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- 一种可增强细胞ABCC1基因表达的过表达载体pcDNA3.1-FYJNa的应用
- FYJNa过表达载体pcDNA3.1‑FYJNa在显著增强A549/DDP细胞ABCC1基因表达中的应用，属于基因工程技术领域，其特征在于，FYJNa过表达载体pcDNA3.1‑FYJNa在显著增强A549/DDP细胞A...
- 邵淑丽张伟伟张珍珠冯云佳楠刘祥露
- 重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-ChIFN-α的构建及其与ND、IB二联活疫苗联用对鸡免疫功能的影响被引量：1
- 2022年
- 为研究重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-ChIFN-α与鸡新城疫(Newcastle disease,ND)、传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)二联活疫苗联用最佳肌肉注射剂量及其对鸡免疫功能的影响。通过RT-PCR扩增鸡干扰素-α(IFN-α)基因,双酶切IFN-α基因和pcDNA3.1(+),T4 DNA ligase连接,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-ChIFN-α;挑选180只海兰褐公雏鸡随机分为6组,每组3个重复,每个重复10只。A组(生理盐水对照组)、B组(疫苗对照组)、C组[疫苗+100μg pcDNA3.1(+)对照组]、D组[疫苗+50μg pcDNA3.1(+)-ChIFN-α试验组]、E组[疫苗+100μg pcDNA3.1(+)-ChIFN-α试验组]、F组[疫苗+200μg pcDNA3.1(+)-ChIFN-α试验组];4日龄时,D、E、F组分别注射pcDNA3.1(+)-ChIFN-α50、100、200μg/只,C组注射pcDNA3.1(+)100μg/只,A、B组注射生理盐水300μL/只,7日龄时除A组外,其他各组均滴鼻、点眼免疫鸡ND、IB二联活疫苗,于49日龄时,对试验鸡进行肾型IB病毒(Nephropathogenic IB virus,NIBV)攻毒试验。PCR结果表明扩增出鸡IFN-α基因为582 bp,通过测序并与NCBI已发表的ChIFN-α基因(登录号EU367971)进行比对,同源性为100%;双酶切、菌液PCR及测序鉴定结果表明重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-ChIFN-α构建成功;动物试验结果表明,不同剂量pcDNA3.1(+)-ChIFN-α均能提高鸡外周血阳性T、B淋巴细胞百分率;提高ND病毒(ND virus,NDV)、NIBV疫苗诱导的抗体水平,并能提高鸡对NIBV强毒株的免疫保护率,且100μg剂量组比疫苗对照组的免疫保护率提高10%。本研究确定重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-ChIFN-α最佳注射剂量为100μg/只鸡,其不仅能发挥免疫佐剂作用,还可增强鸡ND、IB二联活疫苗免疫保护效果。
- 陈亚伟杨文艳韩向新宋艳红吕小虎陈书明
- 关键词：免疫佐剂
- 真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP-MC1R的构建及在羊驼毛囊干细胞中的表达被引量：3
- 2015年
- 旨在构建含有MC1R基因的pcDNA3.1(+)真核重组表达载体,为进一步研究MC1R的生物学功能奠定基础。应用RT-PCR技术从羊驼皮肤cDNA文库中扩增MC1R基因全长cDNA,然后通过双酶切将MC1R基因全长cDNA克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),然后采用脂质体法转染体外培养的羊驼毛囊干细胞后,通过G418筛选培养,建立稳定的转染体系,直接荧光观察pcDNA3.1/MC1R融合蛋白在细胞中的分布定位,并通过Western Blot方法检测MC1R在羊驼毛囊干细胞中的表达。结果表明,成功构建了pcDNA3.1/MC1R重组表达载体,并且发现试验组的毛囊干细胞中表达MC1R蛋白显著高于空白组(P<0.05)。成功构建了含有绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pcDNA3.1/MC1R,且MC1R基因在羊驼毛囊干细胞中获得表达。
- 白瑞王振华尹志红弓慧敏于志慧庞全海
- 关键词：羊驼毛囊干细胞真核表达载体转染
- 重组真核表达载体pcDNA3.1-Annexin A2的构建与鉴定
- 2015年
- 目的构建含Annexin A2目的基因的重组表达质粒。方法从鼻咽癌CNE-2细胞提取总RNA,RT-PCR扩增目的基因片段,经KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后与pc DNA3.1(+)真核表达载体连接,构建真核表达载体pc DNA3.1-Annexin A2,转化DH5α,筛选阳性重组子,抽质粒进行KpnⅠand XbaⅠ双酶切、PCR和测序鉴定。结果重组质粒经PCR和酶切后都获得与RT-PCR大小相同的产物,长度约为1020b P,测序结果与基因库一致。结论成功构建重组真核表达质粒pc DNA3.1-Annexin A2。
- 何火聪苏颖林可焴邹长棪陈超
- 关键词：ANNEXINA2真核表达载体PC
- 真核表达载体pcDNA3.1-Beclin1的构建及其对子宫内膜癌HEC细胞增殖的影响
- 2014年
- 目的:构建自噬基因Beclin1的真核表达载体pcDNA3.1-Beclin1,检测人子宫内膜癌HEC细胞转染pcDNA3.1-Beclin1后,外源性基因Beclin1在蛋白水平的表达,并观察其对HEC细胞增殖的影响。方法:通过RT-PCR和T/A克隆等方法,构建自噬基因Beclin1的真核表达载体pcDNA3.1-Beclin1,并通过脂质体介导的方法将外源性Beclin1基因导入人类子宫内膜癌细胞株HEC中,通过实时PCR检测转染后Beclin1在HEC中表达的情况,并设立实验组(转染pcDNA3.1-Beclin1真核载体)、空质粒对照组(转染pcDNA3.1空载体)、空白脂质体对照组,用Western blot法检测子宫内膜癌HEC细胞中Beclin1的表达情况,MTT法检测Beclin1对HEC细胞体外生长的影响等,研究Beclin1基因与子宫内膜癌的关系。结果:经限制性内切酶鉴定及测序,证明Beclin1基因真核质粒的序列完全正确,将其转染HEC细胞,转染后的HEC细胞在体外能继续增殖,但增殖能力明显下降。结论:Beclin1基因pcDNA3.1-Beclin1真核表达载体构建成功,并能在HEC细胞中表达,转染HEC细胞体外增殖能力明显降低,Beclin1基因用于子宫内膜癌基因治疗具有重要靶向价值。
- 何珏张文书王珍玲
- 关键词：BECLIN1真核表达载体细胞增殖
- 鸡IL-4真核表达载体pcDNA3.1(+)-ChIL-4的构建及对鸡免疫功能的影响
- 我国家禽养殖具有很大规模,家禽养殖生产过程中疫病的防制尤其重要。目前,主要通过给予疫苗预防疫病。为了提高疫苗的免疫效果,免疫佐剂的研究成为研究的热点之一。细胞因子佐剂由于其功能专一、生物活性强及副作用小等特点成为广大研究...
- 张宏伟
- 关键词：IL-4PCDNA3.1(+)真核表达载体免疫功能
- 真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP-M2的构建及在小鼠骨髓树突状细胞中的表达被引量：1
- 2014年
- 为了构建含有绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)报告基因的M2真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP-M2(2段热休克蛋白70表位序列407-426,mHSP70407-426,M2),探讨M2基因转染小鼠骨髓树突状细胞(Dendritic cell,DC)的表达情况。采用4轮PCR方法从pcDNA3.1(+)-GFP载体中将GFP编码序列扩增出来,并在其上游引入Kozak序列,下游引入M2序列,使用限制性内切酶HindIII和BamHI将目的片段插入到pcDNA3.1(+)中,利用质粒自带的氨苄青霉素抗性筛选出阳性克隆,获得重组基因的表达载体。重组载体通过转染试剂Lipofectamine2 000转染至DC中,通过倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞内的表达。构建的pcDNA3.1(+)-GFP-M2经双酶切、PCR和测序鉴定和预期结果一致。荧光显微镜观察显示在转染pcDNA3.1(+)-GFP-M2基因的树突状细胞中,荧光均匀地分布于整个细胞。成功构建含有绿色荧光蛋白报告基因的M2真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP-M2。M2基因成功转染至树突状细胞中。
- 曹荣月孙翁陈檬杨梦琪宦晓军肖芳李盼龙军
- 关键词：真核表达载体树突状细胞KOZAK序列
- 真核表达载体pcDNA3.1(+)-MyoD-HA-His的构建及功能检测被引量：1
- 2014年
- 为了便于检测和纯化转染到非肌肉细胞的生肌因子MyoD,同时为能够与转染的其他生肌因子的表达量进行比较,将MyoD编码区克隆在真核表达载体pcDNA3.1(+)-HA-His。测序表明克隆的MyoD序列正确,并与标签序列构成一个开放阅读框;Western blot显示在起始密码子前添加kozak序列GCCGCCACC,可使融合蛋白能够以较高水平表达;生肌转化实验表明,融合蛋白MyoD-HA能够有效激活靶基因的表达。
- 杜朝玉蕾叶孙国杰王英泽
- 关键词：标签MYOD
- 真核表达载体pcDNA3.1(-)-IL-3-PE38KDEL的构建及其在CIK细胞中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的:构建人白细胞介素-3(interleukin-3,IL-3)和铜绿假单胞菌外毒素(pseudomonas exotoxin,PE)衍生物(PE38KDEL)基因的真核融合表达载体,研究其在细胞因子诱导的杀伤(cytokine induced killer,CIK)细胞中的表达情况。方法:通过PCR获得实验需要的IL-3-PE38KDEL基因片段,构建IL-3-PE38KDEL融合基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-IL-3-PE38KDEL。重组质粒经限制性内切酶及DNA序列测定证实构建成功后,用Liprofectamine2000脂质体转染CIK细胞,然后用RT-PCR及Western blot检测IL-3-PE38KDEL融合蛋白在CIK细胞的表达,用MTS检测细胞上清中融合蛋白的细胞毒作用。结果:酶切分析及DNA序列测定证实,IL-3-PE38KDEL融合基因被成功克隆入真核表达质粒载体pcDNA3.1(-);RT-PCR及Western blot法检测证实重组基因可在CIK细胞中表达,且表达的融合蛋白对HL60细胞有杀伤活性。结论:IL-3-PE38KDEL融合基因可在CIK细胞中表达,为进一步研究融合毒素IL-3-PE38KDEL联合CIK细胞过继免疫治疗对肿瘤细胞的体内外杀伤作用奠定了基础。
- 李小芳沈燕娄世锋刘杞张萍白凤霞
- 关键词：白细胞介素-3真核表达
- 大鼠真核表达载体pcDNA3.1（+）//GPC3N/_/(48/)-EGFP-GPC3C/_/(550/)的构建及鉴定
- 目的：从大鼠胎肝组织克隆GPC3基因,成功构建带绿色荧光蛋白报告基因的大鼠真核表达载体pcDNA3.1/(+/)//GPC3N48-EGFP-GPC3C550,为深入研究GPC3的功能和应用奠定基础。
方法：①根...
- 马美雪
- 关键词：真核表达载体绿色荧光蛋白
- 文献传递
