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蕙兰CfAP11基因正、反义表达载体的构建及对烟草的转化
2020年
A类基因APETALA1(AP1)属于MADs-box基因,在花的发育中扮演重要的角色,不但可以调控开花时间,而且在ABCDE花发育模型中控制花萼和花瓣的发育。为了研究蕙兰APETALA1基因CfAP11的功能,本研究通过构建蕙兰开花基因CfAP11正义和反义两种植物表达载体,并将其导入农杆菌EHA105菌株,介导遗传转化烟草,对遗传转化的烟草再生植株进行PCR-Southern blot和RT-PCR检测。结果表明,蕙兰CfAP11基因正义和反义表达载体构建成功,并进一步将CfAP11正义基因转化烟草,获得阳性转基因植株。本研究为下一步蕙兰CfAP11基因的功能鉴定提供了实验依据。
田云芳田云芳袁秀云王国霞蒋素华袁秀云崔波许申平
关键词:烟草
蝴蝶兰2种病毒的同步检测及其CP融合反义表达载体构建被引量:2
2018年
【目的】建兰花叶病毒(CyMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)是侵染蝴蝶兰最主要的2种病毒,给蝴蝶兰产业造成巨大经济损失。本文建立了快速检测这2种病毒的方法,并为培育同时抗CyMV和ORSV的蝴蝶兰新品种奠定基础。【方法】根据2种病毒CP基因序列设计了2对特异性引物,运用RT-PCR方法同时检测这2种病毒,利用反义RNA技术构建2种病毒CP基因的融合表达载体。【结果】利用设计的特异性引物检测12株蝴蝶兰样品,有25%同时检测出2种病毒,在同一PCR反应体系中,扩增出2个目的条带清晰无杂带。从感病蝴蝶兰叶片总RNA中克隆出CyMV CP基因的125 bp片段和ORSV CP基因的164 bp片段。将CyMV的CP基因片段以3’→5’方向与表达载体p CAMBIA1300连接,命名为p CAMBIA1300-CyMV,经酶切及菌落PCR鉴定可获得125 bp的小片段;再将ORSV的CP基因片段以3’→5’方向与p CAMBIA1300-CyMV连接,命名p CAMBIA1300-CyMV-ORSV,经酶切及菌落PCR鉴定可获得289 bp的片段。【结论】所设计的2对特异性引物能够在同一PCR体系中快速高效地检测出CyMV和ORSV,含2种病毒CP基因的反义融合表达载体构建成功。
梁芳邓祖丽颖许申平张燕崔波
关键词:建兰花叶病毒齿兰环斑病毒外壳蛋白基因
黄瓜硝酸还原酶基因(CsNR)序列分析及正反义表达载体的构建
2017年
为进一步研究CsNR的作用机制,从黄瓜幼叶中克隆获得硝酸还原酶基因编码区序列(CDS)全长和片段(CsNR;EC1.6.6.1),并运用生物学软件对该基因进行序列分析。其中CDS全长2 748 bp,编码915个氨基酸;CDS片段360 bp。CDS全长和p ROKⅡ经Kpn I单酶切和连接,构建了CsNR正义表达载体;CDS片段和p ROKⅡ经Kpn I和Sac I双酶切,构建了CsNR反义表达载体。通过与其他高等植物NR蛋白进行同源性比对分析,结果发现,CsNR基因的氨基酸序列与甜瓜、烟草、拟南芥、油菜NR基因编码的氨基酸序列高度同源,其中与甜瓜NR蛋白之间同源性最高,为98.25%。
潘玲玲王秀峰李强杨凤娟魏珉史庆华
关键词:黄瓜硝酸还原酶生物信息学反义表达载体
杨树二氢黄酮醇-4-还原酶基因(DFR)的克隆及反义表达对儿茶素合成的影响被引量:5
2016年
为了验证二氢黄酮醇-4-还原酶基因(DFR)在杨树上的功能,明确DFR对抗病物质儿茶素合成的影响,利用抗病基因防治树木溃疡病提供候选基因。以接种欧美杨细菌性溃疡病菌后6 d的一年生中林46杨树苗干的树皮为材料,利用RT-PCR技术克隆DFR基因的ORF序列,并构建DFR的反义表达载体anti-p BI121-DFR。采用农杆菌介导叶盘法转化84K杨,获得了转反义DFR基因的84K杨4株。用高效液相色谱法检测转基因植株叶片中的儿茶素质量分数,结果显示,4株转反义DFR株其内源儿茶素质量分数分别为0.97、2.4、1.6和0.87 ng/g,与84K野生型植株中儿茶素质量分数(8.9 ng/g)相比显著降低。上述结果表明DFR基因参与了杨树类黄酮生物合成途径,该基因与儿茶素的合成有关。
左涛赵树堂卢孟柱孙爱东王延伟贺伟
关键词:类黄酮反义表达载体儿茶素
盐藻DsMAPK的原核表达反义表达和亚细胞定位分析
盐生杜氏藻(Dunaliella salina,以下简称盐藻)无细胞壁,为天然原生质体,由于极强的耐盐能力,简单的细胞结构以及便利的培养条件使其成为研究植物耐盐机制最理想的模式生物。促有丝分裂活化蛋白激酶(mitogen...
岳文静
关键词:盐生杜氏藻原核表达反义表达亚细胞定位
文献传递
ProDH基因反义表达载体的遗传转化
2015年
利用农杆菌介导的叶盘法将ProDH基因反义表达载体分别导入番茄品种‘耐运2000’和烟草中,建立并优化了番茄子叶再生体系。同时采用操作简单、再生周期短、转化效率较高的烟草进行了遗传转化体系的建立。试验获得49个烟草抗性芽和177个番茄抗性芽,用特异性引物对其做PCR扩增验证,共获得9个PCR呈阳性的抗性芽,其中7个烟草抗性芽、2个番茄抗性芽,因此证明外源基因已成功转入番茄的基因组中,为番茄转基因工程的进一步研究奠定基础。
赵敬一罗丹张喜春
关键词:番茄再生植株抗性植株
毛白杨PtMADS1基因的反义表达被引量:2
2015年
为明确毛白杨(Populus tomentosa)的MADS盒基因Pt MADS1的功能,本研究对Pt MADS1在毛白杨植株不同部位的表达进行了RT-PCR分析。本研究对毛白杨进行了Pt MADS1基因的反义转化,将35S::Pt MADS1反义转基因芽体接种于不同类型培养基上。结果表明Pt MADS1有可能参与了茎尖的形态发育,并能够影响植物营养器官的形态。因此本研究认为Pt MADS1对生长素的合成具有促进作用。
刘程苏文龙王晓霞岳彩云苏哲樊金会
关键词:毛白杨PT反义表达MADS盒基因
利用花粉介导反义表达S-RNase创制梨自交亲和新种质的方法
本发明公开了利用花粉介导反义表达S‐RNase创制梨自交亲和新种质的方法,属于分子遗传学领域。利用双酶切方法构建反义表达载体pGSA1285‐S<Sub>3</Sub>,以‘黄花梨’花粉为载体,通过超声波处理花粉介导法将...
吴俊张绍铃马倩倩齐开杰黄小三吴巨友
文献传递
象草PpCCR基因正、反义表达载体的构建及对烟草的转化被引量:3
2015年
象草(Pennisetum purpureum)是一种广泛种植于热带和亚热带地区的多年生资源植物,但其木质素含量过高,影响了对其的开发与利用。为探讨肉桂酰辅酶A还原酶(Cinnamoyl-Co A Reductase,CCR)基因对木质素合成的影响,本研究以华南象草为材料,构建了CCR基因正反义表达载体,并利用农杆菌侵染法转化烟草。通过Wiesner和Maule染色法对转基因植株进行木质素的组织化学染色。结果发现,转基因植株的木质素单体组成并没有明显改变;但Pp CCR过表达烟草,转基因株系木质化细胞增多;Pp CCR反义表达烟草,转基因株系木质化细胞排列相对松散。同时反义表达CCR,在木质素含量下降最明显的植株中茎秆呈红褐色。上述结果表明,CCR对木质素的合成起重要作用,这为进一步对象草进行遗传改良奠定了基础。
彭小群张博雅刘洁雯王亚解新明
关键词:象草烟草
无芒隐子草CsLEA基因超表达载体和反义表达载体构建被引量:2
2014年
根据已克隆出的无芒隐子草(Cleistogenes songorica)晚期胚胎发生丰富蛋白基因CsLEA(GenBank序列号为FJ972827)基因和植物表达载体的酶切位点特征,分别将CsLEA基因编码区序列480 bp正向和反向插入pBI121,构建了超表达载体pBI121 35S::CsLEA和反义表达载体pBI121 35S::AS-CsLEA。电击法转入根癌农杆菌GV3101中,并通过花粉管通道法转化拟南芥(Arabidopsis thaliana),经卡那霉素抗性筛选和PCR鉴定,已获得T1代阳性植株。
段珍狄红艳张吉宇霍雅馨孔令芳
关键词:反义表达载体拟南芥

相关作者

鲍碧丽
作品数:8被引量:14H指数:1
供职机构:浙江大学生物系统工程与食品科学学院
研究主题:反义表达 番茄 乙烯受体基因 乙烯受体 AVG
应铁进
作品数:196被引量:1,563H指数:23
供职机构:浙江大学
研究主题:番茄 贮藏 杨梅 装配式 保温车
李纪元
作品数:257被引量:1,396H指数:20
供职机构:中国林业科学研究院亚热带林业研究所
研究主题:山茶 金花茶 山茶花 茶花 杜鹃红山茶
罗云波
作品数:661被引量:2,830H指数:27
供职机构:中国农业大学食品科学与营养工程学院
研究主题:快速检测试剂盒 靶序列 生物物种 番茄 试剂盒
马倩倩
作品数:6被引量:35H指数:2
供职机构:南京农业大学
研究主题:反义表达 基因蛋白 自交亲和 双酶切 育种实践