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一种检测水疱口炎病毒的引物和探针及其应用
本发明公开了一种检测水疱口炎病毒的引物和探针及其应用。所述引物包括上游引物FP和下游引物RP;所述上游引物FP的核苷酸序列包括SEQ ID NO:1所示的序列,所述下游引物RP的核苷酸序列包括SEQ ID NO:2所示...
陈源源贺丽红陆钰汪景长童涌
口蹄疫病毒抗体和/或水疱口炎病毒的检测试剂盒
本发明涉及医学检测技术领域,公开了口蹄疫病毒抗体和/或水疱口炎病毒的检测试剂盒;所述检测试剂盒包括检测卡、样本稀释液和吸滴管,其中所述检测卡包括底板、一个样品垫和两个检测部,两个所述检测部分别用于检测口蹄疫病毒抗体和水...
左青山宋启超田露露刘禄情
一种无感染水疱口炎病毒RNA假病毒、其制备方法及应用
本申请公开了一种无感染水疱口炎病毒RNA假病毒、其制备方法及应用。一方面,本申请提供了一种无感染水疱口炎病毒缺陷型包膜质粒,所述缺陷型包膜质粒的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。第二方面,本申请提供了一种无...
买磊闫博文董海阳
细胞外基质蛋白ABI3BP抗水疱口炎病毒初步作用研究
2024年
目的探讨细胞外基质蛋白ABI3BP对水疱口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)基因组复制和先天免疫信号通路的影响。方法在人皮肤成纤维细胞BJ-5ta中转染小干扰RNA(siRNA)敲低ABI3BP基因,建立ABI3BP基因缺失的VSV-GFP病毒感染细胞模型。通过鬼笔环肽细胞免疫荧光实验,检测敲低ABI3BP后细胞内肌动蛋白(F-actin)形态结构的变化。在ABI3BP基因缺失的VSV-GFP病毒感染细胞模型上,利用RT-qPCR方法检测细胞中病毒mRNA水平的变化。利用免疫印迹法(Western blotting)检测IRF3和TBK1磷酸化水平的变化。结果成功建立敲减ABI3BP基因的VSV-GFP感染的细胞模型。鬼笔环肽细胞免疫荧光染色表明,敲减ABI3BP基因后,细胞内F-actin的表达发生结构重排。采用不同剂量的病毒感染细胞,与对照组相比,ABI3BP敲低细胞中基因拷贝数分别增加2.5~3.5倍(P<0.01)和2.2~4倍(P<0.01),VSV-GFP病毒蛋白表达水平显著上调;在ABI3BP基因敲低的细胞模型上,VSV-GFP病毒感染导致Ⅰ型干扰素免疫通路关键免疫分子p-IRF3和p-TBK1蛋白磷酸化水平明显下调。结论本研究表明细胞外基质蛋白ABI3BP对维持细胞内F-actin纤维网状结构具有重要作用。ABI3BP缺失促进RNA病毒的复制,ABI3BP是I型干扰素通路激活的重要调控分子。
孟祥博陈美桦许诺李天琪李帅臣周孙欣陈欢张彤
关键词:细胞外基质蛋白肌动蛋白水疱性口炎病毒病毒复制
eEF1A1调控水疱口炎病毒和单纯疱疹病毒复制的初步研究
2024年
目的 探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)对水疱口炎病毒(VSV)和单纯疱疹病毒(HSV-1)复制的影响,以确定一个广谱抗病毒新靶点。方法 在人皮肤成纤维细胞(BJ-5ta)中转染小干扰RNA(sieEF1A1)抑制eEF1A1表达,同时设置阴对照组,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与Western印迹法检测转染效率,制备eEF1A1基因沉默的细胞模型。用VSV感染细胞模型,检测细胞内VSV的基因拷贝数和蛋白水平;用HSV-1感染细胞模型,检测细胞内HSV-1的mRNA水平和蛋白水平。用聚胞苷酸[poly(I:C)]或脱氧核糖核酸钠盐(HT-DNA)分别转染细胞模型,RT-qPCR检测干扰素β(IFN-β)、趋化因子10(CXCL10)和干扰素刺激基因56(ISG56)的mRNA水平,Western印迹法检测干扰素调节因子3(IRF3)和TANK结合激酶1(TBK1)蛋白磷酸化水平。结果 与阴对照组相比,eEF1A1基因沉默组eEF1A1的mRNA水平和蛋白水平显著降低(P<0.01),eEF1A1基因沉默的细胞模型构建成功。与阴对照组相比,eEF1A1基因沉默组的VSV基因拷贝数下降70%~80%,VSV蛋白水平显著降低(P<0.01);HSV-1的mRNA水平下降50%~60%,HSV蛋白水平显著降低(P<0.01)。poly(I:C)或HT-DNA刺激后,与阴对照组相比,eEF1A1基因沉默组的IFN-β、ISG56和CXCL10的mRNA水平以及IRF3与TBK1的蛋白磷酸化水平无显著差异。结论 eEF1A1调控VSV和HSV-1病毒复制,提示eEF1A1对RNA病毒和DNA病毒具有潜在的广谱调控作用,且可能不通过胞内核酸识别激活的免疫通路。
陈美桦徐含翠王林旭罗洪齐琦王勃段小涛
关键词:水疱性口炎病毒单纯疱疹病毒病毒复制
建立基于水疱口炎病毒载体的复制型重组病毒用于研究SADS-CoV入侵和疫苗开发
本发明公开了建立基于水疱口炎病毒载体的复制型重组病毒用于研究SADS‑CoV入侵和疫苗开发。本发明提供了重组水疱口炎病毒rVSV‑Venus‑SADS SΔ11,其基因组序列为将水疱口炎病毒基因组序列中的G基因替换...
丁强朱子慧
过表达JMJD6基因的293T细胞系的构建及对水疱口炎病毒增殖效率的评价
2024年
为提高水疱口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)在细胞中的增殖效率,本研究利用慢病毒包装系统构建Jumonji C结构域蛋白6(Jumonji domain-containing protein 6,JMJD6)过表达的HEK-293T/JMJD6细胞系,分析VSV在HEK-293T/JMJD6细胞系与HEK-293T细胞中的复制差异。首先以JMJD6基因为目标,构建重组质粒pLV-puro-3×Flag-JMJD6,并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装。将包装好的慢病毒感染HEK-293T细胞并通过嘌呤霉素筛选获得过表达JMJD6基因的阳细胞。利用Western-blot、间接免疫荧光试验、流式细胞术和蚀斑试验检测VSV在HEK-293T/JMJD6细胞系中的复制能力。结果显示,在HEK-293T/JMJD6细胞系中,VSV的复制能力显著增强。实时荧光定量检测VSV感染的HEK-293T/JMJD6细胞系和野生型HEK-293T细胞中干扰素下游基因的表达,结果显示HEK-293T/JMJD6细胞系抑制VSV诱导的Ⅰ型干扰素下游基因的产生。总之,本研究构建的HEK-293T/JMJD6细胞系能显著促进VSV的增殖并抑制Ⅰ型干扰素信号通路,为VSV疫苗候选细胞株的筛选奠定了基础。
黄梦瑶杨帆杨洋杨洋王家丽吕岳芹赵晓义陈治彤曹伟军张伟曹伟军
关键词:水疱性口炎病毒干扰素
水疱口炎病毒对小鼠乳腺癌4T1细胞荷瘤小鼠抗肿瘤免疫、移植瘤生长与肺转移的影响
2024年
目的:探究野生型水疱口炎病毒印第安纳株(VSV-IN)对小鼠三阴乳腺癌4T1细胞移植模型小鼠的免疫调节及肿瘤转移的影响。方法:VSV以MOI=1、MOI=10、MOI=100感染4T1细胞12、24、48 h后,CCK-8法检测4T1细胞死亡率,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,qPCR检测细胞中E-cadherin、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达。于雌BALB/c小鼠脂肪垫接种1×10^(6)个/mL的4T1细胞0.1 mL,构建4T1细胞荷瘤小鼠模型,待小鼠肿瘤体积达200 mm3,分别向移植瘤内注射PBS、紫杉醇(TAX)(15 mg/kg)、VSV-IN(1×10^(6)pfu/只),每周1次。给药4次后,处死小鼠、剥离完整移植瘤组织,测量肿瘤体积及质量,肺组织病理切片经H-E染色后观察肿瘤肺部转移结节,流式细胞术检测脾组织中T细胞亚群比例,ELISA法检测小鼠血清IL-6及TNF-α水平,利用GEPIA在线分析乳腺肿中迁移相关蛋白mRNA的表达,免疫组化法检测肿瘤中MMP-2、MMP-9与E-cadherin的表达,利用蛋白-蛋白对接技术预测VSV-IN的G蛋白、M蛋白与ERK2、E-cadherin的亲和力。结果:经MOI=10、100的VSV-IN处理48 h后,4T1细胞死亡率显著高于对照组(均P<0.01);与对照组相比,VSV-IN组(MOI=10)细胞迁移率明显降低(P<0.01),MMP-9 mRNA的相对表达量明显降低(P<0.05);与对照组小鼠相比,VSV-IN组移植瘤生长较对照组减缓且终点体积显著减小(P<0.05),VSV-IN组小鼠肺转移结节数量显著减少[(12.86±1.86)vs(24±3.67)个,P<0.01],脾内CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞比例显著升高(均P<0.05),血清TNF-α、IL-6含量显著升高(均P<0.01);GEPIA分析发现在乳腺癌中E-cadherin、MMP-9表达水平均高于癌旁组织(P<0.05);VSV-IN组小鼠肿瘤细胞内MMP-9表达明显低于对照组(P<0.05);VSV-IN的G、M蛋白与ERK2的结合自由能分别为–11.7 kcal/mol、–6.4 kcal/mol。结论:野生型VSV-IN可抑制4T1细胞荷瘤小鼠的移植瘤生长及转移,这可能与其促进抗肿瘤免疫及调控迁移相关蛋白表达有关。
李玉迁徐庆胜魏洪魏洪王硕石蒋立娜袁心怡
一种基于水疱口炎病毒的神经环路示踪工具病毒
本发明涉及一种基于水疱口炎病毒的神经环路示踪工具病毒,属于生物技术领域。本发明提供了一种神经环路示踪工具病毒,所述神经环路示踪工具病毒为核苷酸序列为SEQ ID NO.9所示的水疱口炎病毒感染克隆拯救而得的重组水疱...
苏鹏冯巍魏
水疱口炎病毒(VSV)拯救最佳质粒转染比例的初步摸索被引量:1
2023年
本研究拟筛选出一组水疱口炎病毒(VSV)拯救的最佳质粒转染比例,以提高病毒拯救效率。首先通过8组不同的转染比例进行病毒拯救,发现有5种比例能够成功拯救病毒,然后通过空斑分析病毒滴度,RT-q PCR检测病毒VSV-N m RNA的相对表达量,Western-blot分析VSV-G的表达。结果显示,与其他转染比例组相比,转染比例g组(pN∶pP∶pL∶VSV=3∶5∶1∶5)的拯救效率最优,转染比例b组(pN∶pP∶pL∶VSV=0.5∶0.4∶0.2∶1)的拯救效率最低。上述结果表明,本研究首次筛选出一组VSV病毒拯救的最佳质粒转染比例,为VSV反向遗传学的相关应用或研究提供了参考。
张永芝杨帆谭金龙韩武玮怡杨建社张晋宽刘瑞菊赵伟杰韩伟何晓波付宝权李维克
关键词:水疱性口炎病毒病毒拯救

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颜新敏
作品数:156被引量:399H指数:11
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所
研究主题:羊痘病毒 山羊痘病毒 山羊支原体山羊肺炎亚种 试剂盒 绵羊痘病毒
吴国华
作品数:126被引量:287H指数:9
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所
研究主题:羊痘病毒 山羊痘病毒 绵羊痘病毒 试剂盒 基因
卢昌
作品数:26被引量:21H指数:3
供职机构:中国农业科学院
研究主题:试剂盒 引物 检测试剂盒 水疱性口炎病毒 口蹄疫
朱海霞
作品数:91被引量:208H指数:7
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所
研究主题:羊痘病毒 山羊痘病毒 试剂盒 绵羊痘病毒 基因
李健
作品数:127被引量:307H指数:9
供职机构:西北农林科技大学
研究主题:羊痘病毒 山羊痘病毒 试剂盒 绵羊痘病毒 基因