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匹莫齐特对脂多糖诱导RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合成酶表达的调控及其作用机制: 2024年; 目的运用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞株,探究匹莫齐特(Pimozide)对一氧化氮和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)合成的影响和作用机制。方法用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液将RAW264.7细胞稀释为每孔2×105个接种于24孔板中进行培养,分为空白对照组(仅含DMEM培养液+RAW264.7细胞)、Pimozide组(仅含RAW264.7细胞和10μmol·L^(-1)Pimozide培养液)、LPS诱导(LPS 1 mg·L^(-1))组(LPS+RAW264.7细胞)、药物处理组[含细胞和不同浓度药物,包括Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组]。各组培养上清液中一氧化氮水平测定采用Griess法进行检测。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫蛋白印迹法分别检测iNOS mRNA表达水平和iNOS和磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的蛋白表达相对水平。结果用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液培养RAW264.7细胞24 h后,各组培养上清液一氧化氮表达水平差异有统计学意义(F=25.69,P<0.05);Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组一氧化氮释放的抑制率差异有统计学意义(F=132.49,P<0.05)。各组iNOS mRNA和蛋白水平表达差异有统计学意义(F=118.59和23.37,P<0.05),同时发现各组磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5/信号传导及转录激活因子通路-5比值差异有统计学意义(F=12.07,P<0.05)。结论Pimozide可抑制RAW264.7细胞中iNOS表达和一氧化氮的生成,其作用机制可能与抑制磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的生成相关。; 刘佳; 关键词：脂多糖 RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合成酶

一氧化氮合成酶的基因克隆与功能鉴定: 2022年; 一氧化氮(NO)作为一种极其重要的生物信息分子,其合成依赖于一氧化氮合成酶(NOS),因此NOS在动植物体内发挥着不可替代的作用。本研究通过克隆海洋细菌Exiguobacterium aurantiacum JM-2的一氧化氮合成酶基因,利用Bam H Ⅰ和Hind Ⅲ对目的基因和载体进行双酶切和连接,然后用热激转化法将目的基因转到大肠杆菌Top10和BL-21中,使其成功表达,得到转化菌株,再利用IPTG诱导蛋白表达并进行蛋白纯化,最后对该蛋白的活性进行测定和分析。结果表明,当培养基中IPTG的最佳浓度为0.1 mmol/L、诱导时间为5 min时,NOS活性最大。; 罗希帆周灵美谢晓东陈帅君杨红澎吴疆; 关键词：基因克隆蛋白纯化一氧化氮合成酶活性测定

金黄色葡萄球菌一氧化氮合成酶NOS调控万古霉素耐药性发生的分子机制: 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是人类主要致病细菌，由甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant S.aureus,MRSA)引发的感染正严重威胁公共健康安全。万...; 舒雪琴; 关键词：金黄色葡萄球菌一氧化氮合成酶万古霉素耐药性分子机制

石香膏干预糖尿病溃疡创面模型大鼠创面组织晚期糖基化终产物及其受体与内皮型一氧化氮合成酶表达的变化被引量：7: 2022年; 背景:糖尿病溃疡作为糖尿病的常见并发症之一,其低愈合率和高截肢率已严重危害人类健康,尽管目前多种中医外用膏药已证实能促进创面愈合,但其发挥作用的分子机制尚未明确。目的:探讨石香膏治疗糖尿病溃疡创面的可能作用机制。方法:将40只清洁级雄性SD大鼠随机分正常对照组、糖尿病溃疡组、细胞生长因子组、石香膏组,每组10只。除正常对照组外,其余3组均制备糖尿病大鼠模型;1周后4组均采用全层皮肤缺损法制备溃疡创面模型。造模成功1周后,石香膏组、细胞生长因子组分别给予外用细胞生长因子及外敷石香膏干预,糖尿病溃疡组及正常对照组仅使用双层消毒干纱布覆盖固定。分别在干预后第7,14天取各组大鼠背部创面肉芽组织标本,Western-blot法检测大鼠背部创面肉芽组织中晚期糖基化终产物受体、内皮型一氧化氮合成酶蛋白表达水平;苏木精-伊红染色检测大鼠背部创面样本病理变化;免疫组化法检测大鼠背部创面肉芽组织中晚期糖基化终产物表达水平。结果与结论:①苏木精-伊红染色结果显示,干预第7,14天正常对照组与糖尿病溃疡组镜下均可见大片未修复组织,而石香膏与细胞生长因子组在干预后第7,14天后创面修复良好;②Western-blot法检测结果显示,与正常对照组对比,糖尿病溃疡组的晚期糖基化终产物受体表达量上升,内皮型一氧化氮合成酶表达量下降(P<0.05);石香膏组和细胞生长因子组中晚期糖基化终产物受体相对表达量相对下降,内皮型一氧化氮合成酶相对表达量相对上升(P<0.05);与糖尿病溃疡组对比,石香膏组和细胞生长因子组中晚期糖基化终产物受体表达量相对下降,内皮型一氧化氮合成酶表达量相对上升(P<0.05);与细胞生长因子组相比,石香膏组晚期糖基化终产物受体表达量相对下降,内皮型一氧化氮合成酶表达量相对上升(P<0.05);③; 费冀张开伟周一夫凌一鸣; 关键词：晚期糖基化终产物晚期糖基化终产物受体内皮型一氧化氮合成酶

膝骨关节炎痰瘀互结证和肝肾亏虚证患者关节液诱导型一氧化氮合成酶和胰岛素样生长因子-1浓度特点研究被引量：3: 2022年; 目的:探究膝骨关节炎痰瘀互结证和肝肾亏虚证患者关节液诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的浓度特点及其与证候评分的相关性。方法:纳入膝骨关节炎痰瘀互结证和肝肾亏虚证患者共计47例,测定患者的关节液iNOS、IGF-1浓度、应用中医证候量表量化证候评分,分析其关节液iNOS、IGF-1浓度的特点及其与中医证候评分的相关性。结果:膝骨关节炎肝肾亏虚证和痰瘀互结证患者一般情况比较差异无统计学意义(P>0.05);膝骨关节炎痰瘀互结证患者关节液iNOS浓度水平高于肝肾亏虚证患者(P<0.05),膝骨关节炎肝肾亏虚证患者关节液IGF-1浓度水平低于痰瘀互结证患者的(P<0.05);膝骨关节炎痰瘀互结证患者中医证候评分与关节液iNOS浓度水平正相关(r=0.167,P<0.05);膝骨关节炎肝肾亏虚证患者中医证候评分与关节液IGF-1浓度水平负相关(r=-0.189,P<0.05)。结论:膝骨关节炎痰瘀互结证和肝肾亏虚证患者关节液iNOS、IGF-1浓度特点不同,可以在一定程度上反映中医证候的严重程度,与中医病因病机的分析一致,上述膝骨关节炎不同证候患者关节液炎症因子浓度特点的不同,可能与JAK2/STAT3信号通路的激活程度不同有关。; 吴红飞刘向春刘叶亓建刘勤哲王乾顺刘宸赵鹏源叶超; 关键词：膝骨关节炎关节液诱导型一氧化氮合成酶胰岛素样生长因子-1

克癀胶囊联合抗病毒治疗代偿期乙肝肝硬化对外周血单个核细胞中核因子活化B细胞κ轻链增强子/诱导型一氧化氮合成酶表达的影响: 2022年; 目的探讨克癀胶囊联合抗病毒治疗代偿期乙肝肝硬化对外周血核因子活化B细胞κ轻链增强子(Nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)/诱导型一氧化氮合成酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响。方法选取2019年6月—2021年6月期间在广东省中西医结合医院感染科接受治疗的代偿期乙肝肝硬化患者60例,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组各30例。对照组接受临床代偿期乙肝肝硬化常规抗病毒治疗,观察组在对照组的基础上加入克癀胶囊联合治疗。治疗24周后,观察比较两组患者治疗前后肝脏硬度、乙肝病毒DNA载量、肝功能指标[丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(Total bilirubin,TBIL)]水平、外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中NF-κB/iNOS表达水平及不良反应发生情况。结果治疗24周后对照组患者肝脏硬度值较治疗前无明显改变,乙肝病毒DNA载量低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者肝脏硬度值、乙肝病毒DNA载量均低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组患者肝脏硬度值、乙肝病毒DNA载量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗24周后两组患者ALT、AST、TBIL水平均低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组患者ALT、AST、TBIL水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗24周后两组患者PBMC中NF-κB、iNOS mRNA及蛋白表达水平均低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组患者PBMC中NF-κB、iNOS mRNA及蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,两组患者不良反应发生情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论克癀胶囊联合抗病毒治疗可有效减轻代偿期乙肝肝硬化病情,可能与克癀胶囊抑制NF-κB/iNOS信号通路活性的机制相; 谢维宁李玉权; 关键词：抗病毒治疗

内皮型一氧化氮合成酶基因敲除对痴呆的影响: 血管性痴呆占全部痴呆病例的20%。发病率仅次于阿尔茨海默症。以往的研究表明,内皮型一氧化氮合成酶（endothelial nitric oxide synthase）及其产物一氧化氮是重要的调节全身血压、血管张力、血管重...; 安璐璐; 关键词：血管性痴呆内皮型一氧化氮合成酶白质损伤脑低灌注

牡蛎肽对CCl_(4)诱导肝纤维化大鼠核因子-κB、诱导型一氧化氮合成酶的影响被引量：3: 2021年; 目的研究牡蛎肽(Oyster peptide,OP)对CCl4诱导肝纤维化大鼠核因子-κB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的影响及相关机制。方法50只SD大鼠随机分组:正常组、模型组、OP低剂量组、OP中剂量组、OP高剂量组。采用免疫组化、RT-PCR和Western blot方法分别检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原、NF-κB、iNOS的表达。吖啶橙/溴化乙锭双重染色分析肝星状细胞(HSC)凋亡。结果(1)免疫组化结果显示:与模型组比较,正常组、OP干预组的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白均减少,差异有统计学意义(P<0.05);OP低剂量组、OP中剂量组与OP高剂量组之间Ⅰ、Ⅲ型胶原表达两两比较差异有统计学意义(P<0.05);(2)模型组与OP低剂量组HSC凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05);经中高剂量OP干预后HSC凋亡率与其他各组比较明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);(3)RT-PCR和Western blot结果显示:正常组仅少量NF-κB、iNOS表达,模型组NF-κB、iNOS表达明显增多,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。OP干预组NF-κB、iNOS表达较模型组明显减少,且随OP剂量增加NF-κB、iNOS表达逐渐减少,各干预组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论OP可以抑制大鼠肝纤维化,呈剂量依赖性,抗肝纤维化机制可能与抑制NF-κB/iNOS途径有关。; 邓凯翔黄津; 关键词：诱导型一氧化氮合成酶核因子-ΚB

RBM10,Caspase-9和内皮一氧化氮合成酶(eNOS)在早中期胚胎蜕膜组织的表达: 2021年; 目的:研究RBM10,caspase-9和eNOS在早中期胚胎蜕膜组织中的表达及意义。方法:通过培育孕鼠获得6.5~9.5 d胚胎蜕膜组织,制作组织蜡块切片。采用免疫组化技术检测RBM10、caspase-9和eNOS在早中期蜕膜组织中的表达,应用ImageProPlus图像处理软件分析图像。结果:(1)RBM10表达于蜕膜细胞核,合体滋养层细胞核及子宫腺上皮细胞核,caspase-9表达于蜕膜腺上皮细胞质及部分基质细胞胞质。(2)Caspase-9在孕鼠8.5 d的蜕膜组织中表达高于6.5 d、9.5 d(P<0.05);RBM10在孕鼠8.5 d的子宫蜕膜中表达高于6.5 d,且在8.5 d时达高峰后下降,9.5 d时的表达低于8.5 d(P<0.05);eNOS在孕鼠蜕膜化的6.5 d、8.5 d和9.5 d呈弱阳性表达,且8.5 d时的表达水平高于9.5 d(P<0.05)。结论:caspase-9、RBM10和eNOS可能参与了子宫早中期蜕膜化过程及胚胎组织的生长与分化调控。; 闫风智刘瑶蒋立任亚萍杨森卢德杰; 关键词：胚胎蜕膜 CASPASE-9

点带石斑鱼脑组织和视网膜中神经型一氧化氮合成酶的分布与定位: 2021年; 【目的】研究点带石斑鱼脑组织和视网膜中的一氧化氮(NO)含量及神经型一氧化氮合成酶(nNOS)分布与活性,为深入揭示NO在点带石斑鱼神经系统中的作用机制打下基础。【方法】采用NADPH-d组织化学染色法、免疫组织化学法、蛋白免疫印迹(Western blotting)及Griess试剂法,对点带石斑鱼脑组织和视网膜中nNOS的分布与活性及NO含量进行分析。【结果】经NADPH-d组织化学染色后,一氧化氮合成酶(NOS)阳性物质呈蓝色。在点带石斑鱼大脑中,NOS阳性物质位于神经元和神经纤维;在小脑中,NOS分布在颗粒层的颗粒细胞、分子层的神经纤维和浦肯野细胞层的浦肯野细胞;在视网膜中,NOS分布于色素上皮层、视锥视杆层、外核层、外网层、内核层、内网层、节细胞层和视神经纤维层。经免疫组织化学染色后,nNOS阳性物质呈深棕色。在大脑中,nNOS存在于神经元和神经纤维;在小脑中,nNOS分布在颗粒层、分子层和浦肯野细胞层;在视网膜中,nNOS分布在色素上皮层、视锥视杆层、外核层、外网层、内核层、内网层、节细胞层和视神经纤维层。Western blotting检测结果显示,点带石斑鱼脑组织和视网膜中的nNOS在显色后的硝酸纤维素膜上均出现3条免疫印迹条带,对应分子量分别为80、120和130 kD。NO含量在点带石斑鱼脑组织和视网膜中分别为17.601±1.743和13.624±1.249μmol/L,nNOS活性在脑组织和视网膜中分别为38.070±3.047和23.748±2.860 U/mg。【结论】在点带石斑鱼脑组织和视网膜中均存在nNOS,推测nNOS在点带石斑鱼脑神经及视神经系统生理活动中发挥重要作用。脑组织中的NO含量和n NOS活性均显著高于视网膜,是由于脑组织作为重要的中枢神经,对机体生理功能起重要调节作用。; 白帆孙敬锋张胜根韩卓然吕爱军胡秀彩; 关键词：点带石斑鱼脑组织视网膜免疫组织化学定位

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