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犬卵透明带3 DNA疫苗在小鼠模型中的避孕效果评价: 2020年; 为了评价犬卵透明带3(CZP3)DNA疫苗的避孕效果,采用6只雌性小鼠Mus musculus肌肉注射50μg pcDNA3-CZP3质粒后30 V电压刺激6次的方法建立实验组,以6只同等注射pcDNA3质粒的雌性小鼠为阴性对照组;初免后每周采血并用ELISA方法检测小鼠的CZP3抗体水平及第6周抗体滴度;第6周与雄鼠合笼,计算产仔数;第24周收集卵巢制成HE染色切片进行观察;最后用小鼠血清进行小鼠及犬卵透明带的间接免疫荧光实验。结果显示,1)实验组小鼠从初免第2周就产生了抗CZP3的抗体,并且与阴性对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05);第24周实验组的抗体水平与阴性对照组之间的差异有高度统计学意义(P<0.01)。2)第6周血清中的抗体1∶4000倍稀释时,实验组与阴性对照组之间的差异有高度统计学意义(P<0.01)。3)小鼠生育率由阴性对照组的100%降低至实验组的50%,平均产仔数由阴性对照组的(6.667±0.422)只降至实验组的(2.500±1.455)只,且实验组的抗体水平与产仔数呈高度负相关。4)卵巢HE染色切片结果显示,CZP3 DNA疫苗避孕的免疫未对小鼠卵巢发育产生影响。5)间接免疫荧光实验显示,实验组小鼠产生的血清可以与小鼠及犬卵子的卵透明带基质结合。综上所述,CZP3 DNA疫苗在小鼠模型中能够显著降低小鼠的生育率及产仔数,但不影响小鼠的卵巢发育。; 王颖张富春; 关键词：卵透明带3 DNA疫苗小鼠模型免疫避孕

增强犬卵透明带3DNA疫苗抗生育效果的研究: 免疫佐剂是一种增强剂,它能有效地发挥免疫调节作用,它与抗原同时或提前注入机体,能够对特定的抗原产生更加高效持久的免疫应答,甚至可以改变其免疫应答的类型,并且能够减少疫苗抗原用量。随着研究免疫学技术的发展,佐剂已广泛应用于...; 林君媛; 关键词：避孕疫苗无花果多糖佐剂树突状细胞

阿魏菇多糖佐剂增强犬卵透明带3(CZP3)DNA疫苗的免疫不育效果被引量：3: 2017年; 目的研究阿魏菇多糖(PFP)作为佐剂增强犬卵透明带3(CZP3)DNA疫苗(pc DNA3-CZP3)的免疫不育效果。方法将pc DNA3-CZP3单独或分别与铝佐剂、PFP联用,肌肉注射免疫小鼠3次,采用ELISA测定免疫小鼠抗血清特异性抗体滴度;流式细胞术检测树突状细胞(DC)的成熟和T淋巴细胞增殖;合笼计算窝仔数检测免疫不育效果。综合评价PFP和铝佐剂对CZP3 DNA疫苗免疫效果的影响。结果联用铝佐剂和PFP的pc DNA3-CZP3与单独免疫pc DNA3-CZP3的疫苗组相比,均能提高受免小鼠抗血清特异性抗体水平。PFP作为佐剂能够显著性的增强DC表面成熟标志物CD86+和MHCⅡ+的基因表达水平,促进T细胞增殖,并且显著降低小鼠的生育率和窝仔数。结论 PFP能够提高免疫小鼠的抗体水平,促进DC成熟和增强T淋巴细胞增殖,增强CZP3 DNA疫苗免疫小鼠的不育效果。; 林君媛王颖李金玉张富春; 关键词：DNA疫苗佐剂

犬卵透明带3(CZP3)DNA疫苗免疫有效降低小鼠生育能力被引量：3: 2016年; 目的构建以犬卵透明带3(CZP3)为靶抗原的DNA避孕疫苗,并对其免疫效果及抗生育能力进行初步评价。方法提取犬卵巢总RNA,反转录PCR扩增CZP3基因,利用Prot Scale、TMHMM、Signal P、Inter Pro Scan、PREDICT PROTEIN、同源模建等生物信息学方法对CZP3基因进行分析,构建携带目标抗原CZP3的DNA疫苗pc DNA-CZP3,进行小鼠免疫实验,对DNA疫苗的免疫效果、抗生育水平进行综合评价。结果 CZP3基因序列共编码426个氨基酸,其在N端和C端各有1个疏水区,N端前22个氨基酸为信号肽,C端有1个由细胞外到细胞内的跨膜螺旋。CZP3有8个B细胞表位。DNA避孕疫苗pc DNA3-CZP3能够诱导小鼠产生较高的抗体水平,免疫组小鼠平均产仔数显著低于空白对照组和阴性对照组。结论成功构建能显著降低小鼠生育能力的犬避孕DNA疫苗pc DNA3-CZP3。; 王颖张贝贝张冀罗娇娇阿地拉.艾皮热张富春; 关键词：DNA疫苗免疫避孕

犬卵透明带3蛋白原核表达和抗血清的制备被引量：1: 2016年; 在研发控制流浪犬卵透明带3(CZP3)免疫不育疫苗的过程中,需要制备特异性的CZP3抗血清进行免疫检测。本研究克隆获得CZP3的c DNA(全长1 281 bp)和除去跨膜区和信号肽的核心片段(CZP3C,984 bp),通过构建原核表达载体p ET28a-CZP3C,转化大肠杆菌BL21(DE3)。在28℃下以0.6 mmol·L^(-1)异丙基硫代β-D-半乳糖苷诱导表达4 h,获得CZP3C融合蛋白。利用CZP3C融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备特异性的抗血清,并对抗血清的特异性和效价进行评价。SDS-PAGE结果表明,融合蛋白以包涵体形式存在。经过镍柱亲和纯化及8 mmol·L^(-1)尿素复性后,获得了高纯度的CZP3C融合蛋白。用0.8μg·μL^(-1)的CZP3C融合蛋白免疫新西兰大白兔,免疫后的兔抗血清用Western blot及间接免疫荧光实验检测,结果证明CZP3C兔抗血清具有较高的特异性,ELISA检测效价为1∶409600。本研究所制备的抗血清能够为流浪犬免疫不育疫苗的研制提供检测材料。; 张贝贝王颖张冀张富春; 关键词：卵透明带3 原核表达融合蛋白抗血清

草兔卵透明带3(ZP3)基因真核表达载体的构建与表达被引量：1: 2015年; 【目的】利用基因重组技术将草兔卵透明带3基因(ZP3)构建到真核表达载体上,并在RK-13细胞中表达ZP3蛋白,为后期的免疫不育研究提供方便。【方法】提取草兔卵巢总RNA,采用RT-PCR方法克隆ZP3基因,将其与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-N1-ZP3表达载体,并将载体转入RK-13细胞中进行ZP3表达。利用倒置荧光显微镜、RT-PCR和Western Bolt方法对重组ZP3蛋白表达情况进行观测。【结果】RT-PCR获得长为1 260bp的草兔ZP3基因;成功构建pEGFP-N1-ZP3重组质粒,将其转染RK-13细胞后表达出73ku的重组ZP3蛋白,RT-PCR验证和Western Bolt结果与ZP3基因的理论长度一致。【结论】首次构建了草兔ZP3基因真核表达载体并成功在真核细胞中表达重组ZP3蛋白。; 吴景龙隋丹丹张冬辉周智敏李昊郑雪莉韩崇选; 关键词：草兔免疫不育 PEGFP-N1 真核表达

中华鼢鼠卵透明带3真核表达系统的构建及其免疫不育的研究: 中华鼢鼠(Myospalax fontanierii)属仓鼠科、鼢鼠亚科动物,是我国北方旱作区鼠类的优势种,其数量多、分布广,对我国林业、牧业、农业等发展造成严重威胁和巨大的经济损失。目前的防治方法主要还是捕杀、物理隔离...; 张冬辉; 关键词：中华鼢鼠真核表达卵透明带3 基因疫苗; 文献传递

PolyI:C协同IL-15作为小鼠卵透明带3基因疫苗佐剂黏膜免疫效果的观察被引量：2: 2015年; 目的:以Toll样受体拮抗物Poly I:C协同细胞因子IL-15作为免疫佐剂,通过滴鼻方式免疫ICR小鼠,对卵透明带3(murine zona pellucida,m ZP3)基因疫苗的免疫增强效果进行观察。方法:将Poly I:C和IL-15单独或协同与用壳聚糖(chitosan,Chi)包裹的m ZP3基因疫苗滴鼻免疫ICR小鼠,ELISA法检测小鼠血清中特异性抗m ZP3抗体和生殖道黏液、肺洗液中s Ig A的水平,MTT法检测淋巴细胞增殖,小鼠的平均窝仔数和生育率检测抗生育情况,组织学观察小鼠的卵巢病理切片。结果:Poly I:C协同IL-15共同免疫组能够显著提高免疫后小鼠抗m ZP3抗体的水平,促进淋巴细胞的增殖,平均窝仔数和生育率显著降低,小鼠的卵巢发育异常。结论:Poly I:C协同IL-15能够增强m ZP3基因疫苗的免疫效果,并在一定程度上降低小鼠生育率。; 王丹阳杨雨杨秀梅张富春吴道澄张爱莲; 关键词：IL-15 基因疫苗佐剂

草兔免疫不育研究—卵透明带3基因（ZP3）的原核及真核表达: 草兔（Lepus capensis）属兔形目（Lagomorpha），兔科（Leporidae），与穴兔属（Oryctolagus）的欧洲兔以及新西兰大白兔不同，属山兔属（Lepus），分布纵跨亚欧非三大洲。长期的进化历...; 吴景龙; 关键词：草兔真核表达免疫不育; 文献传递

中华鼢鼠卵透明带3基因的分子克隆及原核表达分析: 中华鼢鼠（Myospalax fontanierii）属于啮齿目仓鼠科鼢鼠属，为中国的特有物种。是分布在甘肃、陕西黄土高原地区最主要的有害生物之一。它常年生存于地下，依靠取食植物的根、茎、叶存活，给农田、草甸和森林带来严...; 隋丹丹; 关键词：中华鼢鼠卵透明带3 RACE 基因克隆原核表达; 文献传递

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