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- 姚敏秦艳艳陆毓铭王仪含居林玲沙春秀阮甜甜姚登福
- 一种胰腺癌相关糖尿病体外细胞模型的构建方法
- 本发明公开一种胰腺癌相关糖尿病体外细胞模型的构建方法,将人原位胰腺腺癌细胞和大鼠胰岛细胞瘤细胞采用非接触共培养方式搭建共培养体系,两种细胞之间既存在一定的相互联系,又可以相互分离,从而可以对人原位胰腺腺癌细胞和大鼠胰岛细...
- 马俊楠尚东张琳刘艺李沛雨赵丹萍隋雪杨雨桐夏仑越
- 基于间充质干细胞的小鼠急性移植物抗宿主病骨髓微环境损伤体外细胞模型的建立与评价策略研究
- 2024年
- 目的:建立小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)骨髓微环境损伤的体外细胞模型并进行评价。方法:以6-8周龄雌性C57BL/6N小鼠作为骨髓和淋巴细胞的供体,6-8周龄雌性BALB/c小鼠作为aGVHD模型的受鼠。受鼠接受致死剂量(8.0 Gy,72.76 cGy/min)γ射线全身照射后6-8 h内,尾静脉输注供鼠来源骨髓细胞(1×10^(7)/只),建立骨髓移植(BMT)组小鼠模型(n=20);尾静脉输注供鼠来源骨髓细胞(1×10^(7)/只)及脾脏淋巴细胞(2×10^(6)/只),建立小鼠aGVHD模型(n=20)。造模后d 7麻醉小鼠,摘取眼球取血,静置离心后吸取血清。分离小鼠间充质干细胞(MSC),分别用添加了2%、5%和10%的BMT组血清和相同浓度的aGVHD组血清的培养基进行培养。通过成纤维细胞集落形成实验(CFU-F)评价两组血清对MSC集落形成能力的影响;通过CD29和CD105免疫荧光染色评价两组MSC表面分子表达的差异;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MSC自我更新相关基因Oct-4、Sox-2和Nanog的表达情况。结果:成功建立起可以模拟小鼠aGVHD骨髓微环境损伤的体外细胞模型。CFU-F实验表明,在培养后d 7,与BMT组相比,aGVHD血清浓度为2%和5%时,MSC集落形成能力显著降低(P<0.05);在培养后d 14,与BMT组相比,不同aGVHD血清浓度组MSC集落形成能力均显著降低(P<0.05)。免疫荧光染色实验表明,MSC表面分子CD29^(+)和CD105^(+)细胞百分比在不同aGVHD血清浓度组较BMT组均降低,在aGVHD血清浓度为10%时差异最为显著(P<0.001,P<0.01)。RT-qPCR检测结果显示,aGVHD血清浓度组MSC自我更新相关基因Oct-4、Sox-2和Nanog表达下降,在aGVHD血清浓度为10%时差异最为显著(P<0.01,P<0.001,P<0.001)。结论:不同浓度的小鼠aGVHD血清和小鼠MSC共同培养,发现添加不同浓度的小鼠aGVHD血清MSC的自我更新能力受损程度不同,为开展aGVHD骨髓微环境损伤领域研究提供了新的工具。
- 田家仪李佩霖汤杰许润香尹博丰王飞燕李晓彤宁红梅朱恒丁丽
- 关键词:造血干细胞移植急性移植物抗宿主病骨髓微环境间充质干细胞自我更新
- 一种煤尘纳米颗粒暴露致肺损伤体外细胞模型及其构建方法和应用
- 本发明涉及细胞生物学技术与应用技术领域,特别是涉及一种煤尘纳米颗粒暴露致肺损伤体外细胞模型及其构建方法和应用。本发明提供一种煤尘纳米颗粒暴露致肺损伤体外细胞模型的构建方法,包括:采用煤尘纳米颗粒暴露处理AT2细胞后,进行...
- 张殷慈张医浩周淑萍刘新矿蒋灿灿陈倩王鑫鑫陈紫君盛晓曼
- 肝纤维化体外细胞模型研究的概况与展望
- 2023年
- 肝纤维化的发病率和不良结果发生率高,在治疗方面尚未有公认特异有效的化学药物和生物制剂,缺乏稳健且具有代表性的肝纤维化体外模型是阻碍抗肝纤维化药物研发的主要原因之一。现总结肝纤维化体外细胞模型研发的最新进展,重点分析基于肝星状细胞的诱导激活、细胞共培养及3D模型共建的肝纤维化体外模型,同时还基于肝窦内皮细胞展望了建立肝纤维化体外模型的潜在方法。
- 武庆娟吕文良
- 关键词:体外模型细胞模型肝星状细胞肝窦内皮细胞
- 一种雌激素诱导的前列腺纤维化体外细胞模型的构建方法
- 本发明属于细胞模型构建技术领域,公开了一种雌激素诱导的前列腺纤维化体外细胞模型的构建方法,该方法以人类正常前列腺基质细胞系WPMY‑1细胞为模型,以不同浓度雌激素作为诱导剂刺激WPMY‑1细胞,通过CCK8检测细胞存活率...
- 李媛媛田野井沆陈小龙孙发
- 基于软骨细胞分离培养的骨痹体外细胞模型的建立被引量:1
- 2023年
- 目的建立骨痹体外软骨细胞炎症模型,为研究骨关节炎(osteoarthritis,OA)的中医药治疗机制提供细胞学基础。方法采用胶原酶法进行人软骨细胞的分离培养,观察其形态学,Ⅱ型胶原(collagenⅡ,COLⅡ)免疫荧光染色法鉴定软骨细胞,细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)检测各浓度梯度的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对软骨细胞生长活性的影响,选择浓度分别为500、100、20、10、2 ng·mL^(-1)的LPS经0、4、6、12、24 h诱导软骨细胞后,Elisa法检测各组细胞上清液中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)的含量,筛选最佳干预浓度及时间。结果分离培养的细胞光镜下观察符合软骨细胞形态学,COLⅡ免疫荧光染色呈阳性,具备软骨细胞特征。与对照组比较,加入差异浓度LPS的各实验组软骨细胞存活率(survival rate,SR)随LPS浓度升高呈逐渐下降趋势,而抑制率(inhibition rate,IR)则逐渐上升,呈浓度依赖性。其中高浓度的LPS对软骨细胞生长有一定的抑制作用,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),其他各组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。软骨细胞上清液中IL-6和MMP-3在LPS浓度为10 ng·mL^(-1),干预时间为24 h时达到最大浓度(P<0.05)。结论本研究成功分离培养软骨细胞,并提供了一种建立骨痹体外软骨细胞炎症反应模型的优选方式,有利于中医药治疗策略在骨痹中的进一步研究。
- 王欢唐学章舒骏陈玮王洋丁海涛齐蕊涵杨帆陈剑史榕荇
- 关键词:骨痹软骨细胞体外炎症模型
- 粪肠球菌在体外细胞模型和乳鼠轮状病毒感染模型中对轮状病毒SA11株复制的抑制作用被引量:1
- 2023年
- 目的:探讨加入粪肠球菌后轮状病毒SA11株在体内和体外的复制情况,为阐明粪肠球菌影响轮状病毒感染提供依据。方法:体外实验,将108~1012 CFU·mL^(-1)粪肠球菌进行10倍浓度梯度稀释,与Caco-2细胞共培养12、18、24、30和48 h,同时设对照组(Caco-2细胞感染轮状病毒后不加入粪肠球菌),采用CCK-8法检测不同浓度粪肠球菌作用后各组Caco-2细胞存活率;感染复数(MIO)值为0.1的轮状病毒作用于Caco-2细胞1 h后加入108~1012 CFU·mL^(-1)粪肠球菌培养18 h,同时设对照组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组Caco-2细胞中轮状病毒VP6基因拷贝数,免疫荧光灶法检测各组Caco-2细胞中轮状病毒滴度。体内实验,采用18窝4~5日龄SPF级昆明系乳鼠,相同窝数随机分为对照组、抗生素处理组和粪肠球菌移植组,抗生素处理组和粪肠球菌移植组乳鼠先用四联抗生素灌胃3 d耗竭其肠道菌群,然后3组乳鼠开始每日灌胃107 FFU·mL^(-1)轮状病毒100μL,持续8 d,粪肠球菌移植组乳鼠在灌胃病毒同时灌胃1010 CFU·mL^(-1)粪肠球菌100μL,收取病毒感染第2、4、6和8天各组乳鼠粪便,RT-qPCR法检测各组乳鼠粪便中轮状病毒拷贝数。结果:体外实验,CCK-8法检测,与对照组比较,不同浓度粪肠球菌作用48 h内各组Caco-2细胞存活率均有不同程度升高,表明粪肠球菌在该浓度范围内对Caco-2细胞无毒性;RT-qPCR法检测,与对照组比较,1010、1011和1012 CFU·mL^(-1)粪肠球菌组Caco-2细胞中轮状病毒VP6基因拷贝数分别降低了75.8%、99.9%和99.9%(P<0.05);免疫荧光灶法检测,与对照组比较,108、1010和1012 CFU·mL^(-1)粪肠球菌组Caco-2细胞中轮状病毒滴度分别降低13%、77%和100%(P<0.05)。体内实验,与对照组比较,粪肠球菌移植组乳鼠粪便中病毒基因拷贝数明显减少(P<0.05)。结论:在体外细胞模型和乳鼠感染轮状病毒模型中粪肠球菌对轮状病毒的复制均发挥抑制作用。
- 刘洋于美玲程美慧刘长城贾雪娇刘梦琦李永刚赵微
- 关键词:粪肠球菌轮状病毒益生菌
- 基于体外细胞模型的痹祺胶囊药效物质基础研究被引量:1
- 2023年
- 目的 探究痹祺胶囊祛风除湿、活血止痛功能的药效物质基础。方法 通过建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7体外炎症模型、细胞核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage-stimulating factor,M-CSF)与RAW264.7细胞共培养建立破骨细胞分化模型、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞RA-HFLS增殖模型,分别探讨痹祺胶囊发挥抗炎活性、抑制破骨细胞形成、抑制RA-HFLS细胞增殖的作用机制及药效物质基础。MTS法检测细胞增殖活性,ELISA法检测细胞上清中一氧化氮(nitric oxide,NO)、TNF-α和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量,TRAP染色法检测破骨细胞分化数量,流式细胞术检测细胞凋亡情况,RT-qPCR法检测细胞中组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、RANKL mRNA相对表达情况。结果 痹祺胶囊及其19个单体成分均能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞内NO、TNF-α和IL-6的释放,推测19个化合物是痹祺胶囊发挥抗炎作用的药效物质基础。痹祺胶囊及其13个单体成分均能显著减少RANKL和M-CSF诱导RAW264.7分化为破骨细胞的数量,并能明显降低破骨细胞标志基因CTSK和TRAP的相对表达量,推测马钱子碱、士的宁、党参炔苷、茯苓酸、丹参素、丹酚酸B、迷迭香酸、三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)、藁本内酯、甘草次酸和甘草苷为痹祺胶囊发挥治疗骨破坏、缓解关节疼痛作用的主要物质基础。痹祺胶囊及其9个单体成分能明显抑制TNF-α诱导的RA-HFLS细胞增殖,并且能显著促进RA-HFLS细胞的凋亡以及明显降低MMP-3和RANKL基因的相对表达量,推测马钱子碱、士的宁、丹参素、丹
- 宋紫腾卜睿臻韩彦琪王磊姚鹏飞许浚张铁军刘昌孝
- 关键词:痹祺胶囊药效物质基础藁本内酯蜕皮甾酮次黄嘌呤
- 三种模拟创伤性脑损伤体外细胞模型的损伤特征比较
- 2023年
- 目的系统比较拉伸模型、氧-糖剥夺(OGD)模型以及过氧化氢(H2O2)处理的氧化应激模型的细胞损伤特征,为TBI研究中细胞模型的选择提供参考。方法复苏冻存的HT-22细胞后,将HT-22细胞接种于六孔板中,分为实验组和对照组,实验组分别制备细胞拉伸损伤模型、OGD模型、氧化应激损伤模型,对照组正常培养,不做特殊处理。通过显微镜观察细胞形态的变化,CCK-8实验分析测试细胞活力;提取细胞蛋白,采用Western blot检测凋亡(Bcl-2、Bax)、坏死性凋亡(RIPK3、RIPK1)、铁死亡(ACSL4、GPX4、SLC7A11)等不同细胞死亡途径的标志物变化。结果与对照组相比,实验组的3种损伤模型均导致HT-22细胞出现不同程度的形态异常、增殖受限或脱落现象。CCK-8检测结果显示,不同模型处理后细胞存活率均较对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,3.0 PSI强度的拉伸处理后细胞中的GPX4、SLC7A11、Bax、RIPK3、RIPK1蛋白表达较对照组明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05);OGD处理12 h后,SLC7A11和Bax表达较对照组明显上调,差异均有统计学意义(P<0.05);800μmol/L的H_(2)O_(2)处理后,Bcl-2和RIPK1蛋白较对照组表达明显上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论拉伸损伤模型更能反映TBI后复杂的损伤特点,OGD与H2O2处理模型更适合用于研究特定的损伤通路。
- 阿迪莱·阿卜杜热西提费奥邢晓雯谢胜强张睿兰晓娟程岗
- 关键词:创伤性脑损伤氧化应激凋亡
相关作者
- 吴兵
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- 刘苏
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- 张徐祥
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- 朱虎成
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