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猪瘟病毒石门NS3蛋白的原核表达及其抗体检测间接ELISA的建立被引量:5
2017年
为配合猪瘟新型疫苗的研发,建立了猪瘟病毒NS3蛋白抗体检测间接ELISA,以期达到有效区分新型疫苗免疫猪与自然感染猪(包括常规疫苗接种猪)的目的。以接种猪瘟病毒(CSFV)石门的PK-15细胞为模板提取总RNA,经特异性PCR扩增获得长度为2 049bp的CSFV NS3基因,将其克隆至插入了具有自聚集自切割功能短肽的原核表达载体pET-32a(+),在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中优化表达CSFV石门NS3基因。Western blot分析表明重组蛋白NS3具有反应原性。将纯化的重组蛋白NS3作为包被抗原建立检测CSFV NS3抗体的间接ELISA,以美国爱德士(Idexx)猪瘟病毒抗体检测试剂盒抗体检测结果为标准,对502份血清样品进行检测。结果表明,所建立方法的特异性为96.9%,敏感性为89.7%,总符合率为95.8%,为猪瘟新型疫苗的推广应用提供了血清学检测方法。
陆欣然华思红樊钰莹白文顺杜敏孙永科杨玉艾
关键词:猪瘟病毒原核表达蛋白纯化间接ELISA
猪瘟病毒石门在ST细胞连续传代后E0基因变异分析
2016年
为了解猪瘟病毒(CSFV)石门(Shimen)连续传代后变异情况,根据已发表的CSFV E0基因序列(AF092448.2),设计合成引物,以在ST细胞中连续传代培养的CSFV石门细胞毒总RNA为模板,每5代通过RT-PCR方法扩增病毒的E0基因,测定其核苷酸序列和氨基酸序列,用DNA Star软件分析比较原代、5代、10代、15代、20代、25代接毒细胞中CSFV E0基因的变异性。结果显示,接种病毒第10代的病毒E0基因在630核苷酸位点出现变异,第15代病毒在632核苷酸位点出现变异。本研究通过分子生物学方法发现CSFV Shimen在ST细胞连续传代过程中E0基因能保持遗传的稳定性。
孙永科胡超英林明星陆欣然杨玉艾
关键词:猪瘟病毒连续传代ST细胞E0基因
构建基因组分节段的猪瘟病毒石门
猪瘟是由猪瘟病毒感染引起的出血性疾病,主要特征包括病毒侵染血管的凝固,血小板的减少,免疫抑制,是严重危害畜牧业生产的烈性传染病之一,被国际动物卫生组织(OIE)列入A类法定传染病,目前对猪瘟的研究大多集中于新型疫苗的研发...
闫红岩
关键词:猪瘟病毒病毒拯救
文献传递
猪瘟病毒石门与C感染宿主细胞差异表达基因及其在病毒致病中的作用
猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的猪的一种高度接触性传染病。在过去的几十年中,我国通过采取兔化弱毒疫苗免疫接种与扑杀相结合等措施,有效地控制了猪瘟的流行,但近年来我国猪瘟疫情又有所抬头,尤其是慢性猪瘟和非典型猪...
宁蓬勃
关键词:猪瘟病毒石门株
文献传递
猪瘟病毒石门E2蛋白在杆状病毒系统中的表达被引量:2
2012年
以杆状病毒Bac-to-Bac表达系统表达猪瘟病毒(CSFV)石门的E2蛋白,将CSFV石门的E2囊膜糖蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,获得重组转移质粒pFastBacHTA-E2。转化大肠埃希菌DH10Bac感受态细胞,获得重组Bacmid质粒后转染Sf9昆虫细胞,获得重组病毒。传毒3代后对表达蛋白进行Western blot和间接免疫荧光试验检测。结果显示,E2蛋白获得高效表达,能被抗E2蛋白的单克隆抗体2B10和6×His-单克隆抗体特异性识别,表明CSFV石门E2囊膜糖蛋白在Sf9昆虫细胞中得到成功表达,具有良好的抗原反应性。
周向阳万婧廖迅朱竹君陈晓玮刘菲芬方维焕
关键词:猪瘟病毒杆状病毒表达系统
猪瘟病毒石门E2蛋白的单抗制备及抗原表位鉴定被引量:1
2012年
猪瘟病毒石门E2(SM-E2)的BC区原核表达蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术制备单抗,测定其效价并鉴定抗原表位。结果表明,制备了1持续、稳定分泌抗SM-E2的单克隆抗体2B10,效价在1∶600~1∶1 000之间。单抗2B10能与常规SDS-PAGE转膜的SM-E2蛋白发生反应,表明其识别的是线性表位,并且该单抗只能识别石门,而不能与C疫苗及2型流行毒发生反应。点突变E2蛋白ELISA分析结果表明,该单抗不与707、709、711、713和714位突变蛋白发生反应,表明单抗2B10识别的线性表位为707I-X-P-X-G-X-G-G714。该单抗对猪瘟病毒抗原多样性分析和致病机制研究有一定的应用价值。
谢文绮李得江陈宁廖迅童超方维焕
关键词:猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2单克隆抗体
猪瘟病毒石门E2基因在永生化猪血管内皮细胞的表达
猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fevervirus,CSFV)引起的猪的急性高度接触性传染病,严重危害着世界养猪业的发展,被世界动物卫生组织(OI...
解林红
关键词:猪瘟病毒猪血管内皮细胞细胞苗流式细胞分析先天性感染囊膜糖蛋白
文献传递
猪瘟病毒石门E2基因在永生化猪血管内皮细胞的表达被引量:1
2008年
利用DNA重组技术将猪瘟病毒石门囊膜蛋白E2基因定向插入逆转录病毒载体pBABE-puro中,构建重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2。将pBABE-puro-E2和辅助质粒pVSV-G经磷酸钙共沉淀法转染293GP包装细胞系,将其包装为完整的逆转录病毒病毒;用包装好的假病毒在polybrene的介导下转导第30代的永生化猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),用嘌呤霉素筛选阳性细胞,并将筛选出的阳性细胞腹腔免疫BALB/c小鼠。RT-PCR检测SUVEC内的E2基因,用间接免疫荧光试验鉴定E2蛋白在SUVEC上的表达,间接ELISA试验检测小鼠血清抗体。结果表明,CSFVE2基因导入猪脐静脉血管内皮细胞获得表达,而且成功诱导小鼠产生抗E2蛋白的抗体。
解林红郭抗抗张彦明徐钰徐彦召王文秀
关键词:猪瘟病毒E2基因
表达猪瘟病毒石门E0基因重组鸡痘病毒的构建及动物免疫试验被引量:7
2008年
应用PCR从质粒pMD18-T-E0中扩增编码CSFVE0蛋白的基因片段,定向克隆到重组鸡痘病毒表达载体FPV-P11上,进一步构建出重组鸡痘病毒转移载体FPV-pSY-E0。用脂质体将该质粒转染至鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)后,通过蓝斑纯化实验筛选出重组鸡痘病毒FV282-CSFV-E0。PCR证实E0基因已整合至鸡痘病毒基因组中,Western blot检测到重组病毒感染CEF细胞中E0蛋白的表达。重组病毒3次腹腔接种小鼠,ELISA检测血清抗体滴度高达1:4096。重组病毒免疫猪3次之后,接种猪瘟病毒强毒进行攻毒试验,结果对免疫组产生75%的保护率,为研制猪瘟活载体疫苗奠定了基础。
王养会李谱华张淼涛张彦明
关键词:猪瘟病毒E0基因鸡痘病毒
猪瘟病毒石门与兔化弱毒疫苗之间抗原差异的单克隆抗体分析被引量:12
2008年
采用间接免疫荧光方法,用19猪瘟病毒单克隆抗体对猪瘟病毒石门与疫苗(兔化弱毒)的抗原性进行分析。结果显示,9猪瘟病毒E2蛋白的单抗中有4与2病毒均反应,但反应程度略有差别;9猪瘟病毒Erns蛋白的单抗中只有3与2病毒都反应,其他6在识别石门与兔化弱毒之间存在差别;抗猪瘟病毒NS2/3蛋白的单抗只识别弱毒。表明,抗猪瘟病毒单抗可用于猪瘟病毒石门与兔化弱毒疫苗抗原性差异的分析。
朱妍李素王文成涂长春
关键词:猪瘟病毒抗原性分析

相关作者

张彦明
作品数:403被引量:1,585H指数:16
供职机构:西北农林科技大学
研究主题:猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 E2基因 猪瘟 原核表达
张楚瑜
作品数:107被引量:431H指数:11
供职机构:武汉大学
研究主题:猪瘟病毒 伪狂犬病毒 病毒 猪瘟 猪瘟病毒石门株
黄茜华
作品数:10被引量:39H指数:6
供职机构:北京出入境检验检疫局
研究主题:猪瘟病毒石门株 猪瘟病毒 克隆 荧光RT-PCR CDNA文库构建
孙永科
作品数:60被引量:218H指数:9
供职机构:云南农业大学动物科学技术学院
研究主题:重组鸡痘病毒 猪瘟病毒 S1基因 鸡传染性支气管炎病毒 猪瘟病毒石门株
王宁
作品数:26被引量:64H指数:7
供职机构:武汉大学
研究主题:猪瘟病毒 猪瘟病毒石门株 E2基因 克隆 囊膜糖蛋白