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动物细胞永生化研究进展: 2024年; 细胞永生化是指通过各种手段、方式来突破原代细胞衰老的限制,延长细胞寿命,实现细胞无限复制增殖,是当前生物医学领域研究的一个热点与难点。永生化细胞株/系可用于生物制品研发、衰老机制探索以延伸生命等;然而目前永生化细胞种类不多、永生化技术相对较难,肿瘤风险以及动物福利伦理等原因,还不能满足研发需求。目的细胞永生化不仅可以永久保存动物细胞遗传资源,还对多种疾病的诊断、治疗及细胞基质疫苗的研发等提供支持。本文就动物细胞永生化的原理、永生化机制及方法的研究最新进展进行综述,为未来的生物医学研究和应用提供参考。; 张震宇靳莉武王婧尊田玲乔自林杨迪阿依木古丽·阿不都热依木; 关键词：动物细胞细胞永生化

一种PBMC细胞永生化的培养方法: 本发明公开了一种PBMC细胞永生化的培养方法，所述培养方法为：配制包括EBV、PBMC和永生化培养基的EBV感染体系，在培养过程中至少一次部分更换培养基直至永生化成功，其中所述培养基以RPMI‑1640为基础培养基，补加...; 郭静黄学朋魏亮王晓明佘靖陈念嘉

一种山羊垂体细胞永生化细胞系及其构建方法: 本发明涉及细胞生物学技术领域，尤其是指一种山羊垂体细胞永生化细胞系及其构建方法，将山羊垂体细胞转染SV40后传代培养，持续传代至30代以上；包括以下步骤：S1，分离垂体细胞；S2，免疫荧光法鉴定垂体细胞；S3，SV40慢...; 韩燕国秦歌张梨郭家雪俄广鑫黄勇富赵中权赵永聚

猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法及其应用: 本发明提出一种猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法及其应用，包括以下步骤：S10、提供转染体系；S20、提供包装细胞，将所述转染体系和所述包装细胞混合、进行慢病毒包装，得慢病毒颗粒；S30、提供分离的原代猪腹膜间皮细胞，...; 李晓敏陆启荣刘宇邱银生周朗田俊可

小鼠角膜上皮细胞永生化细胞系的建立及表型鉴定: 2024年; 目的探讨小鼠角膜上皮细胞永生化细胞系的建立方法,并鉴定其表型的稳定性。方法提取小鼠角膜上皮原代细胞,以猴空泡病毒40大T抗原(SV40-LT)慢病毒感染小鼠角膜上皮原代细胞建立永生化细胞系。通过HE染色与免疫荧光染色对角膜上皮组织表型和标记物(K12、Pax6、Ki-67)进行鉴定。提取原代角膜上皮细胞并对其角膜上皮细胞分层蛋白K14进行鉴定,观察细胞明场视野评估细胞形态学特征。对转染后的P1和P8代细胞的部分标志物(K12、Pax6、Ki-67、ABCG2、K14)进行鉴定。采用结晶紫染色法观察转染后的P1和P8代细胞克隆的形成能力。结果小鼠角膜上皮组织中K12、Pax6、Ki-67染色阳性;P1、P8代小鼠角膜上皮细胞中K12、Pax6、Ki-67、K14和ABCG2染色阳性,上述标志物阳性率比较,差异均无显著性(P>0.05),P1与P8代小鼠角膜上皮细胞克隆能力无明显差异(P>0.05)。结论使用SV40-LT慢病毒转染小鼠角膜上皮,成功建立永生化小鼠角膜上皮细胞系,表型稳定且稳定增殖。; 白莹王一卉葛欢欢卞雯晗陈鹏; 关键词：细胞系上皮细胞角膜

一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法: 本发明公开了一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法，涉及细胞永生化技术领域。本发明包括如下步骤：获取样本：在无菌条件下从人体骨髓中提取骨髓间充质干细胞；基因修饰：采用CRISPR/Cas9技术，针对ABCG2基因进行基因敲除...; 张舒林魏慧敏胡芳琼张则宇万武

一种中华鳖和中华草龟胚胎成纤维细胞永生化方法: 本发明公开了一种中华鳖和中华草龟胚胎成纤维细胞永生化方法。将包含SV40大T抗原的重组慢病毒感染中华鳖或中华草龟的原代胚胎成纤维细胞后，用嘌呤霉素筛选获得中华鳖或中华草龟永生化胚胎成纤维细胞。本发明利用磷酸钙转染法制备包...; 孙云霄曹代男魏玉峰高养春秦瑶

蒙古马胎儿成纤维细胞永生化细胞体系建立的研究: 2023年; 【目的】试验旨在建立永生化蒙古马胎儿成纤维细胞(equine fetal fibroblasts,EFFs)系,为马繁殖与发育生物学研究提供参考。【方法】采用1 mg/mL胶原酶Ⅳ消化分离原代EFFs,利用表达人端粒酶逆转录亚基(hTERT)和潮霉素B抗性的pLV-hTERT-IRES-hygro慢病毒感染EFFs,经潮霉素B筛选得到阳性细胞hTERT-EFFs,以第3代EFFs为对照,采用实时荧光定量PCR检测hTERT mRNA的表达水平,CCK-8法绘制生长曲线检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况。使用DNAMAN软件比对分析人、马、小鼠、牛、绵羊、猪多物种TERT核苷酸、蛋白和端粒酶RNA组分(TERC)序列相似性。【结果】原代EFFs在实验室培养体系下可传至17代,但第17代细胞发生了衰老。hTERT基因可成功转入EFFs,并至少稳定表达20代。然而hTERT-EFFs增殖能力显著低于EFFs(P<0.05),hTERT-EFFs凋亡早期细胞率显著高于EFFs(P<0.05)。细胞衰老检测结果表明,hTERT-EFFsβ-半乳糖苷酶染色呈阳性。序列相似性比对结果显示,马TERT与hTERT mRNA保守性较高,相似性为73.2%;马TERT与hTERT蛋白保守性较其他物种高,相似性为76.3%,表明马TERT与hTERT在结构和功能上是高度相似;马TERC与人TERC相似性较高,在进化树上位于同一分支,但马TERC与TERT的结合及与端粒酶活性相关的关键核苷酸中存在突变。【结论】单独过表达hTERT可以延长EFFs体外传代次数不超过30代,但仍不足以使蒙古马EFFs细胞高质量永生化,这可能与hTERT与eTERC不相容有关。; 田书岳神英超王希生王敏伊敏娜才文道力玛陶力赵毕力格芒来格日乐其木格; 关键词：永生化

一种牦牛输卵管上皮细胞永生化细胞系及其构建方法和应用: 本发明公开了一种牦牛输卵管上皮细胞永生化细胞系及其构建方法和应用，涉及细胞工程技术领域。该构建方法包括以下步骤：(1)采集牦牛输卵管的上皮细胞，培养后，消化分离，纯化，得到原代牦牛输卵管上皮细胞；(2)所述原代牦牛输卵管...; 余四九叶小琳潘阳阳王立斌王萌王靖雷张瑞赵天王亚营丁天翊

一种携带自杀基因的支持细胞永生化细胞系的构建方法和应用: 本发明提供了一种携带自杀基因的支持细胞永生化细胞系的构建方法和应用，从新生1‑7天的动物曲精小管组织中分离支持细胞，导入含有hTERT基因的慢病毒载体，通过抗性药物筛选具有支持细胞标志物的单克隆细胞株，再导入含有大肠杆菌...; 朱雷程世翔曹毓琳陈凯李霞云张学伟

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