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- 用于检测人肺癌细胞株A549胞外囊泡的核酸适配体及其应用
- 本发明公开了一种用于检测人肺癌细胞株A549胞外囊泡的核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列如SEQ ID NO:4(Ap3)，SEQ ID NO:5(Ap6)序列所示；或者在SEQ ID NO:4(Ap3)，SEQ I...
- 何农跃何磊李智洋
- 基于数据库分析FOXG1在非小细胞肺癌中的表达和临床意义及稳定过表达FOXG1肺癌细胞株A549的构建
- 2023年
- 通过TCGA数据库分析FOXG1在非小细胞肺癌中的表达及预后相关性,建立稳定过表达人源FOXG1基因的肺癌细胞株A549。利用TCGA数据库中下载基因表达数据和临床信息,分析FOXG1在非小细胞肺癌和正常组织的表达差异、FOXG1表达水平与临床病理特征及生存预后的相关性并进行基因集富集分析。通过HEK-293T包装慢病毒表达载体,收集病毒上清液侵染A549细胞,嘌呤霉素筛选稳定过表达FOXG1的A549细胞株。细胞核染色鉴定外源FOXG1表达定位,Western blot检测外源FOXG1的表达情况。结果发现FOXG1在非小细胞肺癌组织中高表达,且FOXG1高表达能够降低患者总体生存率。FOXG1的表达水平与患者年龄相关,与性别,分级以及TMN分期无关;细胞周期、P53、Notch等信号通路在高表达FOXG1的非小细胞肺癌组织中被激活;慢病毒表达载体共转染HEK-293T细胞成功;病毒上清液侵染A549细胞,24 h后可见绿色荧光表达,72 h后对照组空载体病毒颗粒侵染效率高达80%左右,实验组过表达FOXG1病毒颗粒侵染效率为50%~60%;经嘌呤霉素筛选培养后,对照组和实验组荧光效率均达到90%以上;细胞核染色外源FOXG1基因定位在细胞核中,Western blot结果显示外源FOXG1在细胞中正确表达。因此可以认为FOXG1基因在非小细胞肺癌患者中高表达,其表达水平与患者总体预后有关且稳定表达FOXG1的A549肺癌细胞株构建成功。
- 王雨晴马雪艳陈艳刘永新杨彩婷姜慧杰来明名
- 关键词：A549细胞稳定过表达慢病毒
- 补中益气汤中的有效成分槲皮素通过GSTP1-JAK-STAT途径增强肺腺癌耐药细胞株A549/DDP对顺铂的敏感性被引量：2
- 2023年
- 【目的】探究补中益气汤的有效成分槲皮素联合顺铂治疗在增强肺腺癌对顺铂敏感性中的作用及其潜在分子机理。【方法】(1)网络药理学分析:从TCMSP数据库筛选补中益气汤的有效成分及其对应靶点,从TCGA数据库下载肺腺癌疾病的数据,并基于差异分析和网络药理学分析挖掘补中益气汤治疗肺腺癌的主要活性成分和潜在作用靶点,通过富集分析以判断相关信号通路,通过分子对接模拟技术分析关键基因与有效成分之间的对接关系。(2)细胞实验:槲皮素或顺铂单一处理以及两者联合处理肺腺癌细胞(A549、A549/DDP),通过细胞计数试剂盒(CCK)-8、Western Blot法、流式细胞术分别对应分析肺腺癌细胞的细胞活力、关键蛋白的表达和细胞凋亡情况。细胞热迁移分析(CETSA)验证活性成分槲皮素与靶蛋白谷胱甘肽S-转移酶π(GSTP1)的结合关系。【结果】补中益气汤中的有效成分槲皮素能与GSTP1紧密结合。通路富集分析显示槲皮素和顺铂可能通过铂类耐药以及Janus激酶(JAK)-信号传导与转录激活因子(STAT)通路影响肺腺癌的进展。此外,槲皮素联合顺铂可下调肺腺癌细胞中GSTP1和JAK-STAT信号通路相关蛋白的表达。在功能上,槲皮素能加强顺铂诱导的肺腺癌细胞的抗癌活性。【结论】槲皮素可减轻肺腺癌耐药细胞对顺铂的耐药性。
- 邹长鹏郭燕张长旺高思铭李娜
- 关键词：补中益气汤槲皮素肺腺癌GSTP1A549/DDP细胞
- 扁塑藤素对非小细胞肺癌细胞株A549恶性生物学行为的影响
- 2023年
- 目的分析扁塑藤素(Pristimerin)对非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)细胞株A549恶性生物学行为的影响,分析可能机制。方法MTT法检测不同浓度(1、2、4、8、16μmol/L)扁塑藤素对NSCLC细胞株A549增殖的抑制作用,随机分为对照组、扁塑藤素组(扁塑藤素16μmol/L)、激活剂组[磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路特异性激活剂类胰岛素样生长因子(IGF-1)100 ng/ml]、联合组(扁塑藤素16μmol/L联合IGF-1100 ng/ml)。作用24 h后,Transwell实验检测细胞侵袭能力;血管拟态形成实验检测细胞血管生成拟态;Western blot法检测细胞p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR。结果扁塑藤素能抑制NSCLC细胞株A549的增殖,呈量效关系;与对照组比较,扁塑藤素组透膜细胞数目/视野、血管数量/视野减少(P<0.01),激活组透膜细胞数目/视野、血管数量/视野增加(P<0.01);与扁塑藤素组比较,联合组透膜细胞数目/视野、血管数量/视野增加(P<0.01);与激活剂组比较,联合组透膜细胞数目/视野、血管数量/视野减少(P<0.01)。与对照组比较,扁塑藤素组p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低(P<0.01),激活剂组p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR升高(P<0.01);与扁塑藤素组比较,联合组p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR升高(P<0.01),与激活剂组比较,联合组p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低(P<0.01)。结论扁塑藤素可抑制NSCLC细胞株A549增殖、侵袭及血管生成拟态,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT通路有关。
- 王小燕韩崇兰
- 关键词：非小细胞肺癌增殖
- 川芎嗪对人非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP的相关ATP结合盒转运体表达水平的影响被引量：2
- 2023年
- 目的:观察川芎嗪(四甲基吡嗪)对耐药相关ATP结合盒转运体B1(ABCB1)、C1(ABCC1)和G2(ABCG2)表达水平的影响,揭示其逆转人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP耐药的机制。方法:采用细胞增殖(CCK8)实验,分析人肺腺癌细胞株A549及顺铂耐药株A549/DDP对顺铂的耐受性,计算耐药指数。分析A549/DDP对川芎嗪的耐受性,遴选逆转耐药所需的工作浓度并检测逆转效果。设置空白组接种A549细胞,模型组、实验组和阳性对照组均接种A549/DDP细胞;空白组和模型组均用1640完全培养基孵育,实验组用含工作浓度川芎嗪的1640完全培养基孵育,阳性对照组用含Tariquidar的1640完全培养基孵育。提取各组全部蛋白及mRNA,用免疫印迹法(Western Blot)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析川芎嗪对ABCB1、ABCC1和ABCG2及其m RNA表达水平的影响。结果:A549细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50)为(28.33±3.19)μM,A549/DDP对顺铂的IC50为(983.43±101.67)μM,A549/DDP的耐药指数为34.71。当川芎嗪浓度不高于150μM时,A549/DDP细胞活性无影响,遴选100μM为川芎嗪逆转耐药的工作浓度,1μM作为阳性对照药Tariquidar的工作浓度。川芎嗪逆转耐药指数为7.68,Tariquidar为5.74。Western Blot实验发现,模型组ABCB1、ABCC1和ABCG2的表达水平均高于空白组,在实验组和阳性对照组中均不同程度下调,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCT实验显示,实验组和阳性对照组ABCB1和ABCC1 mRNA的表达水平与模型组比较均有不同程度的下调(P<0.05),但ABCG2 mRNA的表达水未见明显变化(P>0.05)。结论:川芎嗪可下调ABCB1、ABCC1和ABCG2的表达水平,此可能为逆转A549/DDP细胞对顺铂耐受性的机制之一。
- 王小梅薛春苗王艳梅梁玲张寒蕾梁艳
- 关键词：非小细胞肺癌化疗耐药川芎嗪逆转耐药
- 百里醌类似物ATQTHB对肺癌细胞株A549增殖与凋亡的影响
- 2022年
- 目的研究人工合成百里醌类似物ATQTHB对肺癌细胞A549的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法将细胞分为5组:空白对照组、A549细胞组、A549细胞+ATQTHB干预(400μg/mL)组、人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)组、BEAS-2B细胞+ATQTHB干预组。采用CCK-8法分析细胞增殖抑制情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,采用Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平。结果与A549细胞组相比,400μg/mL ATQTHB干预对A549细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05);ATQTHB干预后,人正常肺上皮细胞BEAS-2B增殖与未干预细胞间差异无统计学意义(P>0.05);与A549细胞组相比,A549细胞+ATQTHB干预组的细胞凋亡率显著增加(P<0.05),抑制凋亡蛋白Bcl-2表达减少(P<0.05),促凋亡蛋白Bax表达增加(P<0.05);与BEAS-2B细胞组相比,BEAS-2B细胞+ATQTHB干预组的细胞凋亡率无显著改变(P>0.05),Bcl-2和Bax的蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论研究证实了400μg/mL ATQTHB可能通过下调Bcl-2的表达、上调Bax的表达而促进肺癌细胞株A549的凋亡,发挥抑制肺癌细胞作用,具有潜在的应用价值。
- 马刚纳莉王婷黄菱李凯璇
- 关键词：肺癌细胞增殖凋亡
- 自噬在EGFR野生型肺腺癌耐药细胞株A549/GR靶向耐药中的作用研究
- 目的： 探索EGFR野生型肺腺癌耐药细胞株A549/GR对吉非替尼的耐药性，并通过正负调控自噬关键基因Beclin-1影响自噬，探索自噬对肺腺癌耐药细胞株A549/GR耐药性及干性的影响，初步明确肺腺癌细胞吉非替尼耐药...
- 陈雨
- 关键词：肺腺癌细胞自噬
- 黄腐醇对肺癌细胞株A549体外抑制作用及其可能机制
- 2021年
- 目的探讨黄腐醇对人肺癌细胞株A549的体外抑制作用及其可能机制。方法体外培养A549细胞,采用MTT法检测黄腐醇10、20μmol/L或联用N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)5 mmol/L对细胞生长的作用,细胞集落实验检测细胞的集落形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况和活性氧(ROS)含量,Western blot法检测p53、p21、转录激活因子4(ATF4)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的蛋白表达。结果黄腐醇呈浓度和时间依赖性地抑制A549细胞生长(P<0.05)。与对照组相比,黄腐醇10、20μmol/L均可减少A549细胞集落的数量,促进细胞凋亡,增加细胞内ROS含量以及p53、p21、ATF4、CHOP蛋白表达(P<0.05);而NAC预处理后,可降低黄腐醇诱导的ROS含量以及细胞抑制率(P<0.05)。结论黄腐醇能够体外抑制肺癌细胞生长并促进细胞凋亡,可能与黄腐醇升高肿瘤细胞内ROS含量、调节细胞周期和内质网应激相关蛋白的表达有关。
- 黄陆洋何林峰文石兵潘晓锋
- 关键词：活性氧细胞凋亡细胞周期内质网应激
- 安罗替尼对肺腺癌细胞株A549放射敏感性的影响及机制被引量：5
- 2021年
- 目的研究安罗替尼对肺腺癌细胞放疗增敏作用及机制。方法采用安罗替尼处理人肺腺癌细胞株A549,使用CCK8法测定安罗替尼对细胞增殖的影响;采用克隆形成实验测定安罗替尼联合放疗对细胞的生长抑制作用;使用流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡的变化;采用免疫荧光测定安罗替尼联合放疗对细胞内DNA损伤的影响;采用Western blot检测细胞内DNA损伤标志因子DNA-PKcs的表达变化。结果安罗替尼对人肺腺癌细胞A549增殖具有抑制作用,第2、3、4、5天,(P<0.05)。体外培养克隆形成实验显示,安罗替尼联合放疗组的准予剂量(Dq)、平均致死剂量(D0)及4 Gy照射时的存活分数(SF)均明显低于单纯放疗组(P<0.05)。安罗替尼能够使细胞阻滞于G1/G0期,与放疗联合作用后,进一步降低了G2和S期细胞比例。安罗替尼能够增加放疗诱导的细胞凋亡比例(31.94±2.25)%和(44.44±2.30)%,(P<0.001),增加γH2AX阳性细胞数量(25.67±2.52)%和(54.67±3.79)%,(P<0.001)。安罗替尼能够降低放疗诱导的DNA断裂损伤标志因子DNA-PKcs的表达强度(0.90±0.06)和(0.40±0.06),(P<0.001)。结论安罗替尼具有放疗增敏作用,其机制可能与减少G2/S期细胞、增加细胞凋亡和维持DNA持续损伤有关。
- 段宏民陈楠杨永燕李云霞冯金象李航黄秀文吕东津张明赵玉涛
- 关键词：肺腺癌放疗增敏DNA损伤修复
- eIF5A-2下调对人肺癌细胞株A549DDP耐药及自噬的影响
- 2021年
- 目的探讨沉默真核翻译起始因子5A-2(eIF5A-2)对人肺癌细胞株A549/DDP耐药及自噬的影响。方法体外培养人肺癌细胞株A549、A549/DDP,转染细胞A549/DDP,细胞分为eIF5A-2-SiRNA组、阴性对照组(NC组)及空白对照组,另以A549细胞为正常对照组。病毒感染72 h后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中eIF5A-2 mRNA表达水平,MTT法检测细胞DDP作用下A549/DDP细胞的耐药性,流式细胞术检测细胞的凋亡率,单酰戊二胺(MDC)染色检测细胞自噬水平,蛋白免疫印记(Western blot)法检测eIF5A-2、LC3Ⅱ及Beclin-1蛋白相对表达水平。结果与正常对照组相比,空白对照组、NC组A549/DDP细胞eIF5A-2 mRNA相对表达水平显著升高(均P<0.05);与空白对照组、NC组相比,eIF5A-2-SiRNA组细胞凋亡率显著升高,细胞IC50、自噬小体数目、eIF5A-2、LC3Ⅱ及Beclin-1蛋白相对表达水平显著降低(均P<0.05)。结论eIF5A-2下调可降低人肺癌细胞株A549/DDP耐药性,可能与下调LC3Ⅱ、Beclin-1表达,抑制自噬作用有关。
- 李星刘东升杜钢
- 关键词：肺癌耐药自噬
