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基于响应面分析的高抗原活性猪链球菌2型疫苗培养基的研制与效果评价研究被引量：1: 2024年; 试验旨在研制具有高抗原活性的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)疫苗培养基。研究以SS2 CVCC60615株为试验对象,通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面分析得到SS2疫苗培养基。培养基发酵验证结果显示,SS2疫苗培养基菌液最大活菌数为1.09×10^(9) CFU/mL,是TSB培养基最大活菌数的2.41倍。测定SS2不同时间点的抗原活性发现,在SS2发酵培养过程中当活菌数达到最大值后的1~3 h内细菌的抗原活性最高。小鼠感染试验表明,SS2抗原活性最高时制备的灭活疫苗与商品化灭活疫苗相比具有更高的免疫球蛋白G(IgG)抗体效价和疫苗保护率。研究表明,采用研制得到的高抗原活性SS2疫苗培养基制备的灭活疫苗具有IgG抗体效价高、免疫保护力强的优点。; 苗森牛得权张阳阳刘翔蒋富凤张菊梅万强吴清平; 关键词：猪链球菌2型

结核分枝杆菌Rv2626c蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定: 2024年; 目的构建结核分枝杆菌Rv2626c蛋白的重组表达载体,在大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)中表达、纯化后研究Rv2626c重组蛋白的抗原性。方法将GenBank公布的结核分枝杆菌H37Rv株Rv2626c蛋白的氨基酸序列(登录号:CCP45424.1)按E.coli密码子偏好转换为对应的DNA序列,合成该DNA序列并克隆至pET24a(+)质粒上,构建pET24a(+)-Rv2626c重组质粒,转化至E.coli BL21(DE3)中,以不同的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactopyranoside,IPTG)浓度、温度和时间条件下诱导表达Rv2626c蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)对Rv2626c重组蛋白进行鉴定。利用镍螯合亲和层析法纯化Rv2626c重组蛋白并将其免疫青紫蓝兔,制备抗Rv2626c抗血清,采用Western Blot和酶联免疫吸附法分别检测抗血清的特异性和效价。结果pET24a(+)-Rv2626c重组质粒构建成功。SDS-PAGE检测显示:转入该重组质粒的E.coli经IPTG诱导后表达Rv2626c重组蛋白,分子量约14500,大小与预期相符;Rv2626c重组蛋白的最佳诱导表达条件为31℃1.0 mmol/L IPTG诱导表达6 h,目的蛋白主要以可溶性形式存在,与Western Blot检测结果一致。Rv2626c重组蛋白免疫青紫蓝兔获得的高免血清特异性良好,经酶联免疫吸附法测定该血清效价为1∶256000。结论在E.coli中成功表达结核分枝杆菌Rv2626c蛋白,且纯化的Rv2626c重组蛋白具有较好的纯度和抗原活性,为进一步揭示其生物学功能奠定基础。; 张光磊孙田华吴智远张婷婷胡丽娜王婷李会蒋保余李朋伟焦磊; 关键词：结核分枝杆菌

硫柳汞对疫苗抗原活性的影响及其作用机制被引量：2: 2023年; 硫柳汞作为防腐剂常被用于生物制品,尤其是疫苗中。目前,大多数国家已将硫柳汞从单剂量疫苗中移除,但其仍广泛应用于多剂量疫苗中。硫柳汞作为疫苗制剂中的组分,应与其他成分相互兼容,尤其不能损害抗原的活性。但近年来多项研究报道,硫柳汞可致疫苗抗原的抗原性和免疫原性降低,尤其是含有或富含半胱氨酸(cysteine,Cys)的蛋白抗原,提示将硫柳汞作为疫苗防腐剂时应充分考察其对疫苗抗原活性的影响。本文对硫柳汞对2种灭活疫苗和3种重组蛋白疫苗抗原性和免疫原性的影响及其可能的作用机制作一综述,为疫苗防腐剂的合理选择提供参考。; 张秀丽张志刚(综述)赵勤俭; 关键词：硫柳汞蛋白抗原抗原性免疫原性

高抗原活性的猪大肠杆菌培养基及制备方法、应用: 本发明公开了一种高抗原活性的猪大肠杆菌培养基及制备方法、应用。高抗原活性的猪大肠杆菌培养基组成为：促生长肽5～15 g/L，酵母粉2～10 g/L，牛肉浸粉2～10 g/L，葡萄糖2～8 g/L，磷酸氢二钾1～5 g/L...; 吴清平张阳阳万强刘翔牛得权苗森蒋富凤曲晓莹张菊梅蔡芷荷吴高勇

高抗原活性的猪链球菌2型培养基及其制备方法、应用: 本发明公开了一种高抗原活性的猪链球菌2型培养基及其制备方法、应用，所述猪链球菌2型培养基组成为：胰酪蛋白胨11g/L～13.75g/L、酵母粉4g/L～5g/L、葡萄糖4g/L～5g/L、K<Sub>2</Sub>HPO...; 吴清平苗森万强牛得权张阳阳刘翔曲晓莹蒋富凤张菊梅蔡芷荷吴高勇

高抗原活性的鸭疫里默氏杆菌2型培养基及制备方法、应用: 本发明公开了一种高抗原活性的鸭疫里默氏杆菌2型培养基及制备方法、应用，所述高抗原活性的鸭疫里默氏杆菌2型培养基组成为：酵母粉18～23 g/L、牛肉浸粉5～8 g/L、促生长肽3～6 g/L、水解乳蛋白2～5 g/L、氯...; 吴清平牛得权万强苗森刘翔张阳阳蒋富凤曲晓莹张菊梅蔡芷荷吴高勇

高抗原活性的禽多杀性巴氏杆菌培养基、制备方法及应用: 本发明公开了一种高抗原活性的禽多杀性巴氏杆菌培养基、制备方法及应用，该高抗原活性的禽多杀性巴氏杆菌培养基组成为：细菌学蛋白胨8～13 g/L、促生长肽3～8 g/L、酵母粉18～23 g/L、葡萄糖2～7 g/L、氯化钠...; 吴清平刘翔万强张阳阳牛得权苗森曲晓莹蒋富凤张菊梅蔡芷荷阳中和

基于响应面分析的高抗原活性猪水肿病大肠杆菌疫苗培养基的研制及效果评价被引量：1: 2023年; 【背景】猪水肿病大肠杆菌引发的疾病造成了很大的危害,但现有培养基存在培养密度低的问题。【目的】研制出高抗原活性猪水肿病大肠杆菌疫苗培养基。【方法】以常用的市售猪水肿培养基为对照,通过单因素试验、爬坡试验(Plackett-Burman,PB)、响应面(Box-Behnken,BB)试验对猪水肿培养基进行响应面优化,得到猪水肿培养基最优配方。以响应面试验得到的培养基培养猪水肿病大肠杆菌,评价不同培养时间点菌株的抗原活性,制作灭活疫苗,进行动物免疫保护试验。【结果】对研制的培养基进行扩大培养验证,发现扩大培养得到的菌株活菌数可达5×10^(9) CFU/mL以上,约为对照组的2倍。制备的灭活疫苗效价可达1:140000,并在9 h时抗原蛋白效价达到最高。【结论】本研究研制出的疫苗培养基显著提高了猪大肠杆菌菌体密度,并可提高菌体抗原活性,为猪水肿病灭活疫苗的制备提供了技术指引。; 张阳阳万强牛得权苗森蒋富凤刘翔曲晓莹张菊梅蔡芷荷陈博吴清平; 关键词：猪水肿病响应面法

基于响应面分析的高抗原活性鸭疫里默氏杆菌疫苗培养基的研制及其效果评价: 2023年; 【背景】鸭疫里默氏杆菌广泛存在于养殖场,引起雏鸭发生传染性浆膜炎,严重危害养鸭业的发展。【目的】提高鸭疫里默氏杆菌发酵培养水平和抗原活性,为鸭疫里默氏杆菌灭活疫苗的研制提供技术指引。【方法】利用单因素及响应面的试验设计方法,针对鸭疫里默氏杆菌进行疫苗培养基的研制,并探究不同发酵时间点该菌的抗原活性,选择抗原活性最高点时制备灭活疫苗,通过动物免疫保护试验评价疫苗免疫效果。【结果】使用研制的疫苗培养基发酵培养鸭疫里默氏杆菌,其活菌数能够达到4.68×10^(10) CFU/mL,较市面上该菌专用的培养基提高2.29倍。该菌发酵12 h后抗原活性达到最高,在此时制备的灭活疫苗诱导小鼠产生的抗体水平显著高于商品化灭活疫苗,攻毒保护率达到了100%。【结论】本研究研制的培养基具有优异的增菌效果,可作为生产鸭疫里默氏杆菌灭活疫苗抗原的发酵培养基,疫苗生产过程中可选择菌株抗原活性达到最高时收集菌体。; 牛得权万强苗森刘翔张阳阳蒋富凤曲晓莹张菊梅蔡芷荷陈博吴清平; 关键词：鸭疫里默氏杆菌抗原活性响应面

基于响应面法的高抗原活性禽多杀性巴氏杆菌疫苗培养基的研制与效果评价: 2023年; 【背景】禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)引发的禽霍乱疫情造成了巨大的危害,而现有培养基存在培养菌密度较低的问题。【目的】研制高抗原活性的禽多杀性巴氏杆菌疫苗培养基。【方法】通过单因素试验、Plackett-Burman试验和响应面分析方法对禽多杀性巴氏杆菌培养基的成分进行调整,并对不同发酵阶段的菌体进行免疫原性测定。最后使用该培养基培养细菌后制备疫苗并通过动物攻毒试验评价其保护效果。【结果】使用研制的培养基培养禽多杀性巴氏杆菌,活菌密度能够在6 h达到约1.84×1010 CFU/mL,增菌效果是对照培养基的2.6倍;免疫原性测定结果显示在生长平台期菌体的抗原活性最高;攻毒试验表明制备的疫苗能够很好地抵抗禽多杀性巴氏杆菌的侵袭。【结论】研制出了高抗原活性的禽多杀性巴氏杆菌疫苗培养基,为疫苗的生产奠定了基础。; 刘翔万强苗森牛得权张阳阳蒋富凤曲晓莹张菊梅蔡芷荷陈博吴清平; 关键词：禽多杀性巴氏杆菌响应面法

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