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李属坏死环斑病毒标准物质的研制与定值方法研究: 王丹

分泌抗李属坏死环斑病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用: 本发明公开了一种分泌抗李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ring‑spot virus，PNRSV)单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用。以原核表达的PNRSV衣壳蛋白(coat protein,CP)为抗原免疫...; 吴建祥戚朵周雪平

李属坏死环斑病毒和猕猴桃溃疡病菌血清学检测技术研究: 李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)和引起猕猴桃溃疡病的丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.Actinidiae,Psa)...; 戚朵; 关键词：李属坏死环斑病毒猕猴桃溃疡病 DOT-ELISA

李属坏死环斑病毒扬州分离物CP基因的原核表达及抗血清制备被引量：2: 2023年; 李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)严重危害蔷薇科植物,在世界范围内普遍分布。为建立快速有效的PNRSV检测方法,依据PNRSV CP基因序列设计引物,并从桃叶片上扩增PNRSV-CP片段,将双酶切产物插入原核表达载体pET28a中,获得重组质粒pET28a-CP^(PNRSV),转化大肠埃希菌Rosetta菌株,IPTG诱导重组蛋白表达。SDS-PAGE电泳检测显示,在分子量约25 ku处有蛋白质条带,符合预期大小。镍柱亲和纯化PNRSV CP蛋白,以其纯化蛋白质免疫健康新西兰白兔,制备多克隆抗血清。Western blot、ELISA、Dot blot检测结果显示,制备的抗血清能检测到PNRSV CP基因在感病植物叶片中表达,而在健康植株中未检测到;制备的抗血清滴度稀释至1∶64000时,仍能与纯化蛋白质发生特异性反应。综上,制备的PNRSV抗血清特异性强、效价高,可用于PNRSV的快速检测。; 王智磊纪开燕赵景奎丁诗文徐小伟秦朗张坤贺振; 关键词：李属坏死环斑病毒原核表达抗血清

一种快速检测甜樱桃李属坏死环斑病毒的方法: 本发明涉及植物病毒检测技术领域，特别涉及一种甜樱桃李属坏死环斑病毒的检测方法。包括以下步骤：1)、DNA片段与探针的设计合成；2)纳米金的制备；3)、纳米金‑探针1复合物的制备；4)、试纸条的组装；5)、样品的制备；6)...; 王磊宿红艳吴凡林朱冬姿王雪辉王先钰; 文献传递

采用反转录环介导等温扩增技术检测李属坏死环斑病毒（PNRSV）的方法: 本发明涉及采用反转录环介导等温扩增技术检测李属坏死环斑病毒的方法，其中该方法包括李属坏死环斑病毒总RNA提取，RT‑LAMP反应和电泳检测，确定样品是否带有PNRSV病毒。本发明根据李属坏死环斑病毒的基因保守区设计了RT...; 冯超红任应党杨琳琳马晓静南文浩王光华张金虎; 文献传递

辽西李属坏死环斑病毒检测及其多样性分析被引量：2: 2017年; 采用RT-PCR对辽西地区采集的45份核果叶片样品进行了李属坏死环斑病毒(PNRSV)的鉴定,其中9份样品为阳性。以阳性样品总RNA为模板,克隆了PNRSV基因组RNA3近全长序列。序列长度在1 612~1 619 bp之间,一致性为93.8%~100%。以本研究获得的9个和Gen Bank登录的42个PNRSV近全长RNA3序列为基础,截取cp基因、mp基因和近全长RNA3序列分别构建系统发育树,三者结果一致:均可将51个PNRSV分离物分为4个组,即PV32、PV96、PE5和本文报道的一个新的PNRSV组,9个辽西分离物分别属于PV32组或PV96组。本研究明确了我国辽西地区PNRSV的遗传多样性,证明了PNRSV基因组RNA3在研究PNRSV遗传多样性中的适用性,同时发现了一个新的PNRSV组,对于PNRSV遗传多样性研究意义重大。; 李正男董雅凤张双纳张尊平范旭东任芳胡国君; 关键词：李属坏死环斑病毒 CP基因

李属坏死环斑病毒辽宁桃树分离物基因组分析被引量：2: 2017年; 采用RT-PCR和RACE技术,克隆了李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)辽宁桃树分离物全长基因组。用Vector NTI Advance 11软件进行基因组结构注释。用SDTv.1.0软件分析该分离物与Gen Bank中公布的其他PNRSV分离物间的核酸一致性,并用MEGA5.0软件和RDP3软件对各PNRSV分离物进行系统发育分析和重组分析。结果显示:PNRSV辽宁桃树分离物基因组由3条正义单链RNA组成。RNA1由3 332个核苷酸构成,具有一个开放阅读框(nt 30~3 167),编码一个约117.0k D的复制酶相关蛋白P1。RNA2由2 591个核苷酸构成,具有一个开放阅读框(nt 27~2 426),编码一个约99.0 k D的复制酶相关蛋白P2。RNA3由1 943个核苷酸构成,具有两个互不重叠的开放阅读框分别编码一个运动蛋白(nt 175~1 026)和一个外壳蛋白(nt 1 100~1 774),这两个开放阅读框的间隔区为73个核苷酸。PNRSV辽宁桃树分离物的RNA1、RNA2和RNA3与其他已经公布的PNRSV分离物间,核酸序列一致性分别为91.8%~98.8%,93.3%~99.2%和87.7%~99.0%。基于RNA1、RNA2和RNA3全长序列构建的系统发育进化树,分别将已报道的PNRSV分离物划分为3个、2个和3个组,PNRSV辽宁桃树分离物分别属于RNA1Ⅰ组、RNA2Ⅰ组和PV96组。基于RNA1、RNA2和RNA3全长序列进行的重组分析表明各PNRSV分离物基因组间不存在重组。PNRSV辽宁桃树分离物基因组序列是世界首个来源于桃树的PV96组基因组序列。; 李正男张双纳张尊平范旭东任芳胡国君董雅凤; 关键词：李属坏死环斑病毒基因组运动蛋白外壳蛋白

一种百合李属坏死环斑病毒PNRSV半定量检测金标卡的制备方法: 一种百合李属坏死环斑病毒半定量检测金标卡及制备方法，为了提高胶体金免疫层析检测方法的使用效率和田间普及率，实现对百合病毒的快速且半定量检测，将检测线增加至三条，再将已知量的有浓度差异的抗体分别包被于检测线，研制能快速半定...; 张玉宝王亚军刘维谢忠奎王若愚郭志鸿王乐; 文献传递

进境玫瑰鲜切花李属坏死环斑病毒的检测鉴定: 2017年; 近期上海口岸连续多次从进境的玫瑰鲜切花中检出我国检疫性有害生物李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV),通过DAS-ELISA、RT-PCR、SYBR Green I实时荧光RT-PCR和序列分析等4种方法分别检测和复验该病毒,结果均为阳性,由此确定从进境玫瑰鲜切花中检出了PNRSV。同时本文分别检测玫瑰叶片、花瓣、茎干和花萼,结果均带有PNRSV,确定该病毒系统侵染玫瑰。; 于子翔宋绍祎徐之雯杨翠云胡培龙徐飞于翠; 关键词：李属坏死环斑病毒 SYBR

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