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利用多角蛋白基因密码子偏爱性提高重组人表皮生长因子的方法
本发明公开了一种利用多角蛋白基因密码子偏爱性提高重组人表皮生长因子的方法。重组人表皮生长因子hEGFbDNA序列为SEQ ID NO.1,方法是构建并合成重组人表皮生长因子hEGFb;利用病毒表达系统对重组人表皮生长因...
吴小锋 王星洋 许裕敬 杨恬 朱新宇
昆虫杆状病毒多角蛋白基因超高水平表达的分子机制研究进展
2024年
昆虫杆状病毒的生活史中令人惊奇的现象之一是其极晚期基因多角蛋白(polyhedrin,polh)基因的超高水平表达,表达产生的多角蛋白将病毒粒子包埋到内部形成包涵。本文根据已有的研究结果,从3个方面概括了polh基因超高水平表达的机制,即polh启动子的结构特征和转录调控、polh mRNA的结构和翻译调控以及影响polh基因表达的蛋白调控因子,期望有助于更好地理解polh超高水平表达调控的分子机制,为提高杆状病毒表达载系统表达外源蛋白效率提供理论指导。
陈官平李跃东李佳乐吴小锋
关键词:杆状病毒多角体蛋白分子机制
BmNPV多角蛋白基因编码区结合蛋白的鉴定
2023年
家蚕核型多角病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)是一种具有较强传染性的病毒,在感染的极晚期超高水平表达一种约29 kD的碱溶性多角蛋白。但该蛋白为病毒复制的非必需蛋白,因此,利用该基因可以被删除或被外源基因替换而不影响病毒的复制的原理构建重组病毒,可以实现外源基因的高水平表达。然而,目前虽已经有较多文献研究多角蛋白高水平表达的分子机制,但迄今对于多角蛋白基因编码区的结合蛋白尚不明确。本研究通过DNA pull-down联合质谱技术对结合在多角蛋白编码区的蛋白质进行鉴定,共鉴定到78个宿主来源的蛋白和49个病毒自身编码的蛋白。对这些蛋白进行GO注释,结果表明这些蛋白除了具有共同的核酸结合功能外,还有其他不同的生物学功能,共同在多角蛋白的超高水平表达过程中发挥作用。进一步从上述蛋白中筛选出了最值得深入研究的9个宿主蛋白和10个病毒蛋白。对这些蛋白进行深入研究,将为深入揭示多角蛋白超高水平表达的分子机制提供新的线索。
陈官平孔祥硕赵书荻吴小锋
关键词:BMNPV多角体蛋白
BmMP54基因在家蚕组织的表达模式及与BmNPV多角蛋白基因的融合表达分析被引量:1
2017年
从家蚕蛹c DNA文库中筛选到一个403 bp的未知功能基因,将其命名为Bm MP54(Gen Bank登录号:DY231399.1)。该基因序列包含312 bp的开放阅读框,编码由103个氨基酸残基组成的蛋白质,生物信息学预测其含有2个跨膜区域,等电点及分子质量分别为9.90和10.463 k D。将Bm MP54与家蚕核型多角病毒(Bm NPV)的多角蛋白基因(Polh)融合后分别连接到原核表达载p GEX-4T-1和家蚕杆状病毒表达系统转移载p Fast BacTMHTB中构建重组质粒,并分别在大肠埃希菌BL21(DE3)和家蚕卵巢培养细胞(Bm N)中表达。原核表达的融合蛋白通过调节p H值、阴离子交换层析等纯化获得了65 k D的重组融合蛋白Polh-Bm MP54,通过Western blotting可在重组杆状病毒感染的Bm N细胞中检测到42 k D左右的Bm MP54重组蛋白,表明已按设计要求高效表达并纯化获得目的蛋白质。实时荧光定量PCR分析显示Bm MP54在家蚕5龄幼虫的气门和脂肪组织中表达量最高,在表皮和头部的表达量最低。上述研究结果有利于后续探讨Bm MP54在家蚕生长发育过程中的生物学功能。
严婷婷于滨潘海涛舒建洪张耀洲
关键词:跨膜蛋白表达谱
一个新的家蚕免疫相关蛋白基因多角蛋白基因的融合表达及其功能的初步研究
杆状病毒在极晚期基因表达过程中,产生两种高效表达的蛋白,它们是多角(Polh)蛋白和P10蛋白,其中多角蛋白是形成多角的主要成分,基因序列大小为738 bp,编码246个氨基酸残基,分子量大小为29 kD,多角启...
方腾飞
关键词:BAC-TO-BAC荧光定量PCR
文献传递
茶毛虫核型多角病毒多角蛋白基因(polh)的表达、抗制备及检测利用
杆状病毒是一类基因组为双链环状的DNA病毒,其主要感染节肢动物特别是鳞翅目,双翅目和膜翅目昆虫的一类病毒。杆状病毒科分为核型多角病毒属(NPV)和颗粒病毒属(GV)。现已发现的杆状病毒以NPV为主,核型多角病毒根据...
王礼中
关键词:杆状病毒茶毛虫核型多角体病毒抗体制备
文献传递
马尾松毛虫质型多角病毒多角蛋白基因的表达与定位
2006年
为了表达马尾松毛虫质型多角病毒(DpCPV)多角蛋白基因(S10片段)并探讨多角蛋白在真核细胞中的定位,从DpCPV中分离出S10,与pET-28a载连接成重组表达质粒pET28-S10;将S10克隆到杆状病毒转座载pFASTBACHTb中,依次筛选出重组转座质粒pFASTBACS10,重组穿梭质粒BacmidS10,重组杆状病毒AcS10。多角蛋白基因表达后,用SDS-PAGE、Western-blot和免疫荧光技术对表达产物进行了检测。结果表明:S10原核表达质粒、重组杆状病毒成功获得;在昆虫细胞中表达的质型多角蛋白主要定位于细胞质,同时有少量产物定位于细胞核。
李斗林李艳秋张珈敏杨波陈伍国周伟东胡远扬
关键词:马尾松毛虫质型多角体病毒多角体蛋白基因
肌动蛋白抑制杆状病毒多角蛋白基因的转录与表达
通过重组病毒AcMNPV-GFP-actin(ph-)进行分析,晚期持续表达的外源肌动蛋白抑制了多角基因的转录和表达,从而导致多角不能正常产生。论文共分三部分:第一部分前言对杆状病毒作了概括性介绍,包括杆状病毒的分类...
贾蕴莉
关键词:杆状病毒肌动蛋白多角体病毒多角体蛋白基因转录
文献传递
肌动蛋白抑制了杆状病毒多角蛋白基因的转录与表达被引量:1
2005年
为进一步研究肌动蛋白在杆状病毒感染晚期的作用,利用Bac-to-Bac系统构建了表达多角基因、肌动蛋白与绿色荧光蛋白融合基因的重组病毒vAc-ph/70GA,同时构建对照病毒vAc-ph.实验发现,重组病毒vAc-ph/70GA感染Sf9细胞后能持续表达肌动蛋白,但不能形成多角,vAc-ph则能形成多角.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,vAc-ph/70GA感染晚期,细胞内没有多角蛋白的表达;RT-PCR的结果进一步表明多角基因的转录被抑制.肌动蛋白的表达并没有影响vAc-ph/70GA对细胞的感染力.结果表明,晚期表达的外源肌动蛋白抑制了多角基因的转录和表达,从而导致多角不能正常产生.
贾蕴莉余泽华陈新文
关键词:肌动蛋白多角体
斜纹夜蛾核型多角病毒多角蛋白基因与gp41基因分析及带GFP标记的转移载的构建
斜纹夜蛾核型多角病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)属NPV科A亚群。本研究在Spli-SpltMNPV的模型中对ph及gp41基因进...
胡兆丽
关键词:斜纹夜蛾多角体病毒多角体蛋白基因
文献传递

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袁林
作品数:107被引量:108H指数:5
供职机构:江西省科学院
研究主题:普鲁兰 嗜热 粪肠球菌 Α-淀粉酶 植酸酶
胡远扬
作品数:101被引量:196H指数:9
供职机构:武汉大学生命科学学院
研究主题:病毒 黑胸大蠊浓核病毒 质型多角体病毒 基因组结构 马尾松毛虫
张珈敏
作品数:91被引量:182H指数:9
供职机构:武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室
研究主题:黑胸大蠊浓核病毒 病毒 马尾松毛虫 基因组结构 浓核病毒
魏国汶
作品数:27被引量:65H指数:5
供职机构:江西省科学院
研究主题:粪肠球菌 杆状病毒表达系统 多角体 植酸酶 响应面法优化
吴小锋
作品数:169被引量:484H指数:12
供职机构:浙江大学动物科学学院
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