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- 毛白杨半胱氨酸蛋白酶PtoCP1基因参与植物激素调控的叶片衰老
- 2024年
- 半胱氨酸蛋白酶在植物不同组织中的特异性表达发挥了多种功能.本文探究了毛白杨半胱氨酸蛋白酶PtoCP1基因在激素诱导下参与叶片衰老的机制.使用脱落酸(ABA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、乙烯(ACC)对杨树叶片进行处理,不同时间段后观察叶片表型、检测叶绿素含量以及PtoCP1基因相对表达量,发现激素诱导后的叶片黄化加速,叶绿素含量下降,同时PtoCP1表达量上调,而ptocp1突变体则延缓了叶片的衰老.进一步对PtoCP1启动子元件分析发现,其含有ABA、MeJA响应元件,因此以相应的ABA、MeJA激素分别处理含ProPtoCP1-GUS-pBI121重组载体的转基因拟南芥幼苗,并观察GUS染色差异和检测报告基因GUS的相对表达量.结果显示,ABA诱导下GUS染色加深,GUS表达量上升.综上所述,PtoCP1启动子可以通过响应ABA调控基因的表达,从而使植物对外界胁迫作出反应,引起叶片衰老,该研究为进一步理解激素诱导植物半胱氨酸蛋白酶参与叶片衰老的机制提供了理论支持.
- 国洪丽陈梦圆范雅为刘涵孙蕾倩刘迪李慧王馨陆海
- 关键词：启动子激素诱导
- 半胱氨酸蛋白酶-1基因缺陷对小鼠急性心肌梗死期血管屏障的影响
- 2023年
- 目的探讨半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)对小鼠急性心肌梗死期血管通透性的影响及其分子机制。方法本研究选取C57野生型(WT)小鼠和Caspase-1基因缺陷小鼠(Casp1-/-)为研究对象, 建立急性心肌梗死(AMI)模型;通过构建糖氧剥夺(OGD)模型来模拟内皮细胞中的AMI环境。2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法观察各组小鼠心梗面积的大小;免疫印迹法检测相关{1}表达水平的变化;免疫荧光染色法检测血管渗透性及观察各组黏附连接标志物的分布;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测法检测细胞因子浓度, 组间比较采用t检验。结果 Casp1-/--AMI组梗死区域面积低于WT-AMI组(33.83±7.01比56.78±11.60, t=2.93, P<0.05);Casp1-/--AMI组VE-cadherin的表达量高于WT-AMI组(0.87±0.14比0.43±0.11, t=4.37, P<0.05);OGD条件下VE-cadherin的表达具有相同的变化;Casp1-/--AMI组细胞因子浓度低于WT-AMI组[(57.41±5.34)、(52.40±6.00) pg/ml比(73.80±6.16)、(69.84±4.68) pg/ml, t=4.50、t=5.13, P<0.01];Casp1-/-+Echinulin组VE-cadherin的表达水平明显低于Casp1-/--normal组(0.31±0.05比0.95±0.15, t=7.23, P<0.01), 差异均有统计学意义。结论 Caspase-1基因缺陷可以通过调控核因子-κB通路发挥维持血管通透性, 保护心脏功能的积极作用。
- 梁敬天贾才力晁志祥张力秦西淳刘修成张昊
- 关键词：半胱氨酸蛋白酶-1急性心肌梗死核因子-ΚB
- 穴位埋线调控NOD样受体热蛋白结构域3/{1}-1信号通路抗溃疡性结肠炎损伤的机制研究被引量：4
- 2023年
- 目的:观察穴位埋线对“虚、瘀”状态下溃疡性结肠炎(UC)大鼠的治疗作用及对NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/{1}-1(Caspase-1)信号通路的调控作用,探讨穴位埋线治疗UC的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组10只和造模组48只,采用腺嘌呤、番泻叶分阶段灌胃,再予2,4,6-三硝基苯磺酸与乙醇复合物灌肠复制“虚、瘀”状态下UC大鼠模型。造模成功的大鼠按体质量随机分为模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组、非穴位埋线组和穴位埋线组,每组11只。穴位埋线组选“足三里”“天枢”“肾俞”等穴进行穴位埋线治疗,非穴位埋线组于大鼠臀部肌肉丰厚处进行埋线治疗,每14 d治疗1次,共治疗3次;SASP组予SASP溶液(50 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,每日1次,共治疗42 d。观察大鼠一般情况,计算大鼠疾病活动指数(DAI);测量各组大鼠结肠长度;肉眼评估结肠黏膜大体病理学改变,并进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分;HE染色评估结肠组织病理学改变,进行结肠病理损伤(TDI)评分;ELISA法检测各组大鼠血清NLRP3、白细胞介素(IL)-1β和IL-18含量;荧光定量PCR法检测各组大鼠结肠组织NLRP3、Caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1β及IL-18 mRNA水平;Western blot法检测各组大鼠结肠组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平;免疫组织化学染色法检测结肠组织ASC阳性表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量降低(P<0.01),结肠长度明显缩短(P<0.01),结肠黏膜形成明显溃疡面,隐窝破坏明显,大量炎性细胞浸润,DAI、CMDI及TDI评分升高(P<0.01),血清中NLRP3、IL-1β及IL-18含量升高(P<0.01),结肠组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA水平和Caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,穴位埋线组和SASP组体质量升高(P<0.01),大鼠结肠长度增长(P<0.01),结肠黏膜病理损伤明显减轻,DAI、CMDI及TDI评分显著降低(P<0.01),血�
- 谢超群陈凯孙豪娴董慧朱莹
- 关键词：穴位埋线炎性反应
- 人重组骨形态发生蛋白7通过下调{1}-1/焦孔素D信号通路抑制高糖诱导的近曲小管上皮细胞的焦亡
- 2023年
- 目的 观察人重组骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic protein-7,rhBMP-7)对高糖诱导的人肾皮质近曲小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)的焦亡和炎症反应的作用。方法 体外培养高糖(high glucose,HG)刺激的HK-2细胞模拟糖尿病肾病模型。分为正常浓度葡萄糖对照组(Control)、高浓度葡萄糖组(HG)、Control+rhBMP-7组、HG+rhBMP-7组。采用免疫荧光方法检测HK-2细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SAM)、焦孔素D(gasderminD, GSDMD)蛋白和焦孔素E(gasderminE, GSDME)蛋白;TUNEL染色检测细胞死亡情况;蛋白质印迹法检测各组HK-2细胞中焦亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、半胱氨酸蛋白酶-4(caspase-4)、半胱氨酸蛋白酶-5(caspase-5)、 N-GSDMD和GAPDH的表达;{10}联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组HK-2细胞培养上清液中炎症因子白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果 与Control组相比,高糖组HK-2细胞Tunel染色的阳性率明显增加,差异具有统计学意义(P<0.000 1),α-SMA蛋白和α-SMA mRNA表达量也显著增加(P<0.000 1),E-cadherin蛋白和Ecadherin mRNA表达量显著下降(P=0.000 6,P<0.000 1);HG组添加rhBMP-7后α-SMA蛋白和m RNA水平显著下降(P=0.011 7, P=0.002), E-cadherin蛋白和m RNA水平明显升高(P=0.001 5,P<0.000 1)。与对照组比较,HG组HK-2细胞GSDME/GSDMD蛋白的荧光信号明显增强。进而,HG组添加rhBMP-7后GSDME/GSDMD蛋白荧光信号显著减弱。同样,HG组HK-2细胞中焦亡相关蛋白caspase-1、caspase-4、caspase-5以及GSDMD的表达量显著高于对照组,差异明显(均P<0.001)。HG组添加rhBMP-7后焦亡相关蛋白的表达明显下降(分别P<0.001,P=0.002,P<0.001)。与对照组比较,HG组HK-2细胞培养上清液中IL-1β和IL-18蛋白浓度显著增加(均P<0.001)。进而导致rhBMP-7干预后HG组细胞上清液中IL-10和IL-1β蛋白�
- 魏凯悦米焱王彩丽吴雅茹张丁予高和平
- 电针预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌Gasdermin D、半胱氨酸蛋白酶-1及白细胞介素-1β表达的影响被引量：11
- 2022年
- 目的:观察电针预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌细胞焦亡相关蛋白{1}-1(Caspase-1)、Gasdermin D(GSDMD)、白细胞介素-1β(IL-1β)的影响,探讨电针预处理减轻MIRI损伤的可能机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、电针组,每组10只。电针组电针大鼠双侧“内关”,每次20 min,每日1次,连续3 d。采用冠状动脉左前降支结扎法复制MIRI大鼠模型。采用超声心动图观察造模4 h后大鼠左心室射血分数(LVEF)以评估心功能;TTC染色法观察大鼠心肌梗死面积;免疫组织化学法观察大鼠心肌组织中GSDMD表达情况;Western blot法检测心肌组织GSDMD、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平。结果:与空白组相比,假手术组心肌组织GSDMD表达升高(P<0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠术后4 h时LVEF明显下降(P<0.0001),梗死面积增大(P<0.0001),心肌组织GSDMD表达显著升高(P<0.0001),心肌GSDMD、Caspase-1、IL-1β蛋白表达升高(P<0.001,P<0.0001)。与模型组相比,电针组大鼠术后4 h时LVEF升高(P<0.001),梗死面积缩小(P<0.0001),心肌组织GSDMD表达降低(P<0.001),心肌GSDMD、Caspase-1、IL-1β蛋白表达降低(P<0.01,P<0.001)。结论:电针预处理可能通过下调Caspase-1蛋白的表达,降低心肌细胞焦亡水平,从而改善MIRI损伤。
- 夏雪峰刘雨晨卢圣锋卢圣锋徐森磊孙珂吴嘉宏顾一煌顾一煌
- 关键词：心肌缺血再灌注损伤电针预处理半胱氨酸蛋白酶-1
- 血清半胱氨酸蛋白酶-1、Gasdermin家族{1}D、Gasdermin家族{1}D-N端在银屑病患者血清及皮损中的表达和意义被引量：4
- 2022年
- 目的检测寻常型银屑病患者血清半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)及皮损Caspase-1、Gasdermin家族{1}D(GSDMD)、Gasdermin家族{1}D-N端(GSDMD-N)的表达水平,进一步探索细胞焦亡在银屑病中的作用。方法将进行期寻常型银屑病的30例患者纳入银屑病组(PSO组),收集30例患者的血清样本和其中20例患者的皮损样本,并收集同时期在苏北人民医院体检中心体检的30例健康者的血清和整形外科20例健康求美者的皮肤组织(皮损)纳入健康对照组(CON组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法(qRT-PCR)检测2组血清Caspase-1 mRNA的表达水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测2组血清Caspase-1的含量;采用{1}免疫印迹法检测2组皮肤组织中Caspase-1{1}的表达水平;采用免疫组织化学(IHC)法检测2组皮肤组织中GSDMD、GSDMD-N的表达及分布情况。结果PSO组患者血清中Caspase-1 mRNA表达水平高于CON组,差异有统计学意义(P<0.01)。PSO组血清中Caspase-1{1}表达水平为(1047.74±276.20)pg/mL,高于CON组的(371.20±160.84)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.01)。PSO组与CON组的Caspase-1总体{1}表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);PSO组皮损中的Pro-Caspase-1{1}表达水平低于CON组,Cleaved Caspase-1{1}表达水平和GSDMD{1}表达阳性率高于CON组,差异有统计学意义(P<0.01)。PSO组皮损中GSDMD-N{1}表达阳性率高于CON组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论进行期寻常型银屑病患者血清及皮损中Caspase-1和皮损中GSDMD、GSDMD-N表达增加,提示细胞焦亡通路可能参与寻常型银屑病的发生和发展。
- 张赛男陈菲菲李琳赵莎王小康朱国强朱晓芳
- 关键词：银屑病半胱氨酸蛋白酶-1
- 电针足三里对功能性消化不良大鼠十二指肠半胱氨酸蛋白酶-1和消皮素D的影响
- 2022年
- 目的探讨电针足三里对功能性消化不良(FD)大鼠十二指肠细胞焦亡的影响和可能的作用机制。方法将24只7日龄Sprague-Dawley(SD)大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、电针组,每组8只。模型组和电针组采用多因素诱导法(碘乙酰胺灌胃法+夹尾刺激法)制备FD大鼠模型。造模成功后,电针组大鼠给予针刺"足三里"穴后连接韩式穴位神经刺激仪治疗2周,空白组和模型组不予任何干预。于基线期、造模后、电针干预7 d和14 d后记录3组大鼠的体重,于电针干预结束后检测3组大鼠的胃排空率和小肠推进率,并采用酶联免疫法(ELISA)检测其血清白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测3组大鼠十二指肠IL-1β和IL-6转录水平,采用免疫印迹法检测3组大鼠十二指肠半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)p20和消皮素D(GSDMD)蛋白表达水平。结果造模成功后,模型组和电针组大鼠的平均体重与空白组造模成功后比较,差异均有统计学意义(P<0.01);电针干预7 d和14 d后,模型组和电针组大鼠的平均体重与空白组同时间点比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且电针组电针干预7 d和14 d后的平均体重与模型组同时间点比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。电针干预结束后,电针组大鼠胃内残留率和小肠推进率与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),而模型组大鼠胃内残留率和小肠推进率与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。电针干预结束后,模型组和电针组大鼠血清中IL-1β和IL-6表达水平、十二指肠组织IL-1β和IL-6 mRNA的表达水平和十二指肠组织GSDMD、caspase-1 p20蛋白表达水平与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),且电针组大鼠血清中IL-1β和IL-6表达水平、十二指肠组织IL-1β和IL-6 mRNA的表达水平和十二指肠组织GSDMD、caspase-1 p20蛋白表达水平与模型组比较,差异均�
- 刘嘉宝金舒文康朝霞刘译茗周丽沈峰徐派的张红星潘小丽
- 关键词：功能性消化不良电针半胱氨酸蛋白酶-1
- 脑梗死患者血清半胱氨酸蛋白酶-1、NLRP3浓度与脑动脉粥样硬化性狭窄程度的相关性研究
- 目的： 探讨脑梗死患者血清细胞焦亡相关因子NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1（caspase-1）水平与脑动脉（颅内外大动脉）粥样硬化性有无狭窄及狭窄程度的相关性，以期为针对细胞焦亡通路及激活因素在脑血管疾病方向的研究提供...
- 杜录
- 关键词：NLRP3CASPASE-1
- 文献传递
- 苦豆子半胱氨酸蛋白酶SaCP1基因的克隆及功能验证
- 地球水资源约13亿8600万立方千米,其中咸水占97.5%,可用淡水资源相对贫乏。随着人类经济的发展和人口膨胀,水资源短缺现象日益严重,这也导致了干旱地区的扩大和干旱程度的增加,从而加剧了农业干旱。在中国,干旱对农业造成...
- 赵亚男
- 关键词：苦豆子发根农杆菌耐旱性半胱氨酸蛋白酶
- 文献传递
- 广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶AcCBL1和AcCBL2基因的克隆、表达及鉴定被引量：3
- 2018年
- 目的克隆、表达广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶1 (AcCBL1)和AcCBL2基因,分析重组半胱氨酸蛋白酶rAcCBL1和rAcCBL2的免疫反应性。方法基于广州管圆线虫Ⅳ期幼虫的cDNA文库筛选获得AcCBL1和AcCBL2基因,构建pET-28a-AcCBL1和pET-28a-AcCBL2重组质粒,转入大肠埃希菌BL21 (DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达、镍柱纯化后,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分析重组蛋白表达情况。蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白对6×His标签单克隆抗体、感染广州管圆线虫的小鼠和患者血清的免疫反应性。结果AcCBL1和AcCBL2基因PCR扩增产物分别约为1 000、1 100 bp。SDS-PAGE结果显示, rAcCBL1为可溶表达蛋白,相对分子质量(M_r)约为37 800; rAcCBL2主要以包涵体形式存在,约为M_r 40 800。Western blotting结果显示, rAcCBL1和rAcCBL2能与6×His标签单克隆抗体、感染广州管圆线虫的小鼠和患者血清特异性结合。结论成功克隆和表达AcCBL1和AcCBL2基因,二者表达产物均具有良好的免疫反应性。
- 白慧芳柯琪文陈韵秋刘芷晴张玲敏吴春云袁桂秀詹希美程梅
- 关键词：广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶
