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变性 高效 液 相色谱 技术 在快速检测食品微生物中的应用研究被引量:8 2019年 食品安全问题一直是社会各界重点关注的热点话题。为了保证食品质量和安全,有必要对流入市场的食品进行食品中微生物含量的检验。变性 高效 液 相色谱 技术 因其自身特点以及检验的精确度相 对较高、灵敏度和速度相 对较快等特点,在微生物检测方面得到了广泛应用。本文主要对变性 高效 液 相色谱 技术 的实际应用进入深入研究,从原理、特点等方面进行详细阐述。 杨柳关键词:变性高效液相色谱技术 食品微生物 变性 高效 液 相色谱 技术 应用研究进展被引量:2 2017年 变性 高效 液 相色谱 技术 是一种新型的筛选基因序列变异技术 ,具有单次检测量大、自动化操作度高等特点,本文介绍了变性 高效 液 相色谱 技术 的工作原理,及其在科研、医疗上的应用。 朱竟赫 庞杰关键词:变性高效液相色谱 DHPLC 变性 高效 液 相色谱 技术 鉴别猪牛源性成分的试验被引量:1 2016年 建立了检测动物源性食品中猪、牛成分的PCR结合变性 高效 液 相色谱 技术 ,为牛、羊成分的鉴别提供一种新的分子诊断技术 。以猪、牛的线粒体DNA为靶基因,设计特异性PCR引物。双重PCR扩增后,DHPLC分析。经优化DHPLC最佳条件为:使用PS-DVB&C18 DNASep色谱 柱(4.6 mm×50 mm,粒度3μm),设定50℃柱温,起始流动相 为:45%缓冲液 A和55%缓冲液 B,流速0.9 m L/min;上样量:PCR产物5μL。结果表明:DHPLC法具有良好的特异性,仅能检出猪、牛源成分,而与羊、鸡、鸭源成分无交叉反应;方法的灵敏度可以达到1 000 copies核酸。 杨娜 王向军 乔晴 徐超关键词:变性高效液相色谱法 变性 高效 液 相色谱 技术 在大豆品种鉴定中的应用被引量:1 2015年 单核苷酸多态性(SNPs)和插入-删除标记(In Del)在基因组中广泛分布,日益成为主要作物的重要遗传标记。利用变性 高效 液 相色谱 (DHPLC)技术 检测大豆品种的SNP和In Del的多态性,可为大豆种质的品种鉴定提供一种新型的快速检测方法。基于公共数据库中的大豆基因信息,筛选了3条DNA序列作为目标分析片段,以大豆种质粤夏119作为参比基因型,利用DHPLC技术 平台对10份大豆品种进行了鉴定。结果表明:混合参比DNA后的大豆样本产生DHPLC谱图均具有多态性,谱型与测序基因型一一对应。综合3条目标片段的DHPLC特征谱图可以区分所有大豆品种。试验结果验证了DHPLC应用于大豆品种鉴定的可行性和可靠性。由于DHPLC分辨率高、快速、操作简单、安全等优点,在大豆的品种鉴定中具有良好的应用前景。 彭梓 谭建锡 周慧平 袁小雅 朱金国 王利兵关键词:SNP INDEL 大豆 变性高效液相色谱技术 聚合酶链式反应-变性 高效 液 相色谱 技术 在唐氏综合征筛查中的应用 被引量:3 2012年 目的:探讨聚合酶链式反应-变性 高效 液 相色谱 技术 (polymerase chain reaction-denaturing high performance liquidchromatography,PCR-DHPLC)在唐氏综合征筛查中的应用。方法:针对21号染色体上的基因座D21S1409、D21S1422、D21S1435和GATA163G03设计引物,PCR扩增唐氏综合征患儿样本和正常样本,DHPLC仪检测;同步进行外周血染色体核型分析,并以核型分析为金标准,评价PCR-DHPLC技术 的准确性。结果:柱温50℃时,唐氏综合征患儿样本DHPLC检测结果呈现特异唐氏综合征峰。结论:PCR-DHPLC方法具有较高的敏感性和特异性,可用于唐氏综合征的高通量快速筛查。 张丹妍 马明福 张丹媚 朱一剑 吕静 赵乐天 万凌 侯志伟 李练兵关键词:变性高效液相色谱 唐氏综合征 应用多重PCR-变性 高效 液 相色谱 技术 检测大片段重复或缺失突变 被引量:3 2012年 目的探讨多重PCR-变性 高效 液 相色谱 (PCR-denature high performance liquid chromatography,PCR—DHPLC)技术 在假肥大型肌营养不良症和脊肌萎缩症外显子拷贝数异常检测中的应用价值。方法应用多重PCR-DHPLC方法筛查35例假肥大型肌营养不良症患者和6例脊肌萎缩症患者。选择阳性对照和阴性对照进行方法学可靠性检验。结果多重PCR-DHPLC可完全检测出全部阳性对照中重复或缺失片段。35例假肥大型肌营养不良症样本中检测出5例大片段重复,20例大片段缺失,突变检出率为71.4%。6例脊肌萎缩症患者均检测到第7外显子缺失。结论多重PCR-DHPLC分析系统可作为有效筛查大片段重复或缺失突变的检测方法。 邹海强 赵保健 闫瑾 韩炜 熊美华 彭凯润关键词:变性高效液相色谱 多重聚合酶链反应 应用多重连接依赖性探针扩增和变性 高效 液 相色谱 技术 筛查Peutz-Jeghers综合征家系致病基因突变 被引量:1 2012年 目的联合应用多重连接依赖性探针扩增(MLPA)和变性 高效 液 相色谱 (DHPLC)技术 快速筛查Peutz-Jeghers综合征家系致病基因的突变。方法收集家系成员的外周血,采用MLPA、PCR-DNA测序等方法分别检测了LKB基因大片段缺失、碱基突变、碱基插入和缺失。同时收集250名正常人外周血,PCR-DHPLC筛查验证突变位点在正常人群中的分布。生物信息学分析突变位点对编码蛋白质结构和功能的影响。结果2名家系受累成员均携带LKB基因924G〉C点的突变,这一突变位点在家系正常人和正常人群中都不存在。突变导致位于功能结构域的第308位编码氨基酸由色氨酸变为半胱氨酸,变异蛋白质结构和功能发生改变。结论c.924G〉C位点的突变是一种病理性胚系突变,编码氨基酸的改变(Trp308Cys)是此家系的致病性因素。 张晓梅 朱明 张元颖 马国建 陈森清关键词:PEUTZ-JEGHERS综合征 DNA突变分析 变性 高效 液 相色谱 技术 在快速检测食品微生物中的应用研究 本研究以产黄曲霉毒素菌,白色念珠菌,A 型肉毒梭菌,凝结芽孢杆菌及发酵乳杆菌为研究对象,基于分子生物学技术 ,采用变性 高效 液 相色谱 法结合常规的PCR,初步建立了快速高效 的检测方法,以期为食品致病微生物的快速检测方法建立提供... 杨大伟关键词:变性高效液相色谱 食品微生物检测 白色念珠菌 肉毒梭菌 文献传递 变性 高效 液 相色谱 技术 对创伤弧菌检测的研究被引量:6 2011年 应用PCR结合变性 高效 液 相色谱 技术 对创伤弧菌进行检测,建立创伤弧菌快速准确的检测新方法。经过DHPLC分析条件优化,在DHPLC非变性 温度下分析创伤弧菌特异性PCR扩增产物。同时进行方法特异性、灵敏度、重复性实验。实验结果表明所建立的创伤弧菌PCR-DHPLC检测方法特异性强、灵敏度高、重现性好、结果稳定可靠、检测时间短,检测低限可达到124 CFU/mL,是创伤弧菌快速检测的新技术 。 刘彤 郑秋月 赵昕 曹际娟关键词:聚合酶链式反应 变性高效液相色谱 多重PCR结合变性 高效 液 相色谱 技术 转基因小麦检测方法的建立 被引量:7 2011年 为了满足对小麦转基因成分高通量快速检测的需要,建立了一种新的转基因小麦检测方法。通过对不同稀释倍数的转基因小麦品系B73-6-1中的内源基因Wx012、外源基因ubiquitin、bar、nos、uidA进行单一PCR和多重PCR扩增,应用琼脂糖凝胶和变性 高效 液 相色谱 (DHPLC,denaturing high performance liq-uid chromatography)技术 分离PCR产物,进行灵敏度分析,并用非转基因小麦京花1号籽粒、大豆籽粒、麦片、转基因小麦B73-6-1加工成的油炸制品为样本,对建立的检测体系进行检测。结果表明,样品经多重PCR扩增和DHPLC分离后,能够得到准确可靠的转基因图谱。与凝胶电泳方法比较,本研究所建立的多重PCR-DHPLC具有更高的检测通量和灵敏度(能够同时检测5个基因,灵敏度达到1 ng.μL-1),能够满足小麦转基因成分的高通量快速检测的要求,同时也为转基因产品检测提供了一种新的技术 手段。 白月 栾凤侠 王珣 关学佳关键词:转基因小麦 多重PCR 变性高效液相色谱