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一种检测水疱 性 口炎 病毒 的引物和探针及其应用 本发明公开了一种检测水疱 性 口炎 病毒 的引物和探针及其应用。所述引物包括上游引物FP和下游引物RP;所述上游引物FP的核苷酸序列包括SEQ ID NO:1所示的序列,所述下游引物RP的核苷酸序列包括SEQ ID NO:2所示... 陈源源 贺丽红 陆钰 汪景长 童涌口蹄疫病毒 抗体和/或水疱 性 口炎 病毒 的检测试剂盒 本发明涉及医学检测技术领域,公开了口蹄疫病毒 抗体和/或水疱 性 口炎 病毒 的检测试剂盒;所述检测试剂盒包括检测卡、样本稀释液和吸滴管,其中所述检测卡包括底板、一个样品垫和两个检测部,两个所述检测部分别用于检测口蹄疫病毒 抗体和水... 左青山 宋启超 田露露 刘禄情一种无感染性 水疱 性 口炎 病毒 RNA假病毒 、其制备方法及应用 本申请公开了一种无感染性 水疱 性 口炎 病毒 RNA假病毒 、其制备方法及应用。一方面,本申请提供了一种无感染性 水疱 性 口炎 病毒 缺陷型包膜质粒,所述缺陷型包膜质粒的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。第二方面,本申请提供了一种无... 买磊 闫博文 董海阳细胞外基质蛋白ABI3BP抗水疱 性 口炎 病毒 初步作用研究 2024年 目的探讨细胞外基质蛋白ABI3BP对水疱 性 口炎 病毒 (vesicular stomatitis virus,VSV)基因组复制和先天免疫信号通路的影响。方法在人皮肤成纤维细胞BJ-5ta中转染小干扰RNA(siRNA)敲低ABI3BP基因,建立ABI3BP基因缺失的VSV-GFP病毒 感染细胞模型。通过鬼笔环肽细胞免疫荧光实验,检测敲低ABI3BP后细胞内肌动蛋白(F-actin)形态结构的变化。在ABI3BP基因缺失的VSV-GFP病毒 感染细胞模型上,利用RT-qPCR方法检测细胞中病毒 mRNA水平的变化。利用免疫印迹法(Western blotting)检测IRF3和TBK1磷酸化水平的变化。结果成功建立敲减ABI3BP基因的VSV-GFP感染的细胞模型。鬼笔环肽细胞免疫荧光染色表明,敲减ABI3BP基因后,细胞内F-actin的表达发生结构重排。采用不同剂量的病毒 感染细胞,与对照组相比,ABI3BP敲低细胞中基因拷贝数分别增加2.5~3.5倍(P<0.01)和2.2~4倍(P<0.01),VSV-GFP病毒 蛋白表达水平显著上调;在ABI3BP基因敲低的细胞模型上,VSV-GFP病毒 感染导致Ⅰ型干扰素免疫通路关键免疫分子p-IRF3和p-TBK1蛋白磷酸化水平明显下调。结论本研究表明细胞外基质蛋白ABI3BP对维持细胞内F-actin纤维网状结构具有重要作用。ABI3BP缺失促进RNA病毒 的复制,ABI3BP是I型干扰素通路激活的重要调控分子。 孟祥博 陈美桦 许诺 李天琪 李帅臣 周孙欣 陈欢 张彤关键词:细胞外基质蛋白 肌动蛋白 水疱性口炎病毒 病毒复制 eEF1A1调控水疱 性 口炎 病毒 和单纯疱疹病毒 复制的初步研究 2024年 目的 探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)对水疱 性 口炎 病毒 (VSV)和单纯疱疹病毒 (HSV-1)复制的影响,以确定一个广谱抗病毒 新靶点。方法 在人皮肤成纤维细胞(BJ-5ta)中转染小干扰RNA(sieEF1A1)抑制eEF1A1表达,同时设置阴性 对照组,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与Western印迹法检测转染效率,制备eEF1A1基因沉默的细胞模型。用VSV感染细胞模型,检测细胞内VSV的基因拷贝数和蛋白水平;用HSV-1感染细胞模型,检测细胞内HSV-1的mRNA水平和蛋白水平。用聚胞苷酸[poly(I:C)]或脱氧核糖核酸钠盐(HT-DNA)分别转染细胞模型,RT-qPCR检测干扰素β(IFN-β)、趋化因子10(CXCL10)和干扰素刺激基因56(ISG56)的mRNA水平,Western印迹法检测干扰素调节因子3(IRF3)和TANK结合激酶1(TBK1)蛋白磷酸化水平。结果 与阴性 对照组相比,eEF1A1基因沉默组eEF1A1的mRNA水平和蛋白水平显著降低(P<0.01),eEF1A1基因沉默的细胞模型构建成功。与阴性 对照组相比,eEF1A1基因沉默组的VSV基因拷贝数下降70%~80%,VSV蛋白水平显著降低(P<0.01);HSV-1的mRNA水平下降50%~60%,HSV蛋白水平显著降低(P<0.01)。poly(I:C)或HT-DNA刺激后,与阴性 对照组相比,eEF1A1基因沉默组的IFN-β、ISG56和CXCL10的mRNA水平以及IRF3与TBK1的蛋白磷酸化水平无显著差异。结论 eEF1A1调控VSV和HSV-1病毒 复制,提示eEF1A1对RNA病毒 和DNA病毒 具有潜在的广谱调控作用,且可能不通过胞内核酸识别激活的免疫通路。 陈美桦 徐含翠 王林旭 罗洪 齐琦 王勃 段小涛关键词:水疱性口炎病毒 单纯疱疹病毒 病毒复制 建立基于水疱 性 口炎 病毒 载体的复制型重组病毒 用于研究SADS-CoV入侵和疫苗开发 本发明公开了建立基于水疱 性 口炎 病毒 载体的复制型重组病毒 用于研究SADS‑CoV入侵和疫苗开发。本发明提供了重组水疱 性 口炎 病毒 rVSV‑Venus‑SADS SΔ11,其基因组序列为将水疱 性 口炎 病毒 基因组序列中的G基因替换... 丁强 朱子慧过表达JMJD6基因的293T细胞系的构建及对水疱 性 口炎 病毒 增殖效率的评价 2024年 为提高水疱 性 口炎 病毒 (vesicular stomatitis virus,VSV)在细胞中的增殖效率,本研究利用慢病毒 包装系统构建Jumonji C结构域蛋白6(Jumonji domain-containing protein 6,JMJD6)过表达的HEK-293T/JMJD6细胞系,分析VSV在HEK-293T/JMJD6细胞系与HEK-293T细胞中的复制差异。首先以JMJD6基因为目标,构建重组质粒pLV-puro-3×Flag-JMJD6,并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒 包装。将包装好的慢病毒 感染HEK-293T细胞并通过嘌呤霉素筛选获得过表达JMJD6基因的阳性 细胞。利用Western-blot、间接免疫荧光试验、流式细胞术和蚀斑试验检测VSV在HEK-293T/JMJD6细胞系中的复制能力。结果显示,在HEK-293T/JMJD6细胞系中,VSV的复制能力显著增强。实时荧光定量检测VSV感染的HEK-293T/JMJD6细胞系和野生型HEK-293T细胞中干扰素下游基因的表达,结果显示HEK-293T/JMJD6细胞系抑制VSV诱导的Ⅰ型干扰素下游基因的产生。总之,本研究构建的HEK-293T/JMJD6细胞系能显著促进VSV的增殖并抑制Ⅰ型干扰素信号通路,为VSV疫苗候选细胞株的筛选奠定了基础。 黄梦瑶 杨帆 杨洋 杨洋 王家丽 吕岳芹 赵晓义 陈治彤 曹伟军 张伟 曹伟军关键词:水疱性口炎病毒 干扰素 水疱 性 口炎 病毒 对小鼠乳腺癌4T1细胞荷瘤小鼠抗肿瘤免疫、移植瘤生长与肺转移的影响2024年 目的:探究野生型水疱 性 口炎 病毒 印第安纳株(VSV-IN)对小鼠三阴性 乳腺癌4T1细胞移植模型小鼠的免疫调节及肿瘤转移的影响。方法:VSV以MOI=1、MOI=10、MOI=100感染4T1细胞12、24、48 h后,CCK-8法检测4T1细胞死亡率,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,qPCR检测细胞中E-cadherin、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达。于雌性 BALB/c小鼠脂肪垫接种1×10^(6)个/mL的4T1细胞0.1 mL,构建4T1细胞荷瘤小鼠模型,待小鼠肿瘤体积达200 mm3,分别向移植瘤内注射PBS、紫杉醇(TAX)(15 mg/kg)、VSV-IN(1×10^(6)pfu/只),每周1次。给药4次后,处死小鼠、剥离完整移植瘤组织,测量肿瘤体积及质量,肺组织病理切片经H-E染色后观察肿瘤肺部转移结节,流式细胞术检测脾组织中T细胞亚群比例,ELISA法检测小鼠血清IL-6及TNF-α水平,利用GEPIA在线分析乳腺肿中迁移相关蛋白mRNA的表达,免疫组化法检测肿瘤中MMP-2、MMP-9与E-cadherin的表达,利用蛋白-蛋白对接技术预测VSV-IN的G蛋白、M蛋白与ERK2、E-cadherin的亲和力。结果:经MOI=10、100的VSV-IN处理48 h后,4T1细胞死亡率显著高于对照组(均P<0.01);与对照组相比,VSV-IN组(MOI=10)细胞迁移率明显降低(P<0.01),MMP-9 mRNA的相对表达量明显降低(P<0.05);与对照组小鼠相比,VSV-IN组移植瘤生长较对照组减缓且终点体积显著减小(P<0.05),VSV-IN组小鼠肺转移结节数量显著减少[(12.86±1.86)vs(24±3.67)个,P<0.01],脾内CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞比例显著升高(均P<0.05),血清TNF-α、IL-6含量显著升高(均P<0.01);GEPIA分析发现在乳腺癌中E-cadherin、MMP-9表达水平均高于癌旁组织(P<0.05);VSV-IN组小鼠肿瘤细胞内MMP-9表达明显低于对照组(P<0.05);VSV-IN的G、M蛋白与ERK2的结合自由能分别为–11.7 kcal/mol、–6.4 kcal/mol。结论:野生型VSV-IN可抑制4T1细胞荷瘤小鼠的移植瘤生长及转移,这可能与其促进抗肿瘤免疫及调控迁移相关蛋白表达有关。 李玉迁 徐庆胜 魏洪 魏洪 王硕石 蒋立娜 袁心怡一种基于水疱 性 口炎 病毒 的神经环路示踪工具病毒 本发明涉及一种基于水疱 性 口炎 病毒 的神经环路示踪工具病毒 ,属于生物技术领域。本发明提供了一种神经环路示踪工具病毒 ,所述神经环路示踪工具病毒 为核苷酸序列为SEQ ID NO.9所示的水疱 性 口炎 病毒 感染性 克隆拯救而得的重组水疱 ... 苏鹏 冯巍魏水疱 性 口炎 病毒 (VSV)拯救最佳质粒转染比例的初步摸索被引量:1 2023年 本研究拟筛选出一组水疱 性 口炎 病毒 (VSV)拯救的最佳质粒转染比例,以提高病毒 拯救效率。首先通过8组不同的转染比例进行病毒 拯救,发现有5种比例能够成功拯救病毒 ,然后通过空斑分析病毒 滴度,RT-q PCR检测病毒 VSV-N m RNA的相对表达量,Western-blot分析VSV-G的表达。结果显示,与其他转染比例组相比,转染比例g组(pN∶pP∶pL∶VSV=3∶5∶1∶5)的拯救效率最优,转染比例b组(pN∶pP∶pL∶VSV=0.5∶0.4∶0.2∶1)的拯救效率最低。上述结果表明,本研究首次筛选出一组VSV病毒 拯救的最佳质粒转染比例,为VSV反向遗传学的相关应用或研究提供了参考。 张永芝 杨帆 谭金龙 韩武玮怡 杨建社 张晋宽 刘瑞菊 赵伟杰 韩伟 何晓波 付宝权 李维克关键词:水疱性口炎病毒 病毒拯救
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