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实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应在脊髓灰质炎病毒型内鉴定中的应用
2015年
目的应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)对脊髓灰质炎病毒(PV)进行型内鉴定,为进行常规rRT-PCR型内鉴定方法奠定基础。方法采用世界卫生组织(WHO)推荐的rRT-PCR方法,对WHO发放的PV株和实验室分离的PV株进行型内鉴定(ITD)和疫苗衍生PV株(VDPV)筛选。结果 ITD rRT-PCR的实验结果与毒株的VP1编码区序列测定结果完全相符,VDPV rRT-PCR的结果与VP1编码区序列测定结果大部分相符,但有2株Ⅱ型脊髓灰质炎疫苗类似株(SL)PV2-SL被错判为非疫苗类似株(NSL),假阳性率为3.03%;1株Ⅲ型SL被错判为NSL,假阳性率为1.92%。结论在新疆脊髓灰质炎实验室rRT-PCR可以应用于脊髓灰质炎病毒的常规监测及型内鉴定。
唐海淑崔惠宁静翟啸虎甫尔哈提.吾守尔关静
关键词:脊髓灰质炎病毒
实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的比较被引量:1
2015年
目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的差异。方法采用实时荧光定量RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离2种方法 ,同时对流感监测点送检的80份疑似流感标本检测流感病毒。结果细胞培养病毒分离的阳性数为26份,实时荧光定量RT-PCR的阳性数为36份,好=8.1,P<0.005。结论 通过该实验,验证了实时荧光定量RT-PCR的确快速敏感,适用于实验室快速诊断。
姜红涛姚秀林
关键词:实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应细胞培养法流感病毒
人乳腺癌特异性基因1 mRNA实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测试剂盒的建立及应用被引量:1
2014年
目的建立人乳腺癌特异性基因1(BCSG1)mRNA实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)检测试剂盒,并评价其在乳腺癌循环肿瘤细胞检测中的应用价值。方法优化试剂盒中各组分的浓度、确定试剂盒的稳定性、灵敏度及特异性,并检测外周血样品中BCSG1 mRNA的表达水平。结果优化了试剂盒中的引物、探针,成功制备了定值标准品,通过设立阴、阳性质控品的方法,解决了试剂盒的特异性、灵敏性、准确性及质量控制等关键技术问题,特异度及准确性均为95%以上,灵敏度为100拷贝/ml(全血)。外周血标本中BCSG1 mRNA的检测结果为,12例临床确诊已转移的乳腺癌患者均为阳性,21例临床未确诊转移的乳腺癌患者中12例为阳性,其余9例为阴性,15例乳腺良性疾病患者、10例正常人均为阴性。结论建立的BCSG1 mRNA实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒具有很高的临床应用价值,可用于检测外周血样品中BCSG1mRNA的表达量,检测结果可作为乳腺癌患者诊疗过程中的重要监测指标。
程民沈国栋卞庚徐婷娟徐维平沈干胡世莲
关键词:逆转录聚合酶链反应
实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应脊灰型内鉴定新方法在脊灰实验室的应用被引量:4
2013年
目的在河北省脊髓灰质炎(脊灰)实验室首次应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)对脊灰病毒(PV)进行鉴定,并对该方法进行评估,为进行常规rRT-PCR型内鉴定方法做准备。方法采用世界卫生组织(WHO)推荐的rRT-PCR方法,对河北省既往分离的PV和WHO发放的PV株进行型内鉴定(intratypic differentiation,ITD)和疫苗衍生PV(vaccine-derived PV,VDPV)筛选。结果 ITD rRT-PCR的实验结果与毒株的VP1编码区序列测定结果完全相符,VDPV rRT-PCR的结果与VP1编码区序列测定结果不能完全相符,有2株Ⅱ型脊灰病毒被错判为NSL,假阳性率为6.9%(2/29)。结论 Real time PCR脊灰型内鉴定方法可以在河北省脊灰实验室用于脊灰病毒的常规监测。
陈玫赵娜郭玉崔志强张振国
关键词:实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应疫苗衍生脊灰病毒
实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应鉴定脊髓灰质炎病毒方法的评估被引量:13
2010年
目的在中国脊髓灰质炎(脊灰)实验室网络[Poliovirus(PV)Laboratory Network,PLN]中,首次应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real Time Fluorescent Quantitative Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,rRT-PCR)对PV进行鉴定,并对该方法进行应用评估。方法采用世界卫生组织(WHO)推荐的、美国疾病控制与预防中心研发的rRT-PCR法,对中国PLN既往分离的10株PV进行型内鉴定(Intratypic Differentiation,ITD)和疫苗衍生PV(Vaccine-derived PV,VDPVs)筛选,并将检测结果与毒株的VP1编码区核苷酸序列测定结果进行比较分析。结果10株PV rRT-PCR的结果与VP1编码区核苷酸序列测定结果不能完全相符,rRT-PCR无法鉴别10株PV中的5株Pre(前)-VDPVs,并且漏检了山西省2007年发现的1株Ⅰ型VDPV。结论作为WHO推荐使用的新型ITD方法,rRT-PCR法是否适用于中国PLN,还有待大样本PV rRT-PCR法的回顾性和前瞻性研究。
严冬梅朱晖安军静王冬艳祝双利安洪秋张勇许文波
关键词:实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应脊髓灰质炎病毒
实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与RT-PCR法及细胞培养法检测甲_3型流行性感冒病毒的比较被引量:14
2005年
目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒(流感)病毒的灵敏度与特异性。方法采用建立的实时荧光定量RT-PCR、RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离等3种方法,同时对流感监测点送检的60份疑似流感标本检测甲3型流感病毒。结果细胞病毒分离的阳性数为10份,RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR的阳性数分别为12份和15份。实时荧光定量RT-PCR的灵敏度达0.01TCID50,且对甲1型流感病毒、乙型流感病毒、禽流感病毒H5、严重急性呼吸道综合征冠状病毒及其它呼吸道病毒均无交叉反应,从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右。结论实时荧光定量RT-PCR由于检测在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是3种方法中最为快速敏感的方法,适用于公共卫生应急疫情的实验室快速诊断。
李婵卢亦愚严菊英冯燕史雯茅海燕
关键词:实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应逆转录-聚合酶链反应细胞培养法
实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(fqRT-PCR)法检测外周循环肺癌细胞(CTCs)的临床应用研究
  由于传统的RT-PCR法最多只能达到半定量的程度,因此它很难区分正常组织中靶基因的基础表达水平与癌相关组织中增高的表达水平,从而产生假阳性。本实验旨在应用一种定量检测的方法(荧光定量逆转录-聚合酶链反应法,FQRT-...
葛明建
关键词:聚合酶链反应细胞角蛋白信使RNA药物耐受性
文献传递
猪流行性腹泻病毒微芯片荧光定量RT-qPCR检测方法的建立
2024年
为了建立简便快速的猪流行性腹泻病毒(PEDV)荧光定量RT-qPCR检测方法,根据GenBank数据库公布的猪流行性腹泻病毒囊膜蛋白E基因,设计特异性引物和探针结合微芯片技术,建立微芯片荧光定量RT-qPCR检测方法。该方法除对PEDV检测为阳性外,对与其同源性较近的致病病毒的检测均为阴性;最低检测限为1 copies/μL,常规荧光RT-qPCR检测限为10 copies/μL。批内、批间重复性试验表明,Ct值变异系数均在2%以内,可对PEDV临床样本进行检测。建立的检测方法特异性好、敏感性高、检测时间短且重复性好,适用于临床检测。
曹洪志王新杰高姗姗孙晓明邓飞石艳萍陈弟诗陈昌英李平顺
关键词:猪流行性腹泻病毒微芯片实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应囊膜蛋白
脊髓灰质炎病毒型内鉴定的方法评价被引量:2
2020年
目的评价脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)型内鉴定(Intratypic differentiation,ITD)的实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)检测方法。方法对2013-2018年新疆环境污水中PV分离株,采用rRT-PCR方法进行PV ITD检测,分析5种版本rRT-PCR的疫苗衍生脊灰病毒(Vaccine derived poliovirus,VDPV)筛查假阳性率。结果 2013-2018年共分离到PV 1 792株,经rRT-PCR进行PV ITD检测,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型PV分别为490株、372株、930株。从3.0版到5.0版rRT-PCR,PV ITD检测时间从160min缩短至137min,Ⅰ型、Ⅲ型VDPV筛查假阳性率分别从55.9%、41.1%降低至0.0%、0.2%;各版本rRT-PCR的Ⅱ型VDPV筛查假阳性率在44.0%-62.1%之间。结论 rRT-PCR方法的不断优化提高了PV ITD的检测准确性和及时性。
唐海淑凯赛尔·吾斯曼彭力吉王琪宁静关静沙吾拉西·热加甫严冬梅
关键词:脊髓灰质炎病毒实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应
rRT-PCR与微量中和实验法用于脊灰病毒血清定型的比较
2017年
目的对实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)法和微量中和实验2种脊灰病毒的血清型鉴定方法进行评价。方法按世界卫生组织(WHO)《脊髓灰质炎实验室手册》第4版进行病毒分离,用rRT-PCR法和微量中和实验方法对分离到的L20B阳性分离物进行PV的血清型鉴定,用rRT-PCR法进行型内鉴定。结果 rRT-PCR法与微量中和实验对L20B阳性分离物进行脊灰病毒的血清型定型,2种方法检测脊灰病毒阳性率差异无统计学意义,检测NPEV阳性率差异也无统计学意义;rRT-PCR方法检测脊灰病毒的灵敏度为100%,特异度为100%;检测NPEV的灵敏度为63.16%,特异度为100%。结论作为WHO推荐使用的新的型内鉴定方法,rRT-PCR法对于脊灰病毒的血清型定型与常规微量中和实验一致率为100%,该方法方便快捷,可以缩短检测时限;对于NPEV的检测特异度较高,但灵敏度低于微量中和实验。
陈玫张俊棉赵娜郭玉张振国
关键词:急性弛缓性麻痹脊髓灰质炎病毒实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应

相关作者

张振国
作品数:158被引量:589H指数:12
供职机构:河北省疾病预防控制中心
研究主题:急性弛缓性麻痹 脊髓灰质炎 脊髓灰质炎病毒 监测分析 麻疹
陈玫
作品数:68被引量:153H指数:7
供职机构:河北省疾病预防控制中心
研究主题:急性弛缓性麻痹 脊髓灰质炎病毒 脊髓灰质炎 急性弛缓性麻痹病例 监测分析
郭玉
作品数:85被引量:190H指数:7
供职机构:河北省疾病预防控制中心
研究主题:急性弛缓性麻痹 脊髓灰质炎 脊髓灰质炎病毒 急性弛缓性麻痹病例 监测分析
赵娜
作品数:42被引量:112H指数:7
供职机构:河北省疾病预防控制中心
研究主题:脊髓灰质炎病毒 脊髓灰质炎 急性弛缓性麻痹 急性弛缓性麻痹病例 中脊
崔志强
作品数:24被引量:63H指数:6
供职机构:河北省疾病预防控制中心
研究主题:脊髓灰质炎 脊髓灰质炎病毒 急性弛缓性麻痹病例 急性弛缓性麻痹 疫苗衍生脊灰病毒