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芦丁对TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞纤维化的影响: 2025年; [目的]探究芦丁对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)纤维化及TGF-β1/Smad信号通路的影响。[方法]构建TGF-β1诱导的CFs细胞模型,设置组别为:对照组(完全培养基+细胞)、模型组(含10 ng/mL TGF-β1+细胞)、阳性对照组(10 ng/mL TGF-β1+10μmol/L卡托普利和细胞)和给药组(10 ng/mL TGF-β1+200μg/mL的芦丁和细胞)。采用蛋白免疫印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vim)、纤连蛋白(FN)、胶原蛋白Ⅰ(CollageⅠ)、胶原蛋白Ⅲ(CollageⅢ)、TGF-β1/Smad通路相关蛋白的表达情况;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测Acta 2、Vim、FN、ColⅠ1a1、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的基因表达水平;采用免疫荧光技术检测关键蛋白α-SMA的表达及定位来探究芦丁对TGF-β1诱导的CFs纤维化的影响。[结果]用TGF-β1诱导CFs后,成功激活Vim、FN、CollageⅠ、CollageⅢ、TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白的表达,200μg/mL芦丁干预后,抑制了Vim、FN、CollageⅠ、CollageⅢ、TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白和mRNA的激活从而缓解了心肌纤维化的发生;免疫荧光实验结果显示:与对照组相比,TGF-β1模型组中α-SMA绿色荧光强度显著增强;200μg/mL芦丁组与模型组相比,α-SMA绿色荧光强度明显减弱。[结论]本研究结果表明200μg/mL芦丁通过抑制TGF-β1诱导的Vim、FN、CollageⅠ、CollageⅢ、α-SMA以及TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白和mRNA的表达,从而缓解心肌纤维化。; 张冠楠牛丕莲井瑞欣石新卫白明生; 关键词：芦丁心肌纤维化心肌成纤维细胞 TGF-Β1/SMAD信号通路

靶向抑制DNMT1通过调节自噬减轻TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞纤维化: 2025年; 目的探讨靶向抑制DNA甲基转移酶1(DNMT1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)纤维化的影响及其机制。方法采用DNMT1 siRNA重组慢病毒转染CFs,qRT-PCR和Western blot检测转染后的CFs中DNMT1表达变化。实验分组为对照组、TGF-β1组、si-NC+TGF-β1组、si-DNMT1+TGF-β1组、si-DNMT1+TGF-β1+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,CCK-8法测定CFs增殖活性,Transwell法检测CFs迁移数目,免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况,Western blot检测CFs中胶原Ⅰ型蛋白(COLⅠ)、胶原Ⅲ型蛋白(COLⅢ)、纤维连接蛋白(FN)及微管相关蛋白轻链3(LC3)、Beclin1的蛋白表达。结果DNMT1 siRNA重组慢病毒转染的CFs中DNMT1 mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均显著下调(P<0.05)。与TGF-β1组比较,si-DNMT1+TGF-β1组细胞增殖活性显著降低,迁移数目显著减少,α-SMA相对荧光强度显著降低,COLⅠ、COLⅢ、FN蛋白相对表达量显著下调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值、Beclin1蛋白相对表达量显著上调(均P<0.05);而在si-DNMT1+TGF-β1组中同时加入自噬抑制剂3-MA处理后,细胞增殖活性未发生显著变化(P>0.05),但迁移数目显著增加,α-SMA相对荧光强度显著升高,COLⅠ、COLⅢ、FN蛋白相对表达量显著上调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值、Beclin1蛋白相对表达量显著下调(均P<0.05)。结论靶向抑制DNMT1能够改善TGF-β1诱导的CFs异常增殖与迁移,抑制纤维化,该作用可能与其促进自噬有关。; 成娜姬佳妮单梓梅; 关键词：心肌成纤维细胞 DNA甲基转移酶1 自噬

通心络含药血清对高葡萄糖环境下大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响: 2025年; [目的]基于转化生长因子-β1(TGF-β1)-p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)-环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路探讨通心络含药血清对大鼠高葡萄糖环境下心肌成纤维细胞增殖的影响。[方法]原代分离大鼠心肌成纤维细胞,运用免疫荧光染色鉴定细胞。采用甘露醇与葡萄糖作用于细胞不同时间节点,通过细胞增殖及毒性检测(CCK-8)方法检测细胞活力筛选最佳造模时间,造模成功后使用不同浓度的通心络含药血清及阳性药物——缬沙坦含药血清处理细胞。CCK-8方法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫荧光染色检测TGF-β1蛋白表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠心肌组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和TGF-β1表达水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测TGF-β1、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、磷酸化CREB(p-CREB)蛋白表达水平。[结果]免疫荧光检测波形蛋白(Vimentin)的表达可以成功鉴定大鼠心肌成纤维细胞,阳性率达到90%以上。54.5 mmol/L甘露醇与25 mmol/L葡萄糖作用于大鼠心肌成纤维细胞的最佳造模时间为48 h。结果表明,模型组细胞增殖力、凋亡率较对照组升高,Caspase-3、TGF-β1、Bcl-2、p-p38MAPK及p-CREB的蛋白表达增加;不同浓度含药血清组及阳性药物含药血清组凋亡率较模型组降低,Caspase-3、Bcl-2、TGF-β1、p-p38MAPK及p-CREB的蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]采用甘露醇与葡萄糖可以导致大鼠心肌成纤维细胞损伤,通过不同剂量的通心络含药血清及阳性对照药物——缬沙坦含药血清处理均可以对大鼠心肌成纤维细胞发挥保护作用,其中中剂量通心络含药血清对高葡萄糖环境下大鼠心肌成纤维细胞的修复效果最佳,并可能通过激活TGF-β1/p38MAPK/CREB信号通路发挥保护作用。; 张常喜马琴张安妮陈立娟平昕翀; 关键词：大鼠心肌成纤维细胞含药血清

m^(6)A去甲基化酶ALKBH5对高糖诱导心肌成纤维细胞增殖与迁移能力的影响: 2025年; 目的探究N 6-甲基腺苷(N 6-methyladenosine,m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5对高糖诱导心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖与迁移能力的影响。方法解剖消化新生乳鼠的心脏提取原代CFs,在光学显微镜及共聚焦显微镜下鉴定细胞类型。使用高糖培养基(33 mmol·L-1葡萄糖)诱导细胞活化,使用ALKBH5表达载体转染细胞构建ALKBH5过表达模型。通过免疫荧光染色、Western blot和RT-qPCR检测CFs中去甲基化酶ALKBH5表达变化;Dot blot方法检测m^(6)A水平的变化;Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及纤维化关键指标Ⅰ型胶原的表达变化;EdU染色法检测CFs增殖能力;Transwell迁移实验检测CFs的迁移能力。结果在高糖诱导下,CFs中ALKBH5的表达量明显下降,m^(6)A水平明显上升;同时增殖指标PCNA和纤维化指标Ⅰ型胶原的表达量明显升高,细胞增殖和迁移能力明显提升。过表达ALKBH5逆转了上述变化。结论ALKBH5过表达可抑制PCNA和Ⅰ型胶原的表达,并减弱CFs的增殖和迁移能力,其作用可能与m^(6)A甲基化修饰有关。; 刘芷言林丽婵刘震宇沙纪名刘鹏毛遂张云森李锐张野陶辉; 关键词：心肌成纤维细胞增殖迁移心肌纤维化

芍药苷对血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞纤维化的保护作用: 2025年; 背景:研究表明芍药苷对肝、肾等器官纤维化具有改善作用,尤其是在肝纤维化中表现出突出优势,但芍药苷对于血管紧张素Ⅱ诱导的心肌纤维化的保护作用尚不明确。目的:探讨芍药苷对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞的保护作用及分子机制。方法:在分离培养的SD大鼠乳鼠心肌成纤维细胞中加入血管紧张素Ⅱ(1μmol/L)干预48 h作为模型组;芍药苷低、高剂量组给予不同剂量的芍药苷(50,100μmol/L)预处理2 h,再用血管紧张素Ⅱ处理48 h;SIRT1抑制剂组先用10μmol/L SIRT1抑制剂EX527处理2 h,再用100μmol/L芍药苷处理2 h,最后用血管紧张素Ⅱ处理48 h。采用CCK-8法检测细胞活力,Transwell检测细胞迁移能力,用DHA荧光探针检测细胞内活性氧水平,用试剂盒检测氧化应激标志物水平,Western blot检测纤维化相关基因的蛋白表达,qRT-PCR检测细胞外基质和纤维化相关基因的mRNA表达。结果与结论:①与对照组相比,血管紧张素Ⅱ干预后心肌成纤维细胞的增殖、迁移能力明显提高,细胞内活性氧和丙二醛水平升高,超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性降低,α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、纤维连接蛋白、结缔组织生长因子、基质金属蛋白酶9的mRNA表达增加;与模型组相比,芍药苷剂量依赖性抑制上述效应改变(P<0.01);②与模型组相比,芍药苷剂量依赖性上调SIRT1的蛋白表达(P<0.001);③与芍药苷高剂量组相比,SIRT1抑制剂组细胞迁移数量、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白表达水平显著增加(P<0.01)。结果表明,芍药苷可能通过上调SIRT1的表达,有效减轻了血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞纤维化改变,剂量依赖性地抑制了心肌成纤维细胞氧化应激和细胞外基质沉积,对于心肌成纤维细胞纤维化具有保护作用。; 纪雅琼宁忠平; 关键词：芍药苷心肌成纤维细胞细胞外基质纤维化氧化应激

苓桂术甘汤调控Wnt/β-catenin通路抑制心肌成纤维细胞纤维化: 2024年; 该研究旨在通过观察苓桂术甘汤(Linggui Zhugan Decoction,LGZGD)含药血清对心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)纤维化及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路蛋白分子表达的调控机制。制备空白血清和LGZGD含药血清,胰酶-胶原酶依次消化并结合差速贴壁法分离培养原代CFs,采用免疫荧光标记鉴定原代CFs。设正常对照组,模型组,20%空白血清组,5%、10%、20%LGZGD含药血清组。分别用20%空白血清,5%、10%、20%LGZGD含药血清预处理12 h,除正常对照组,其余5组均加入过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))刺激细胞,建立原代CFs纤维化模型。采用划痕愈合实验观察细胞迁移能力,ELISA法检测Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,ColⅢ)含量,Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Wnt1、糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3 beta,GSK-3β)、磷酸化糖原合酶激酶3β(phospho synthase kinase 3 beta,p-GSK-3β)、β-catenin及细胞核β-catenin的蛋白表达,RT-qPCR检测β-catenin、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP9)的基因表达,免疫荧光技术检测关键蛋白α-SMA、β-catenin的表达及定位。制备Wnt1过表达CFs,采用H_(2)O_(2)处理CFs。设正常对照组、模型组、20%LGZGD含药血清组、空载质粒+20%LGZGD含药血清组、Wnt1过表达+20%LGZGD含药血清组。采用ELISA法检测ColⅠ、ColⅢ的含量与其比值,Western blot法检测α-SMA和Wnt1、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin及细胞核β-catenin的蛋白表达,RT-qPCR检测β-catenin、MMP9的基因表达。免疫荧光染色显示,心肌成纤维细胞Vimentin表达阳性,呈绿色,胞核为蓝色,纯度大于90%,鉴定是原代CFs。结果显示,与正常对照组相比,模型组CFs愈合率增强,ColⅠ、ColⅢ含量升高,ColⅠ/ColⅢ比值增大,α-SMA、Wnt1、p-GSK-3β、β-catenin、核β-catenin蛋白表达上调,GSK-3β蛋白表达降低,β-catenin、MMP9 mRNA表达显著升高,β-catenin、�; 丁芮李向阳王翔王靓周鹏黄金玲; 关键词：苓桂术甘汤慢性心力衰竭心肌纤维化心肌成纤维细胞

活血潜阳祛痰方抑制心肌成纤维细胞增殖的机制研究: 2024年; 目的观察活血潜阳祛痰方(HQQR)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响及可能机制。方法分离、培养SD大鼠原代CFs,并进行鉴定。应用AngⅡ诱导CFs建立体外心肌纤维化模型。将CFs分成空白细胞组、AngⅡ组、AngⅡ+HQQR(低剂量)组、AngⅡ+HQQR(高剂量)组和AngⅡ+缬沙坦组,作用48 h。应用CCK-8法检测各组细胞增殖水平,流式细胞仪检测各组细胞ROS水平,Elisa检测各组上清中羟脯氨酸水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测NADPH氧化酶4(NOX4)、核因子κB p65(NF-κB p65),细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和p-ERK1/2的水平,对相关数据进行统计分析。结果HQQR可显著改善AngⅡ诱导CFs增殖。AngⅡ组上清中羟脯氨酸水平显著高于空白组(P<0.05),ROS水平和NOX4蛋白表达量亦显著升高(P<0.05)。AngⅡ刺激CFs后,细胞中NF-κB p65蛋白表达量和ERK1/2磷酸化比值高于空白细胞组(P<0.05)。HQQR治疗可以改善CFs增殖和胶原分泌,降低ROS水平,并显著减少NOX4、NF-κB p65蛋白表达量和ERK1/2磷酸化比值,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HQQR可能通过抑制氧化应激、减轻炎症反应来抑制CFs增殖,改善心肌纤维化。; 芦波周训杰桂明泰马玉龙陈晓喆姚磊李建华王明珠符德玉; 关键词：心肌成纤维细胞炎症氧化应激

过表达sFRP3对小鼠原代心肌成纤维细胞活化增殖的影响被引量：1: 2024年; 目的探讨Wnt信号通路调控剂分泌型卷曲相关蛋白3(sFRP3)在小鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用。方法购入1~3 d的小鼠乳鼠,行手术对心脏取材,消化后分离CFs进行培养。细胞贴壁生长后使用转化生长因子(TGF-β1)刺激构建CFs活化增殖模型;确认模型构建成功后分别向实验组和对照组细胞转染sFRP3过表达质粒和空载质粒24~48 h。通过Western blot、qRT-PCR的方法在分子层面对sFRP3、Periostin(POSTN)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达进行检测;使用MTT法、CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖能力的改变。结果在TGF-β1刺激构建的CFs活化增殖模型中,相较于对照组,模型组sFRP3蛋白及mRNA表达下降,活化增殖相关蛋白PCNA、POSTN和CollagenⅠ表达上调。另外,在质粒转染sFRP3过表达组的CFs中,PCNA、POSTN和CollagenⅠ蛋白及mRNA表达相较于空载组下降。MTT、CCK-8与EdU实验表明,质粒转染sFRP3过表达组的CFs增殖活性较空载组明显下降。结论过表达sFRP3明显抑制CFs活化增殖,提示sFRP3可能是参与调控CFs活化增殖的关键基因。; 江舜祥涂彬宋凯何缓缓陶辉曹炜; 关键词：心肌成纤维细胞心肌纤维化活化增殖

TEAD1在小鼠急性心肌梗死后心肌成纤维细胞中的表达: 2024年; 目的观察转录因子TEAD1在小鼠急性心肌梗死后心肌成纤维细胞中的表达情况,为探究其作用机制提供理论基础。方法取40只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为急性心肌梗死组(AMI组)和假手术组(Sham组),术后以普通饲料喂养至1、3、7、14 d处死并取材。本研究以实时心电图变化、TTC染色判断造模是否成功,使用蛋白印迹法检测心脏中TEAD1的表达情况,使用TEAD1免疫荧光和麦胚凝集素(WGA)染色双标法检测TEAD1在心肌组织中的表达情况,使用免疫荧光双标法检测TEAD1在心肌成纤维细胞中的表达情况。结果与Sham相比,AMI组第3天和第7天TEAD1在心脏中表达明显增加(P<0.05),AMI组各天数梗死交界区TEAD1表达量明显增加(P<0.05),呈现先增后减的趋势,且第3天表达量最多,各相邻天数TEAD1的表达量之间差异均具有统计学意义(P<0.05);免疫荧光双标结果显示转录因子TEAD1在急性心肌梗死后心肌组织的心肌成纤维细胞中呈现高表达,且相较于Sham组,AMI组表达TEAD1的心肌成纤维细胞数量在急性心肌梗死后明显增加(P<0.05),以第7天和第14天较多,并主要在梗死交界区表达。结论TEAD1在急性心肌梗死后心肌组织中梗死交界区表达明显增加,且在心肌成纤维细胞中呈现高表达。; 张驰李礼燕茹裴建升张萌贾绍斌; 关键词：急性心肌梗死心肌成纤维细胞小鼠

一种适用于提取不同种属特定部位心肌成纤维细胞的分离培养方法: 本发明公开了一种适用于提取不同种属特定部位心肌成纤维细胞的分离培养方法。本发明将二型胶原酶溶解在无血清DMEM中配制组织消化液，对离体的动物心脏组织用所述组织消化液采用酶消化法分离培养特定部位心肌成纤维细胞。本发明针对传...; 孙爱军葛均波金亚伟孙晓垒陈学颖邱楠张景洪张育宁

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