅美关雅方
- 普通烟草β-半乳糖苷酶基因(NtBGAL)的生信分析及其在不同组织及原核诱导的表达
- 2024年
- 【目的】探明普通烟草β-半乳糖苷酶基因NtBGAL的表达模式与蛋白特征,为后期创制烟草多用途利用的底盘材料提供依据。【方法】通过比对普通烟草K326基因序列与本氏烟草NbBGAL1基因的同源性,以K326的cDNA为模板经PCR技术克隆获得NtBGAL基因,随后利用生信工具软件分析其基因结构及蛋白理化性质,并采用qRT-PCR检测该基因在烟草不同组织部位(根、茎、叶和花)的表达模式,最后开展原核诱导表达、蛋白纯化及蛋白表征研究。【结果】克隆获得烟草NtBGAL基因,其与本氏烟草NbBGAL1基因同源性最高,二者具有相同的结构域(Motif);该基因定位于9号染色体上,含有18个内含子,mRNA长度为6649 bp,CDS长度为2541 bp,编码846个氨基酸,翻译的β-半乳糖苷酶属于GH35家族,NtBGAL蛋白的分子量为92.44 kDa,理论等电点(pI)为6.8,GRAVY为-0.222,定位于细胞壁。该基因在普通烟草不同组织部位的表达量为花>叶>茎>根,差异显著。在37℃下进行原核诱导,NtBGAL蛋白有明显表达;采用包涵体纯化方法获得较高纯度的NtBGAL蛋白。NtBGAL蛋白酶促反应最适温度为30~40℃,最适pH为4.0~6.5,Mn^(2+)浓度为0.05~0.15 mmol/L时对NtBGAL酶活性有增强作用。【结论】研究明确NtBGAL基因的组织表达模式及蛋白表征,为进一步通过改造NtBGAL基因,利用普通烟草生产人源化糖蛋白奠定基础。
- 曹领改刘杰张洁张盼余世洲
- 关键词：烟草Β-半乳糖苷酶
- 一种β-半乳糖苷酶基因及其编码酶的应用
- 本发明公开了一种β‑半乳糖苷酶基因及其编码酶的应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明筛选到一种特定氨基酸序列的β‑半乳糖苷酶，并且成功地采用大肠杆菌对β‑半乳糖苷酶进行异源表达，本发明的方法安全高效，所表达的β‑半乳...
- 李兆丰张梓芊李才明顾正彪班宵逢程力洪雁
- 一种耐热α-半乳糖苷酶基因和应用
- 本发明属于基因工程和发酵工程技术领域，具体涉及一种耐热α‑半乳糖苷酶基因和应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明的α‑半乳糖苷酶的活性高，来源于嗜热拟青霉，耐热性能良好。α‑半乳糖苷酶最高表达量达到10g...
- 梁伟凡李阳源邓智远唐雪梅容晓燕刘金山邓敬阳周银华林影
- 苹果β-半乳糖苷酶基因Mdβ-gal18及在调控果实成熟软化中的应用
- 本发明公开了一种苹果β‑半乳糖苷酶基因Mdβ‑gal18及在调控果实成熟软化中的应用，分析了该基因在不同处理苹果果实采后贮藏过程中的表达模式，利用瞬时过表达和VIGS技术验证Mdβ‑gal18基因在苹果果实后熟软化中的作...
- 王苗苗郑先波冯建灿吴尧王豪陈明黄松白团辉焦健宋春晖宋尚伟庞宏光
- 文献传递
- 苹果β-半乳糖苷酶基因家族响应腐烂病菌信号被引量：1
- 2021年
- 以GH35(glyco_hydro_35,PF01301)结构域保守序列为种子序列,在基因组范围鉴定了苹果(Malus domestica)等6种植物的β-半乳糖苷酶(β-galactosidases,BGals)基因家族,并对苹果BGals(MdBGals)进行了生物信息学和表达模式分析。结果表明,苹果基因组存在23个BGal基因,其氨基酸序列数、分子质量和等电点分别介于163~924、18.99~103.57 kDa和5.14~9.05之间,主要位于细胞壁。在不同植物中BGals相对保守,但在部分植物类群中存在较快的进化速率。苹果BGals启动子区域存在多个响应脱落酸、茉莉酸甲酯和水杨酸等激素信号和防卫信号的顺式作用元件。接种腐烂病菌后,苹果韧皮组织中多个BGals呈下调表达的趋势,也有少数成员上调表达。MD02G1079200、MD15G1306800和MD10G1301600表达量的变化较为明显,可作为进一步研究苹果抗腐烂病的候选基因。
- 赵丹朵虎吕前前田玉珍左存武
- 关键词：苹果Β-半乳糖苷酶基因进化特征顺式作用元件
- 棉花β-半乳糖苷酶基因家族的全基因组鉴定及分析被引量：3
- 2021年
- 植物β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,BGALs)是一类重要的糖苷水解酶,可水解糖链、糖脂及糖蛋白中非还原末端β-D-半乳糖残基。为揭示β-半乳糖苷酶在棉花发育中的调控机制,本研究对BGAL家族做全基因组学分析,为进一步了解BGAL家族在棉花花粉中的功能提供理论支持。利用生物信息学对陆地棉、亚洲棉、海岛棉和雷蒙德氏棉这四个棉种的BGAL进行成员鉴定、序列特征、保守域结构、共进化关系等家族特征分析,并进一步利用转录组数据和RT-qPCR分析GhBGALs基因在不同组织中的表达模式。共鉴定153个BGAL家族成员,利用聚类分为8个亚组,同一亚组中具有相似的外显子/内含子数目和基因结构,共进化分析中显示在陆地棉和二倍体棉属间存在多对基因对,转录组数据结果表明陆地棉中的部分基因在不同组织中特异性表达,例如GhBGAL6和GhBGAL32这两个基因在所有组织中都高表达;GhBGAL33、GhBGAL7、GhBGAL18和GhBGAL43这四个基因在雄蕊(花药和花丝)和花瓣中表达量极高,进一步的RT-qPCR实验结果发现,部分基因(如GhBGAL6,GhBGAL7,GhBGAL17)在雄蕊中高表达,推测此类基因对雄蕊的发育有一定的调控作用。本研究首次对BGAL家族在陆地棉、亚洲棉、海岛棉和雷蒙德氏棉4个棉种进行全基因组鉴定分析,为进一步探索β-半乳糖苷酶对棉花的生长发育提供理论基础。
- 曹晓聪张朝军苟浩琦王小艳乔凯凯马启峰张桂寅范术丽
- 关键词：Β-半乳糖苷酶生物信息学棉花基因家族
- 深海来源的菌株及其编码的β-半乳糖苷酶基因和应用
- 本发明涉及一种深海来源的菌株及其编码的β‑半乳糖苷酶基因和应用，属于生物技术领域，所述菌株为交替单胞菌属(Alteromonas sp.)菌株ML117，该菌株于2017年12月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编...
- 孙晶晶郝建华王伟刘均忠
- 文献传递
- 一种耐热α-半乳糖苷酶基因和应用
- 本发明属于基因工程和发酵工程技术领域，具体涉及一种耐热α‑半乳糖苷酶基因和应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明的α‑半乳糖苷酶的活性高，来源于嗜热拟青霉，耐热性能良好。α‑半乳糖苷酶最高表达量达到10g...
- 梁伟凡李阳源邓智远唐雪梅容晓燕刘金山邓敬阳周银华林影
- 文献传递
- 一种海洋来源蜡样芽孢杆菌α-半乳糖苷酶基因的克隆表达及功能鉴定被引量：2
- 2021年
- 为获得高效的α-半乳糖苷酶并了解其功能,采用基因工程技术,从鹿角菜中筛选获得的蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus中克隆得到一个新的α-半乳糖苷酶基因(BcgalA),并在Escherichia coli BL21(DE3)中成功进行了重组表达。结果表明:BcgalA基因序列编码441个氨基酸,预测的BcGalA蛋白相对分子质量约为50380,生物信息学分析显示,该酶属于GH4家族;酶活试验表明,在37℃、pH 8.0条件下该酶水解4-硝基苯基-α-D-吡喃半乳糖苷(pNP-α-Gal)、棉子糖的比活力分别为(1.498±0.034)、(0.261±0.012)U/mg,但对半乳甘露聚糖无水解活性。研究表明,本研究中克隆表达的BcGalA是一种属于GH4中仅对低分子量底物起作用的α-半乳糖苷酶,为探究GH4α-半乳糖苷酶的结构与功能关系提供了样本。
- 江超峰李悝悝李唐车佳尹恒
- 关键词：蜡样芽孢杆菌Α-半乳糖苷酶克隆表达
