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聚合酶链反应-序列特异性引物法检测宿迁地区汉族人群CYP2C19基因多态性及其与氯吡格雷抵抗相关性研究被引量：3: 2023年; 目的建立一种可以快速检测细胞色素氧化酶CYP2C19基因多态性的检测方法,并调查宿迁地区汉族人群CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17等位基因分布频率及与氯吡格雷抵抗的相关性。方法选取2022年1—6月在徐州医科大学附属宿迁医院神经内科住院治疗且诊断为初发急性脑卒中的77例患者设为脑卒中组;另选取同期于本院体检中心进行健康体检且无血缘关系的200例健康体检者设为健康组。检测两组研究对象的CYP2C19基因多态性,并应用血栓弹力图仪检测脑卒中组氯吡格雷抑制率,探究*2、*3、*17位点多态性与氯吡格雷抵抗的相关性。结果本研究自主设计并建立一种实验室方法,可有效检测CYP2C19多态性,随机挑选部分标本,采用引物对(rs4244285-F+rs4244285-R)、(rs4986893-F+rs4986893-R)、(rs12248560-F+rs12248560-R)进行聚合酶链反应,产物直接测序,与聚合酶链反应-序列特异性引物法检测结果对比,完全一致。宿迁地区汉族健康组与脑卒中组的CYP2C19基因多态性均表现为:慢代谢型(*3/*3,*2/*3,*2/*2)、中间代谢型(*17/*3,*17/*2,*1/*3,*1/*2)、快代谢型(*1/*1)及超快代谢型(*1/*17)。脑卒中组中,携带2个功能缺失等位基因患者的频率明显高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。携带两个功能缺失等位基因氯吡格雷抵抗发生率高于氯吡格雷敏感,差异有统计学意义(P<0.05)。结论聚合酶链反应-序列特异性引物法可用于CYP2C19基因型的快速检测,明确了宿迁地区汉族人群的CYP2C19基因型情况,证实慢代谢型患者基因型与氯吡格雷抵抗的发生存在相关性。; 刘丽平陈素梅刘东声朱青梁伟; 关键词：氯吡格雷抵抗

序列特异性引物联合RT-PCR在LRRK2基因多态性分型中的应用被引量：2: 2018年; 目的建立帕金森病(PD)相关基因LRRK2疾病易感位点R1628P、G2385R的新检测方法。方法设计序列特异性引物,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)的方法,对已知基因型的标准品进行分型检验;检测100例未知基因型的PD样品,并用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RLFP)的方法对待检样品基因型进行验证。结果标准品分型结果完全正确,待检的100例样品分型结果与PCR-RLFP分型结果完全吻合。结论序列特异性引物联合实时荧光定量PCR可成功实现对LRRK2疾病易感位点R1628P、G2385R的基因型分型。; 葛彪田改生李勤学李冯锐; 关键词：帕金森病 LRRK2基因序列特异性引物荧光定量PCR 基因型

CD36基因新突变T538C（Trp180Arg）导致的CD36缺失和序列特异性引物PCR的基因分型技术的建立被引量：6: 2016年; 目的对广西一位女性个体CD36缺失的分子基础和特征及其基因分布进行研究。方法采用血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定试验（monoelonal antibody immobilization of platelet antigens assay, MAIPA）和流式细胞技术（flowcytometry，FCM）检测确定广西地区一位汉族女性个体的CD36表型，应用CD36外显子测序、cDNA克隆测序对其cD36缺失发生的分子基础展开研究，构建表达CD36突变基因的细胞株[CD36（MT）细胞株]和表达CD36野生型基因的细胞株[CD36（wT）细胞株]，应用Western印迹检测细胞株CD36蛋白表达情况。建立序列特异性引物聚合酶链反应（polymerase chain reaction-sequence specific primer, PCR-SSP）检测技术对所发现的突变基因进行进一步检测确认，在1010名随机无血缘关系的中国广西健康人中进行该CD36突变基因的多态性调查。结果本研究对象经MAIPA和FCM表型检测结果为Ⅱ型CD36缺失，CD36外显子测序发现其具有T538C（Trp180Arg）突变杂合子，该突变点位于CD36第6外显子，克隆测序发现其CD36cDNA538位点T被c所替代，该突变可导致CD36成熟蛋白氨基酸序列发生Trp180Arg改变。应用所建立的CD36T538CPCR—SSP检测结果显示DNA分型检测结果与测序结果完全一致；Western印迹结果显示CD36在CD36（MT）细胞株上不表达，而在CD36（wT）细胞株上有表达。对1010名中国广西人群进行cD36T538C的基因多态性调查发现该CD36538T和538C等位基因频率分别为1．000和0．000，在本次调查人群中未发现具有538C等位基因的个体。结论发现了一个CD36基因新突变T538C（Trp180Arg）（GenBank：HM217022．1），并建立了鉴定该基因突变的PCR—SSP的技术。该基因新突变是中国广西人群中一个罕见型，可导致Ⅱ型CD36缺失的发生。本研究结果为了解中国地区人群CD36缺失发生的分子基础和特征以及CD36基因新突变T538C的人群调查提供了实验基础�; 李丽兰何保仁周燕钟周琳黎海燕卢芳刘金莲申卫东李恒聪蒋丽红吴国光; 关键词：基因突变血小板

羊水细胞ABO血型序列特异性引物-PCR法基因定型研究被引量：1: 2014年; 目的探讨羊水细胞采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-sequence specific primers,PCR-SSP)法进行胎儿ABO血型基因定型检测的可靠性。方法 28例孕妇羊水细胞采用PCR-SSP法进行胎儿ABO血型基因定型检测,对应胎儿出生后进行ABO血型血清学定型。结果 28份羊水细胞中27份ABO基因定型结果与胎儿出生后血清学定型结果相符。结论 PCR-SSP方法检测羊水细胞ABO基因型能较准确判定胎儿ABO血型,可用于产前胎儿ABO血型检测。; 夏燕段玲韩宁宁朱启英刘翛然加米拉.热扎克叶尓登.切切克杨蓉王家路; 关键词：羊水细胞 ABO血型基因定型

改良型序列特异性引物PCR用于脂联素基因单核苷酸多态性的检测: 2010年; 目的运用序列特异性引物PCR技术(SSP-PCR)研究基因单核苷酸多态性。方法根据GenBank中人脂联素基因(APM1)序列及SNP信息,利用Primer5.0设计引物,通过PCR技术检测APM1的SNPs。结果建立并优化了序列特异性引物PCR(SSP-PCR)技术,并可快速、直观、准确地进行基因分型。结论改良的SSP-PCR技术是一种特异性更高、操作简便的SNP检测方法。; 王延蛟孙丽丽陈红焦谊刘晓宇张成艾克拜尔.艾力关亚群; 关键词：单核苷酸多态性脂联素

巢式序列特异性引物PCR方法检测HLA单倍体相合供受者间母胎微嵌合的临床应用研究被引量：1: 2008年; 目的探索临床应用巢式序列特异性引物聚合酶链式反应(PCR-SSP)方法检测HLA单倍体相合供受者间母胎微嵌合状态的可行性。方法选取25对拟行HLA单倍体相合造血干细胞移植治疗的实体肿瘤患者及其供者,供受者为母子关系15例,父子关系10例。采集供受者外周血提取基因组DNA,采用巢式PCR-SSP方法检测患者外周血中供者来源的HLA-DRB1位点,并计算母胎微嵌合阳性率。随机选取经巢式PCR-SSP证实嵌合阳性和阴性且供受者性别不同的患者各4例,采用荧光原位杂交(FISH)技术进行重复检测,并与巢式PCR-SSP方法的检测阳性率进行比较,同时采用噻唑蓝法检测这8例患者分别与其亲缘供者和HLA完全不相合无关第3人之间的混合淋巴细胞增殖反应(MLR),并计算增殖指数(SI)。结果巢式PCR-SSP方法灵敏度可高达0.001%,并具有较好的特异性。巢式PCR-SSP检测显示,在母子移植关系患者中母胎微嵌合阳性检出率为40%(6/15),而在父子移植关系患者中母胎微嵌合阳性检出率为0。巢式PCR-SSP方法的检测灵敏度与FISH技术相比明显增高,其检测阳性率分别为50%(4/8)和12.5%(1/8)。MLR检测显示,嵌合阳性患者对其亲缘供者和无关第3人外周血单个核细胞(PBMC)的SI分别为(0.949±0.023)、(1.320±0.095),嵌合阴性患者对其亲缘供者和无关第3人PBMC的SI分别为(1.133±0.036)、(1.245±0.069);嵌合阳性患者对其亲缘供者PBMC的增殖反应强度与嵌合阴性患者相比明显降低(P=0.001),并且也显著低于其对无关第3人PBMC的增殖反应强度(P=0.003)。结论巢式PCR-SSP方法灵敏度高、特异性好,适用于临床HLA单倍体相合供受者间母胎微嵌合状态的快速检测。; 于津浦曹水李慧安秀梅任秀宝; 关键词：组织相容性试验嵌合状态

牛 Y－染色体重复序列特异性引物及鉴定牛早期胚胎性别的PCR方法: 本发明提供牛Y-染色体重复序列的特异性引物序列及鉴定牛早期胚胎性别的PCR方法。该特异性引物的序列为：5’-TGATTGTTGATCCCACAGAAGG-3’，5’-TGAACTTTCAAGCAGCTGAGG-3’，在多...; 张莉余文莉; 文献传递

序列特异性引物多聚酶链反应方法进行大样本多基因的多态性鉴定(英文)被引量：1: 2007年; 目的建立多个基因同时进行多态性分析的序列特异性引物多聚酶链反应(PCR-SSP)方法,以满足其在临床检验中进行基因多态性鉴定时的应用。方法应用优化后的PCR-SSP的方法分析以下基因的多态性:TNF-α-308A/G和-238G/A变异、IL-6-174G/C变异、CYP2D6*10B外显子第188位的C/T变异。结果应用同一个PCR扩增程序,可同时对多个基因、多个临床样本的基因多态性同时进行分析,基因型清晰,而且基因分型快速、准确。结论优化后的PCR-SSP适合对大样本、多个基因的单核苷酸位点变异进行多态性分析,值得在临床检验的应用中推广。; 王淑秀张艳芳杨献军秦川杨瑞; 关键词：聚合酶链反应基因多态性

用序列特异性引物多聚酶链反应的方法进行大样本、多基因的多态性鉴定被引量：2: 2007年; 目的:建立多个基因同时进行多态性分析的序列特异性引物多聚酶链反应的方法,以满足其在临床检验中进行基因多态性鉴定时的应用。方法:实验于2005-10/2006-05于河南省新乡医学院分子生物研究室完成。进行临床普通血液常规检测的患者血样200份(由新乡医学院第三附属医院提供),采用临床血样,提取DNA后采用多聚酶链反应扩增,并以扩增后的样品进行琼脂糖凝胶电泳,以是否出现相应的扩增条带作为基因分型的标准。应用优化后的序列特异性引物多聚酶链反应的方法分析以下基因的多态性:肿瘤坏死因子α-308A/G和-238G/A变异、白细胞介素6-174G/C变异、细胞色素P4502D6(CYP2D6)*10B外显子第188位的C/T变异。并由此优化序列特异性引物多聚酶链反应的方法,以达到应用同一个多聚酶链反应扩增程序,可同时对多个基因、多个临床样本的基因多态性同时进行分析,且基因型清晰,分型快速、准确。结果:①用20 g/L的琼脂糖凝胶电泳可看到每泳道内可有2条或1条扩增产物,其中阳性对照β珠蛋白基因的扩增片段长268 bp,此条带可以出现、减弱或者不出现。②其中肿瘤坏死因子α-308A/G存在G/G和A/G两种基因型;肿瘤坏死因子α-238G/A位点可检测到的基因型有G/A、G/G和A/A3型;白细胞介素6-174G/C变异位点可检测到的基因型均为G/G纯合子;细胞色素P4502D6*10B外显子第188位的C/T位点可检测到的基因型为C/C、C/T、T/T3型。结论:优化后的序列特异性引物多聚酶链反应适合对大样本,多个基因的单核苷酸位点变异进行多态性分析,快速、准确、成本低。; 杨瑞王淑秀秦川杨献军; 关键词：单核苷酸基因

聚合酶链反应-序列特异性引物方法检测儿科疾病基因多态性: 2006年; 目的建立多个基因多态性分型的聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)的方法,以推广其在儿科疾病分子水平研究中的应用。方法应用PCR-SSP的方法分析以下基因的多态性,TNF-α-308A/G和-238G/A变异,IL-6-174G/C变异。结果应用同一个PCR扩增程序,可同时对多个基因、多个临床样本的多态性进行分析,基因型清晰,且基因分型快速、准确。结论PCR-SSP适合对大样本、多基因的多态性进行分析,成本低、快速、准确,在儿科疾病分子水平研究中前景良好。; 杨瑞杨献军秦川刘峻; 关键词：聚合酶链反应序列特异性引物

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