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携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV对人宫颈癌HeLa细胞的作用研究: 本课题组采用RAPAd.I包装系统，构建了重组腺病毒ATV(Ad-Apoptin-hTERTp-E1A)和Ad-MOCK。ATV是由肿瘤特异性启动子（hTERTp，人端粒酶逆转录酶）、启动E1A（病毒复制必需基因）、巨细...; 尹逊哲; 关键词：宫颈癌凋亡素基因 HELA细胞

一种自组装多肽—凋亡素基因复合纳米颗粒及其制备方法和应用: 本发明公开了一种自组装多肽—凋亡素基因复合纳米颗粒及其制备方法和应用。本发明所述的自组装多肽—凋亡素基因复合纳米颗粒是由自组装多肽作为载体，通过自身的酸性氨基酸和碱性氨基酸所带的电荷与携带凋亡素基因的质粒分子之间形成离子...; 狄勇彭传梅; 文献传递

携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用被引量：8: 2017年; 目的:探讨携带凋亡素基因(apopptin)的溶瘤腺病毒ATV感染对人宫颈癌HeLa细胞自噬和凋亡的影响。方法:分别用携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV与对照病毒Ad-MOCK(均为前期工作构建)感染HeLa细胞后,应用WST-1法检测ATV感染对HeLa细胞增殖的影响,流式细胞术检测ATV感染对HeLa细胞凋亡和细胞周期的影响,Western blotting法检测ATV感染对HeLa细胞自噬相关蛋白LC3、P62与mTOR表达的影响,MDC染色法检测ATV感染对HeLa细胞自噬水平的影响。结果:ATV感染后抑制HeLa细胞增殖,并具有一定的时间效应关系;以ATV 100 MOI感染72 h后抑制率达到59.26%,其抑制能力明显强于同时间段对照组(P<0.01)。ATV感染48 h,ATV组HeLa细胞凋亡率显著高于对照组[(38.995±4.009)%vs(14.680±1.174)%,P<0.01]。感染后的HeLa细胞,随着ATV作用时间的延长,S期出现阻滞,48 h阻滞最强,显著高于对照组[(58.490±2.447)%vs(43.235±4.419)%,P<0.05]。与对照组相比,ATV感染HeLa后,LC3表达量6、12 h逐渐增高,12 h达到最大值(P<0.01),24 h表达量最低(P<0.01);P62蛋白在24 h出现最高表达水平(P<0.01);而mTOR随着作用时间延长逐渐降低(48 h时,P<0.01)。荧光显微镜下可见HeLa细胞核周区域MDC阳性染色,随着ATV作用时间延长,自噬小体明显增多;与对照组相比,6、12h自噬小体数量显著增多[(28.000±2.828)vs(8.500±2.121),(37.000±4.243)vs(14.000±1.414);均P<0.01],24 h相对减少[(12.000±2.828)vs(17.000±1.414),P<0.01]。结论:携带凋亡素基因的ATV溶瘤腺病毒可促进人宫颈癌HeLa细胞的凋亡和自噬水平,进而特异性杀伤肿瘤细胞。; 尹逊哲陈爽李文杰朱羿龙李一权崔传信李敏李敏赵津李善智郑颖郑颖孙丽丽郭焱郭焱; 关键词：宫颈癌 HELA细胞凋亡素基因溶瘤腺病毒自噬凋亡

鸡贫血病毒凋亡素基因的可溶性融合表达及抗肿瘤活性分析: 2017年; 为获得高效可溶表达的鸡贫血病毒凋亡素基因(CAV-Apoptin),根据大肠杆菌密码子偏爱性优化CAV-Apoptin基因序列,将其连接到含msyB伴侣基因的pBCX载体上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定后应用镍柱亲和层析纯化蛋白质,采用显微镜观察、CCK-8实验与DNA ladders测定其抗肿瘤细胞的活性。结果显示,成功构建大肠杆菌表达载体pBCX-CAV-Apoptin,在37℃正常培养条件下的大肠杆菌中得到大量可溶性表达产物,融合蛋白质分子量大小约为42 kDa,50 ml菌液即可获得1.5 mg左右的纯化重组蛋白,CCK-8实验结果显示纯化后的重组蛋白作用36 h后可对套氏淋巴瘤JEKO-1、REC-1细胞生长产生超过60%的抑制率;显微镜观察与DNA ladder实验证明重组蛋白可诱导JEKO-1、REC-1细胞的凋亡,对HUVEC没有诱导凋亡的作用。免疫印迹分析表明重组凋亡素对JEKO-1细胞诱导了Caspase-3的激活,而对Caspase-8的表达没有影响。研究表明融合蛋白msyB-CAV-Apoptin可达到高效可溶表达,且表达产物具有特异抗肿瘤活性。; 冀君朱晨晨许鑫刘晓冷超粮史鸿飞姚伦广阚云超; 关键词：凋亡素鸡贫血病毒高效可溶性表达活性分析

携带凋亡素基因的重组腺病毒对人肺鳞癌细胞SK-MES-1、人肺腺癌细胞NCI-H1299凋亡的影响: 2015年; 目的:研究携带凋亡素基因VP3的重组腺病毒载体Adxsi-GFP-VP3对人肺鳞癌细胞SK-MES-1、人肺腺癌细胞NCI-H1299的凋亡的影响。方法:取对数生长期SK-MES-1、NCI-H1299细胞,各分为重组腺病毒(Adxsi-GFP-VP3)组、空病毒(Adxsi-GFP)组和细胞对照(磷酸盐缓冲液)组,依次记为A、B、C组。采用逆转录-聚合酶链反应和Western blot法检测A、B组细胞转染48、72 h的VP3 mRNA和Apoptin表达情况,透射电镜观察A组细胞转染72 h的超微结构变化。采用MTT法检测3组细胞转染24、48、72、96 h的细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞转染后24、48、72 h的凋亡率及细胞周期变化。结果:与B组比较,A组SK-MES-1、NCI-H1299细胞转染48 h后有VP3 mRNA表达,转染72 h后有Apoptin表达。A组转染72 h后SK-MES-1、NCI-H1299细胞均出现细胞凋亡的超微结构改变。与B、C组比较,A组SK-MES-1、NCI-H1299细胞增殖活性降低、细胞凋亡率增加,且与转染时间呈正相关;转染72 h S期的SK-MES-1、NCI-H1299细胞比例降低、G2/M期细胞比例增加。以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:Adxsi-GFP-VP3能有效诱导SK-MES-1、NCI-H1299细胞凋亡。; 阮军吴友茹缪李丽; 关键词：凋亡

携带凋亡素基因重组腺病毒的制备及诱导结肠癌细胞凋亡的实验研究被引量：1: 2015年; [目的]利用细菌内同源重组法构建携带凋亡素VP3基因的重组腺病毒并观察其体外诱导结肠癌细胞凋亡的作用。[方法]设计VP3 c DNA扩增引物,从PET15b-VP3质粒中扩增VP3的DNA序列,与线性p Shuttle-IRES-hr GFP连接构建p Shuttle-VP3-hr GFP重组穿梭质粒,PCR和Eco RⅤ酶切电泳鉴定;重组穿梭质粒经Pmel酶切线性化后,转化含p Adeasy-1的超感受态BJ5183大肠杆菌,细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒p Ad-VP3-hr GFP,PCR、Pac I酶切电泳及测序鉴定;线性化重组腺病毒质粒经脂质体转染AD293细胞进行p Ad-VP3-hr GFP重组腺病毒的包装和扩增,Cs CI密度梯度离心法进行病毒浓缩和纯化并将其作用人结肠癌SW480细胞,观察其对细胞凋亡及周期分布的影响。[结果]p Shuttle-VP3-hr GFP重组穿梭质粒构建成功;p Ad-VP3-hr GFP重组腺病毒质粒经酶切获得一大于23kb的大片段和4.5kb的片段,PCR反应扩增出402bp的片段,测序证实VP3-hr GFP编码区成功克隆入腺病毒p Ad中,且其序列与Gene Bank中VP3序列完全一致;成功包装出携带VP3基因的腺病毒,滴度为1.738×1012opu/ml,重组腺病毒可阻滞结肠癌细胞周期于G0/G1期,诱导细胞凋亡,MOI值越大作用效应越显著(P<0.05,P<0.01)。[结论]细菌内同源重组法可快速、高效制备携带凋亡素基因的重组腺病毒,并具有较强的抗肿瘤作用,为深入研究VP3基因功能提供了选择。; 邓守恒陈萍蔡晓军李林均曹风军; 关键词：同源重组腺病毒凋亡素结肠肿瘤

一种自组装多肽—凋亡素基因复合纳米颗粒及其制备方法和应用: 本发明公开了一种自组装多肽—凋亡素基因复合纳米颗粒及其制备方法和应用。本发明所述的自组装多肽—凋亡素基因复合纳米颗粒是由自组装多肽作为载体，通过自身的酸性氨基酸和碱性氨基酸所带的电荷与携带凋亡素基因的质粒分子之间形成离子...; 狄勇彭传梅; 文献传递

携带鸡贫血病毒凋亡素基因重组腺病毒质粒的构建及鉴定: 2015年; 目的构建携带鸡贫血病毒凋亡素VP3基因的重组腺病毒质粒。方法设计VP3 c DNA扩增引物,从PET15b-VP3质粒中扩增VP3的DNA序列,与线性p Shuttle-IRES-hr GFP-2连接,PCR和EcoRⅤ酶切电泳鉴定;穿梭质粒p Shuttle-VP3-EGFP经Pmel酶切线性化后,转化含p Adeasy-1的超感受态BJ5183大肠杆菌,细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒p Ad-VP3-EGFP,质粒经PCR、Pac I酶切电泳及测序鉴定。结果线性化的p Shuttle-VP3-EGFP转化含p Adeasy-1的超感受态BJ5183大肠杆菌,重组质粒经酶切获得一大于23 kb的大片段和4.5 kb的片段,PCR反应扩增出了402 bp的片段,重组质粒测序证实VP3-EGFP编码区成功克隆入了腺病毒p Ad中,且其序列与Gene Bank中VP3 CDNA序列完全一致。结论用细菌内同源重组法可快速、高效地制备携带凋亡素VP3基因的重组腺病毒质粒,为深入研究VP3的抗肿瘤效应及机制奠定了基础。; 邓守明蔡召忠; 关键词：同源重组凋亡素腺病毒

TAT-凋亡素基因修饰T细胞的方法: 本发明涉及一种TAT-凋亡素基因修饰T细胞的方法，将TAT-凋亡素基因从pUC57-TAT-apoptin中亚克隆至Ad5/F35MaxTM系统的穿梭载体pDC316中，构建穿梭质粒pDC316-TAT-凋亡素；将步骤a...; 陆玲玲张俊红叶永清苏国新; 文献传递

CARD18在凋亡素基因转染的胃癌细胞的表达及其在临床样本中的检测和意义: 2013年; 目的探讨caspase募集结构域家族成员18(CARD18)在凋亡素诱导胃癌细胞凋亡的机制及在胃癌发生发展中的作用。方法运用二维凝胶电泳法分离凋亡素作用胃癌细胞后表达的差异蛋白质,通过基质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)和生物信息学方法确定其中部分差异蛋白质,RT-PCR和Western blot法检测CARD18的表达,采用免疫组化检测56例胃癌组织及癌旁组织中CARD18的表达,并分析其与胃癌临床病理参数的关系。结果凋亡素处理后的胃癌细胞CARD18表达下调最明显,CARD18蛋白在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.05),且与胃癌的分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 CARD18可作为一个潜在的预后标志物和靶向标志物。; 谭翠刘少宁向展华; 关键词：凋亡素胃癌细胞凋亡胃癌

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