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- 一种在大肠杆菌表达系统中高效表达外源蛋白的方法及其应用
- 本发明涉及一种高效表达外源蛋白的大肠杆菌构建方法及其应用，其中，所述方法包括：步骤(1)BL21(DE3)lpxM基因的敲除；步骤(2)将tig基因插入步骤(1)得到的BL21(DE3)lpxM基因缺失株；(3)重组载体...
- 田克恭李鹏昊张许科
- 基于大肠杆菌表达系统的人乳头瘤病毒疫苗研发进展被引量：1
- 2023年
- 人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染具有广泛性和自限性,通常能被免疫细胞清除。然而,持续感染很有可能导致正常细胞病变,最终引发宫颈癌等恶性肿瘤。接种HPV疫苗是宫颈癌一级预防的有效措施。采用大肠杆菌表达系统研发的HPV疫苗具有低成本、高产量的优势。本文综述了HPV基本概况和大肠杆菌表达系统的优势与挑战,重点梳理了大肠杆菌表达的HPV疫苗的研发进展,以期为大肠杆菌重组表达系统的改进策略和新型HPV疫苗的研发方向提供参考。
- 张姝玥王致萍顾蓉李少伟夏宁邵
- 关键词：原核表达系统人乳头瘤病毒重组蛋白宫颈癌
- 基于大肠杆菌表达系统制备β-酪蛋白研究被引量：2
- 2023年
- 牛乳中β-酪蛋白含有多种变异体,其中A1β-酪蛋白(A1)和A2β-酪蛋白(A2)是其最常见的2种变异体。由于A1和A2蛋白在氨基酸序列上仅存在个别氨基酸的差异,因此通过常规的分离、纯化手段较难以实现纯度较高的A1和A2蛋白的制备。本研究利用分子生物学手段,分别构建含有CSN2-A1和CSN2-A2目的基因的重组质粒载体pET28a(+)-CSN2-A1和pET28a(+)-CSN2-A2。将构建的重组表达载体导入到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达和纯化。结果表明,在0.2 mmol/L IPTG,37℃下诱导表达4 h可获得大量蛋白,但通过SDSPAGE电泳显示目的蛋白以包涵体形式表达,存在于细胞破碎后的沉淀中。通过洗涤、溶解、镍柱亲和色谱纯化、复性以及鉴定等步骤最终可获得纯度大于90%(PAGE)的A1和A2重组蛋白,从而为制备A1和A2蛋白提供新的途径。
- 艾正文
- 关键词：Β-酪蛋白大肠杆菌
- 基于大肠杆菌表达系统的重组蛋白疫苗研究进展
- 2023年
- 疫苗在流行病预防中发挥了重要作用,重组蛋白疫苗具有廉价足量、安全性良好的优势。作为一种成本效益高、生长迅速、基因操作便捷的宿主,大肠杆菌中已成功实现了重组B群脑膜炎球菌疫苗、重组人乳头瘤病毒疫苗、重组戊型肝炎疫苗等重组蛋白疫苗的生产制备和商业化应用。本文综述了基于大肠杆菌表达系统进行重组蛋白疫苗开发的研究现状,介绍了该宿主中已上市和进入临床阶段的预防性疫苗和治疗性疫苗的研发情况,为大肠杆菌表达系统中重组蛋白疫苗的开发和进一步优化提供理论指导。
- 周清华徐延伟赵巧辉张春鸽王贝贝李桂林
- 关键词：疫苗重组蛋白疫苗大肠杆菌
- 磷脂酶D的大肠杆菌表达系统及其转酰基催化活性
- 2023年
- 链霉菌(Streptomyces)来源的磷脂酶D(phospholipase D,PLD)在食品、保健品、医药等行业的应用潜力巨大。目前用大肠杆菌异源表达PLD的方法较常见,但其具有发酵周期长、分离纯化步骤烦琐、培养成本高等缺点。为此,对比研究了大肠杆菌胞内表达、分泌表达和表面展示3种方式对PLD酶活及其磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)催化合成效率的影响。采用单因素法获得PLD表达的最佳诱导条件为温度20℃、OD600=0.7、IPTG浓度0.3 mmol·L^(-1)。发酵时间曲线表明,在诱导表达8 h时,3种方式的PLD水解酶活均达最高值,分别为0.35,0.23,0.11 U·mL^(-1)。扫描电镜结果表明,大肠杆菌表达PLD后,其细胞结构有一定程度破坏,其中分泌表达菌株的变形塌陷情况最为严重。在水-乙酸乙酯两相体系中,以表面展示菌株全细胞催化磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)方式制备PS的产率最高,可达59.1%,显示了大肠杆菌表面展示表达PLD具有大大降低生物催化转化成本的巨大潜力。
- 程青谢志鹏
- 关键词：链霉菌磷脂酰丝氨酸
- 用于重组大肠杆菌表达系统的蛋白发酵液预处理装置
- 本实用新型涉及重组蛋白纯化技术领域，具体涉及一种用于重组大肠杆菌表达系统的蛋白发酵液预处理装置。用于重组大肠杆菌表达系统的蛋白发酵液预处理装置，包括缓冲液存储容器、可调节温度的发酵液存储容器、切向流过滤装置和功能储存容器...
- 徐岩赵海伟潘曼曼徐志豪樊鹏程
- 生产草酸氧化酶的大肠杆菌表达系统、草酸氧化酶的生产方法及其应用
- 本发明公开了生产草酸氧化酶的大肠杆菌表达系统、草酸氧化酶的生产方法及其应用。所述大肠杆菌表达系统中的重组表达质粒包含：草酸氧化酶基因、分子伴侣基因和促进锰离子泵入大肠杆菌细胞相关蛋白的基因。本发明通过对不同的锰离子相关蛋...
- 汪小锋吴玉峰汪卫刘艳红陈火晴
- 文献传递
- 含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统及其应用方法
- 本发明公开了含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统及其应用方法。所述大肠杆菌表达系统中的重组表达质粒为以下几种情形之一或其组合：(1)至少包含大肠杆菌分子伴侣基因和含锰离子的酶蛋白基因；(2)包含大肠杆菌分子伴侣基因、含锰离...
- 汪小锋吴玉峰汪卫刘艳红陈火晴
- 文献传递
- 用于生产草酸脱羧酶的重组质粒、大肠杆菌表达系统及方法和应用
- 本发明公开了用于生产草酸脱羧酶的重组质粒、大肠杆菌表达系统及方法和应用。所述用于生产草酸脱羧酶的重组质粒，包含：草酸脱羧酶基因、分子伴侣基因和调控胞内锰离子浓度的基因。本发明将所述重组质粒导入大肠杆菌表达菌株和MntP基...
- 汪小锋吴玉峰汪卫刘艳红陈火晴
- 文献传递
- 一种在大肠杆菌表达系统中高效表达外源蛋白的方法及其应用
- 本发明涉及一种高效表达外源蛋白的大肠杆菌构建方法及其应用，其中，所述方法包括：步骤(1)BL21(DE3)lpxM基因的敲除；步骤(2)将tig基因插入步骤(1)得到的BL21(DE3)lpxM基因缺失株；(3)重组载体...
- 田克恭李鹏昊张许科
- 文献传递
