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一种重组蛋白包涵体复性与纯化的方法: 本发明涉及一种重组蛋白包涵体复性与纯化的方法，通过在包涵体复性液中添加精氨酸提高复性后蛋白的稳定性，同时，调整稀释复性中的精氨酸浓度、静置时间、浓缩倍数等工艺参数，进一步提升变性包涵体蛋白的复性效果，提高所述方法中变性包...; 朱克骏肖文俊陈京生王世玲屈帅杰来晓东江秋虹陶立峰

重组人PAI-1蛋白包涵体复性的复性缓冲液以及方法: 本发明提供了一种重组人PAI‑1蛋白包涵体复性的复性缓冲液以及方法，复性缓冲液包括：10～50mM乙酸钠，100～500mM NaCl，1～10mM Triton X‑100，1～10％甘油，0.5～1.5M葡萄糖，0....; 贾江花赵金华邹继华杨克群周海涛毛美波朱跃骅何进军

一种包涵体复性集约装置: 本实用新型公开了一种包涵体复性集约装置，复性液泵设置与变性液泵相连接后进入滤筒中的滤芯中，澄清颗粒物的同时，稀释后的蛋白暂存在滤筒中延长了复性时间，澄清后的复性蛋白通过滤出泵控制滤出速度进入超滤循环泵浓缩与超滤储液混合后...; 朱希灿; 文献传递

一种包涵体复性集约装置: 本发明公开了一种包涵体复性集约装置，复性液泵设置与变性液泵相连接后进入滤筒中的滤芯中，将过滤后的复性液滤除复性液中的杂质，包括菌体碎片宿主DNA以及复性不完全不溶包涵体颗粒性杂质，同时复性液在滤筒中进一步正确折叠复性，澄...; 朱希灿

重组蛋白ApSerpin-FA72的包涵体复性及活性研究被引量：1: 2019年; [目的]原核表达及制备重组光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂(Ap Serpin-FA72),探索包涵体最优复性条件与最适酶反应条件。[方法]采用超声破碎获得大量包涵体,通过包涵体的洗涤、包涵体的溶解方法对包涵体进行纯化,获得高纯度的包涵体进行复性液成分与复性方法的摸索。测定Trx A-Ap Serpin-FA72对胰蛋白酶的IC50、最适反应p H和最适反应温度。[结果]在32℃、180 r/min、0. 4 mmol/L IPTG浓度下以沉淀形式表达大量蛋白,通过包涵体复性在含有L-精氨酸复性液中获得有生物活性的Trx A-Ap Serpin-FA72,对胰蛋白酶的IC50为0. 48μmol/L,p H在7~9,温度在60℃时有较高的抑制活性。[结论]L-精氨酸是复性液中重要的组成部分,复性的重组蛋白Trx A-Ap SerpinFA72对胰蛋白酶有较强的抑制能力,是一种热稳定较好的弱碱性胰蛋白酶抑制剂。; 贾洋洋张蕊刘阳刘忠渊; 关键词：丝氨酸蛋白酶抑制剂复性包涵体活性检测

重组大肠杆菌表达外源蛋白包涵体复性的研究进展被引量：9: 2018年; 重组蛋白在宿主系统中高水平表达时,都可形成无活性的包涵体,须经洗涤、溶解、复性后才能得到生物活性蛋白。本文阐述了包涵体传统复性方法和近年来发展的层析复性法、反胶团复性法等新的复性方法。; 牟筱宗惠宫皓杨焱余四九; 关键词：重组大肠杆菌包涵体复性

重组人白血病抑制因子的表达、包涵体复性、纯化及其活性被引量：2: 2018年; 白血病抑制因子（LIF）是一种在生物体内具有独特活性和重要调节作用因而广泛应用的多功能细胞因子.利用基因工程技术表达重组人白血病抑制因子（Recombinant human leukemia inhibitory factor,rhLIF）并进行包涵体的复性及纯化,将rhLIF基因克隆到原核表达载体pET32a中,成功构建重组hLIF基因工程菌,并研究该菌株发酵条件和纯化工艺.先将种子液进行发酵培养,诱导表达,收集诱导后的细胞;对细胞破碎,收集包涵体沉淀,洗涤包涵体;用6 mol/L盐酸胍变性重溶包涵体,镍离子亲和层析柱上直接复性及纯化,并用阴离子交换进一步纯化,复性率为75%,纯度达97%.结果显示基因序列与理论序列一致,SDS-PAGE分析结果表明其表达的外源蛋白质分子量与预期的目的蛋白质相对分子量大小相一致,均为35×10~3;Western blotting、MTT活性检测结果表明,此重组hLIF融合蛋白具有良好的抗原性和免疫原性.本研究成功建立了rhLIF原核表达、复性和纯化体系,可为进一步研究LIF生物学活性及产品开发提供试验基础.; 张鹤铭焦雪苗甘龙站田杰伟田永强; 关键词：白血病抑制因子包涵体复性纯化活性检测

内生真菌Shiraiasp.Slf 14中菊粉酶基因的克隆、表达及包涵体复性: 2018年; 为了实现内生真菌Shiraia sp.Slf 14菊粉酶基因在大肠杆菌中的高效表达,建立有效的包涵体复性技术,获得有活性的重组菊粉酶,本研究通过提取Shiraia sp.Slf 14的总RNA,反转录合成cDNA,设计PCR引物扩增出菊粉酶基因,将其克隆至pET-22b（＋）载体后转入E.coli BL21（DE3）,利用SDS-PAGE法检测IPTG诱导表达后重组蛋白的表达情况,并进一步检测了包涵体复性及重组酶酶活情况,最终成功获得了相对分子量为62.07 kD的重组蛋白,成功复性包涵体,复性率为25.23%,重组菊粉酶活力为6.84 U/m L。本研究为活性重组菊粉酶的获得及包涵体复性提供了新的方法和依据。; 包建莹刘斌耿阳颜日明张志斌汪涯朱笃杨慧林; 关键词：内生真菌菊粉酶包涵体

VISTA-Ig融合蛋白的表达及其包涵体复性研究被引量：2: 2018年; [目的]构建VISTA-Ig融合蛋白表达载体,进行诱导表达获得VISTA-Ig融合蛋白。[方法]以C57BL/6小鼠脾脏细胞c DNA为模板,扩增小鼠VISTA胞外段基因,利用重叠延伸PCR的方法合成VISTA-Ig融合基因,构建重组质粒p ET-22b-VISTA-Ig,在大肠杆菌表达菌株E.coli BL21(DE3)中诱导表达。[结果]VISTA-Ig融合蛋白主要以包涵体的形式存在。变性后,利用镍柱纯化,通过采用氧化型/还原型谷胱甘肽(GSH/GSSG)复性体系,复性效率达到80%以上,提高了复性效率。利用r Protein A柱对目标蛋白进一步纯化,Western Blot鉴定结果显示,能与Ig G Fc(HRP)抗体特异性结合。[结论]成功构建了重组质粒p ET-22b-VISTA-Ig,纯化的VISTA-Ig包涵体蛋白复性效率得到明显提高,为后续VISTA-Ig免疫学功能的研究奠定了基础。; 张成龙康巧珍汲振余郭勋杜娟达甜甜汪文刘鑫; 关键词：包涵体复性融合蛋白

人胱抑素C大肠杆菌表达载体构建及包涵体复性研究被引量：2: 2018年; 构建大肠杆菌(E.coli)人胱抑素C基因(cysC)表达载体,并探究包涵体胞外复性方法.方法:将人胱抑素C基因克隆至原核表达载体pET32a上,电击转化至大肠杆菌BL21菌株中. IPTG诱导cysC表达,超声破碎后采用SDS-PAGE电泳检测CysC蛋白表达情况,并应用亲和层析和透析复性方法对CysC蛋白进行纯化和复性.结果:IPTG诱导培养重组菌BL21-cysC,可见沉淀和上清中均有pET32a-cysC蛋白表达,且沉淀中表达量更高.采用镍柱及透析方法对表达产物进行纯化,经SDS-PAGE检测,可见分子量约34kD大小的蛋白条带. Western Blotting检测显示经纯化、复性后的重组CysC蛋白具有一定免疫学活性.结论:本实验成功构建大肠杆菌cysC表达重组工程菌,经纯化、复性得到的重组CysC蛋白具有一定免疫活性.; 何庆刘帅周海霞; 关键词：胱抑素C 包涵体重组蛋白复性

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