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细胞工厂培养原代地鼠肾细胞工艺的建立及优化被引量：1: 2022年; 目的采用40层细胞工厂(40-layer cell factory,CF40)工艺培养原代地鼠肾(primary hamster kidney,PHK)细胞,优化乙脑减毒活疫苗的生产工艺。方法用不同浓度新生牛血清培养不同接种密度PHK细胞,比较各组PHK细胞数量,确定CF40工艺的PHK细胞接种密度和新生牛血清浓度。通过对比CF40和15 L转瓶采用不同新生牛血清的PHK细胞培养情况,比较两种工艺对新生牛血清的选择性。对4个厂家CF40培养的PHK细胞数量进行单因素方差分析,判定对CF40的选择性。结果CF40工艺的最优条件为PHK细胞接种密度6.1×10^(5)ml^(-1)、新生牛血清浓度6%。CF40工艺对新生牛血清的选择性较低,能比转瓶工艺更稳定地培养更多的PHK细胞。4个厂家CF40培养的PHK细胞数量之间的差异无统计学意义(F=0.23,P>0.05),对CF40选择性低。结论采用CF40可以制备出满足乙脑减毒活疫苗生产要求的PHK细胞。; 李军刘少祥王玖强金鹏侯良玉张莹时萍林松徐冬鑫李俊明; 关键词：细胞工厂原代地鼠肾细胞细胞培养

应用细胞工厂传代原代地鼠肾细胞培养狂犬病病毒被引量：4: 2021年; 目的应用细胞工厂建立原代地鼠肾(primary hamster kidney, PHK)细胞传代培养工艺,培养狂犬病病毒,为PHK细胞和人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)的规模化放大奠定基础。方法选用SPF级地鼠,无菌取肾,经消化分散接种到细胞工厂中,在37℃下培养筛选出PHK细胞静置培养的最适细胞接种密度;在最适细胞接种密度下,从0.20%水解乳蛋白MEM培养基和改良的DMEM/F12培养基中筛选出更适宜地鼠肾细胞静置培养的培养基;同时对消化液A(含0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶溶液)和消化液B(含0.30%柠檬酸钠的0.25%胰蛋白酶溶液)的消化效果进行比对,选择适宜的消化液;最后,使用最佳培养基和消化液对PHK细胞进行传代,观察细胞生长情况并分析代谢水平;对同一细胞批不同代次的单层细胞(P0代、P1代和P2代)接种狂犬病病毒aG株,进行多次收获,检测单次病毒收获液病毒滴度。结果 PHK细胞(P0代)在细胞工厂中适宜的接种密度为0.30×10^(6)~0.50×10^(6) cells/cm^(2);改良的DMEM/F12培养基和消化液B更适用于PHK细胞的培养和消化传代;在40层细胞工厂(CF40)中使用最佳培养基和消化液传代地鼠肾细胞至第4代(P4代),随着代次的增加,收获的细胞密度降低、葡萄糖消耗减少和乳酸生成下降;P0代、P1代和P2代细胞均有较佳的细胞状态和增殖能力;用P0代、P1代和P2代细胞培养狂犬病病毒,能有效收获4次,且单次病毒收获液病毒滴度结果符合要求,差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功建立了PHK细胞传代培养工艺,为PHK细胞的规模化放大,冻干人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)生产工艺的改进、变更以及产能的扩大提供了参考。; 李佳林张志刚刘晓巍肖蕾徐小明张艳李守丽于潆李红芳; 关键词：原代地鼠肾细胞细胞工厂消化液传代培养狂犬病病毒

人用狂犬病疫苗原代地鼠肾细胞蛋白质国家对照品的建立: 2021年; 目的建立用于人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)中地鼠肾细胞蛋白质残留量检测(ELISA法)的国家对照品。方法采用ELISA法,用原代地鼠肾细胞蛋白质标准品(量值为4.0μg/mL)对原代地鼠肾细胞蛋白质对照品进行协作标定赋值,并进行均匀性和稳定性分析。结果协作标定的数据经统计学分析后,原代地鼠肾细胞蛋白质对照品量值为34.7 ng/mL,95%参考范围为(34.7±10.1)ng/mL,该对照品的均匀性和稳定性考察也符合要求。结论建立了人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)原代地鼠肾细胞蛋白质国家对照品(批号为:250025-201901),以确保检测体系的准确、可靠。; 石磊泰李加张月兰王辉雷继军郭中平李玉华; 关键词：人用狂犬病疫苗原代地鼠肾细胞宿主蛋白国家对照品

人用狂犬病疫苗原代地鼠肾细胞蛋白质国家标准品的研制被引量：2: 2020年; 目的研制用于人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)中地鼠肾细胞蛋白质残留量检测(ELISA法)的国家标准品。方法分两步进行协作标定和量值溯源,第一步采用Lowry法对原代地鼠肾细胞蛋白质标准品原液进行赋值,第二步采用ELISA法对原代地鼠肾细胞蛋白质标准品进行赋值。随机抽取16支标准品,检测pH值,采用方差分析统计检验均匀性;将标准品分别在4、25和37℃放置不同时间(1、2、3和4周),不同时间点取3支,于-20℃保存,待所有样本放置结束后统一用ELISA法检测蛋白含量,方差分析统计检验稳定性。结果协作标定的数据经统计学分析,原代地鼠肾细胞蛋白质标准品赋值为4.0μg/mL,95%可信限为(4.0±0.5)μg/mL,均匀性及稳定性良好。结论建立了国家原代地鼠肾细胞蛋白质标准品(批号:250024-201901),赋值准确可靠、科学严谨,对人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)的质量控制具有重要意义。; 石磊泰李加张月兰王辉雷继军郭中平李玉华; 关键词：狂犬病疫苗原代地鼠肾细胞宿主蛋白国家标准品

一种改良原代地鼠肾细胞传代培养方法: 本发明公开了一种改良原代地鼠肾细胞传代培养方法，选择活力旺盛且已培养成致密单层的原代地鼠肾细胞进行传代，洗去其上附着的组织块和残留血清，加入0.02% EDTA溶液，将从5~10个转瓶中收集的表层细胞合并备用；在收集表层...; 张涛戚凤春杨宇飞张瑞; 文献传递

流行性感冒原代地鼠肾细胞多价疫苗及其制备方法: 本发明涉及一种流行性感冒原代地鼠肾细胞多价纯化疫苗其制备方法，该疫苗中不合有致瘤性的传代细胞可复制的DNA。其制备方法是采用原代地鼠肾细胞为病毒培养基质，将每年世界卫生组织推荐的、或国家相关部门批准的人流感病毒或禽流感病...; 李云英王玉清吴歧; 文献传递

流行性感冒原代地鼠肾细胞多价疫苗的制备方法: 本发明公开了一种制备流感疫苗的方法，包括步骤：a)将流感病毒原始毒种通过无特定病原鸡胚适应性传代，作为主代种子；b)原代地鼠肾细胞的制备及利用培养瓶或细胞生物反应器进行培养；c)用主代种子感染原代地鼠肾细胞，并进行适应性...; 李云英王玉清吴歧; 文献传递

原代地鼠肾细胞及狂犬病毒不同培养方式的研究被引量：2: 2012年; 目的通过比较原代地鼠肾细胞在转瓶、微载体、细胞工厂的3种培养方式的培养效果,为原代地鼠肾细胞选择一种易扩大规模、培养高质量细胞的培养方式,进而提高狂犬病毒的产量。方法消化取得的细胞悬液分别在转瓶、微载体、细胞工厂中培养,通过显微镜观察细胞形态、计数等结果比对培养的差别。结果细胞工厂可以很好地培养原代地鼠肾细胞和狂犬病毒;而细胞在微载体上贴附性差,生长不好。结论实验结果表明细胞工厂可以取代转瓶,用于大规模培养原代地鼠肾细胞扩大狂犬病毒的产量。; 马超赵祖波刘鹏刘晓凡孙小慧许博; 关键词：原代地鼠肾细胞狂犬病毒转瓶微载体细胞工厂

流行性感冒原代地鼠肾细胞多价疫苗的制备方法: 本发明公开了一种制备流感疫苗的方法，包括步骤：a)将流感病毒原始毒种通过无特定病原鸡胚适应性传代，作为主代种子；b)原代地鼠肾细胞的制备及利用培养瓶或细胞生物反应器进行培养；c)用主代种子感染原代地鼠肾细胞，并进行适应性...; 李云英王玉清吴歧; 文献传递

原代地鼠肾细胞疫苗中残余宿主细胞蛋白检测方法的建立及初步验证被引量：4: 2010年; 目的建立定量检测原代地鼠肾细胞（primary hamster kidney cell，PHKC）疫苗中残余宿主细胞蛋白含量的方法。方法制备PHKC蛋白免疫家兔，对获得的抗血清进行纯化并标记辣根过氧化物酶，通过优化各反应条件建立ELISA方法，同时进行方法学验证。结果ELISA检测方法的最佳包被抗体质量浓度为6mg／L，酶标抗体工作浓度为1：2000，最佳检测区间为12．500～200．000μg／L，定量限度为23．250μg／L，准确度和精密度较佳。结论建立了一种简单、准确、可靠检测PHKC病毒性疫苗中宿主细胞蛋白残留量的ELISA双抗体夹心法。; 赵玉秀张月兰王辉韩霞钟书声马可罗书荣白江赵兰英; 关键词：酶联免疫吸附测定原代地鼠肾细胞

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