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基于棉花根部表皮细胞检测病原菌效应蛋白 定位 的方法 本发明涉及生物学技术领域,尤其涉及基于棉花根部表皮细胞检测病原菌效应蛋白 定位 的方法。所述方法包括以下步骤:构建携带病原菌效应蛋白 编码基因和核定位 信号的重组载体,将重组载体转入农杆菌菌株中,获得重组农杆菌;将重组农杆菌与病... 秦君 张慧莹 郭帅领 李群琼 俞皓楠 胡小平浙江菜豆CPMMV变异株的鉴定及其TGB蛋白 定位 2025年 2022年10—11月,在浙江省杭州市钱塘区观察到疑似病毒侵染的菜豆植株,病毒组测序和PCR技术检测出豇豆轻斑驳病毒(cowpea mild mottle virus,CPMMV)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)和紫云英矮缩病毒(milk vetch dwarf virus,MDV),并将CPMMV命名为CPMMV-ZJ(GenBank:OR667247)。利用病毒鉴定、全基因组序列扩增、系统发育分析及亚细胞定位 等方法,明确了CPMMV-ZJ的全基因组序列特征、病毒演化及其病毒三联蛋白 (triple gene block protein,TGB)的亚细胞定位 。结果表明,CPMMV-ZJ的基因组全长为8226 bp,包含6个开放阅读框。3′和5′区域分别有1个147 bp和75 bp的非编码区(untranslated regions,UTR)。序列分析结果表明,CPMMV浙江分离物与CPMMV安徽分离物的全基因组序列一致性最高(98.03%),并与国内分离物共同聚类在一个小分支上,但与国外分离物(美国、印度、巴西等地)序列一致性较低(63.71%~82.49%),提示病毒变异与地理因素密切相关。对浙江分离物与江苏分离物TGB蛋白 的亚细胞定位 比较分析发现,二者无明显差异,但TGB2浙江分离物在叶片中的表达导致明显的叶绿体核周聚集现象,推测与植物防御反应有关。 张子鑫 陈淑婷 周伟欣 张意涵 鲁倩 李中义 吴昕扬 徐沛关键词:菜豆 亚细胞定位 用于检测细胞线粒体自噬的双荧光蛋白 定位 检测系统及应用 本发明一种用于检测细胞线粒体自噬的双荧光蛋白 定位 检测系统,所述检测系统至少包括:(1)荧光蛋白 A和指示蛋白 A组成的融合蛋白 ;(2)荧光蛋白 B和指示蛋白 B组成的融合蛋白 ;所述荧光蛋白 A和荧光蛋白 B的荧光颜色不同,所述指示蛋... 苏军 王珂 徐祎春 周佳菁 赵英楠 马晓卯 冯晨晨将目的蛋白 定位 于细胞膜表面的载体片段及其应用 本发明公开了将目的蛋白 定位 于细胞膜表面的载体,包括Claudin18.2 1‑27aa序列,PDGFR膜定位 序列,多克隆位点以及编码目的蛋白 的基因,多克隆位点位于Claudin18.2 1‑27aa序列和PDGFR膜定位 ... 党南卯 王雅萍 张玲 李明振 蔡宁细粒棘球绦虫MDH基因的克隆表达结构功能预测及蛋白 定位 被引量:1 2024年 为了探究苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因在细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)生长发育中的生物学功能并初步评价MDH作为疫苗候选抗原的潜力,从NCBI GenBank数据库中获得Eg MDH基因序列,设计特异性引物,以细粒棘球绦虫原头蚴的cDNA为模板,用PCR扩增MDH基因全长序列;采用生物信息学软件对MDH蛋白 的理化性质、结构特点等进行分析;构建重组质粒pET28a-MDH并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用SDS-PAGE检测蛋白 的表达,随后纯化、复性蛋白 ,并通过Western-blot对蛋白 进行抗原性分析;利用间接免疫荧光试验检测原头蚴中目的蛋白 的定位 ;应用实时荧光定量PCR分析Eg MDH基因m RNA在原头蚴及成虫中的相对转录水平。生物信息学分析结果显示,Eg MDH基因长999 bp,编码332个氨基酸,蛋白 分子式为C1639H2599N445O475S16,相对分子质量为36 651.32,理论等电点为8.11,且编码蛋白 没有信号肽和跨膜区,含有40个磷酸化位点,3个N连接型糖基化位点,9个优势B细胞抗原表位。二级结构由α-螺旋(46.69%)、无规则卷曲(31.93%)、延伸链结构(16.87%)和β-转角(4.52%)构成。克隆的基因长975 bp,预测分子质量为35.7 ku;Western-blotting显示,重组蛋白 可以被抗His标签的家兔多克隆抗体和原头蚴可溶性全蛋白 小鼠多克隆抗体识别;间接免疫荧光试验显示,Eg MDH蛋白 定位 在原头蚴的囊壁;实时荧光定量PCR显示,Eg MDH基因在成虫及原头蚴中均有表达,且原头蚴阶段的转录水平显著高于成虫(P<0.05)。本研究结果初步表明Eg MDH具有作为疫苗候选抗原的潜力,以期为后续细粒棘球绦虫疫苗研发提供候选抗原;同时也为后续细粒棘球绦虫MDH基因的深入研究奠定了基础。 普娜 赵文卿 张玉霞 陈旭珂 张艳艳 孙艳 薄新文 王正荣关键词:细粒棘球绦虫 苹果酸脱氢酶 原核表达 间接免疫荧光 结直肠癌HMGB2蛋白 定位 及与P53表型关系的临床病理研究 袁经芳翻译后修饰对酵母脂滴蛋白 定位 的影响作用研究 本课题旨在绘制酿酒酵母脂滴蛋白 组翻译后修饰状态全景(PTM Landscape)中的主要两种类型——N-糖基化和磷酸化,并探究其对于脂滴蛋白 的细胞内定位 的影响作用,为酿酒酵母微生物细胞工厂在合成生物学及医药领域的应用提供... 王德慧关键词:脂滴 翻译后修饰 糖基化 磷酸化 亚细胞定位 鸡毒害艾美耳球虫小热休克蛋白 基因EnsHsp20的克隆表达与蛋白 定位 2023年 克隆、表达毒害艾美耳球虫小热休克蛋白 基因EnsHsp20,检测其天然蛋白 及其在虫体内的亚细胞定位 。以毒害艾美耳球虫子孢子的总RNA为模板,用RT-PCR扩增EnsHsp20基因后,连接至pGEM-T Easy载体;测序后构建pET28a(+)-EnsHsp20表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3);经双酶切和测序鉴定后,将重组菌诱导表达;表达产物经Western-blot鉴定、纯化与复性后,免疫BALB/c小鼠,制备小鼠抗rEnsHsp20多克隆抗体;利用多克隆抗体,分别用Western-blot和间接免疫荧光试验检测子孢子和第2代裂殖子中EnsHsp20的天然蛋白 及其定位 ;最后,应用qRT-PCR分析EnsHsp20基因在未孢子化卵囊、子孢子和第2代裂殖子中的转录水平。结果显示,该基因全长549 bp,编码183个氨基酸,预测分子质量为20.3 ku;重组蛋白 主要以包涵体形式存在,可以被6×His标签单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫、抗柔嫩艾美耳球虫、抗堆型艾美耳球虫和抗巨型艾美耳球虫的阳性血清识别;在第2代裂殖子中检测到EnsHsp20的天然蛋白 ,分子质量约为36 ku;EnsHsp20蛋白 定位 在子孢子和第2代裂殖子的细胞膜或细胞质;EnsHsp20基因在子孢子中的转录水平极显著高于第2代裂殖子和未孢子化卵囊(P<0.01)。本研究结果为进一步探析EnsHsp20蛋白 在虫体入侵与生长发育中的作用奠定了基础。 张知之 冯茜茜 范雪莲 刘丹丹 候照峰 许金俊 许金俊关键词:毒害艾美耳球虫 克隆 疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pb25蛋白 定位 及功能研究 目的:疟疾是由疟原虫寄生于人体所导致的疾病,是危害最严重的传染性疾病之一。2022年WHO发布的《世界疟疾报告》显示,2020至2021年,疟疾病例仍处上升趋势,2021年全球疟疾死亡病例为61.9万例。目前疟疾的防控主... 赵志颖关键词:伯氏疟原虫 传播阻断疫苗 动合子 疟疾 原核表达 牦牛FHL2基因的克隆、组织表达与蛋白 定位 分析 被引量:1 2023年 旨在获得牦牛FHL2基因序列,阐明该基因序列、蛋白 质结构与性质、mRNA的组织表达模式、在雌性生殖器官及颗粒细胞的蛋白 表达特性。本研究以5头健康空怀成年母牦牛的心、肝、脾、肺、肾、卵巢、子宫、输卵管组织及5头妊娠2个月左右母牦牛的子宫、输卵管和卵巢为研究材料,利用逆转录PCR(RT-PCR)技术克隆FHL2基因,并使用在线分子生物学软件分析其生物信息学特性;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析FHL2基因的组织表达特性;应用免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)技术检测FHL2蛋白 在雌性生殖器官的分布和颗粒细胞上的亚细胞定位 。结果发现,FHL2基因CDS区全长840 bp (ON456866),编码279个氨基酸,FHL2蛋白 属于弱碱性亲水不稳定蛋白 ,没有跨膜结构。不同物种的FHL2氨基酸序列比对和进化树分析表明,FHL2基因编码区在物种进化中比较保守。RT-qPCR结果显示,FHL2基因在检测的组织都有表达,在心的表达量极显著高于其他检测组织(P<0.01);在肺、卵巢、输卵管和子宫中的表达量极显著高于肝、脾和肾(P<0.01)。FHL2基因在妊娠期子宫中的表达量极显著高于空怀期(P<0.01),在卵巢中妊娠期的表达量极显著低于空怀期(P<0.01)。IHC结果表明,在生殖器官中FHL2蛋白 主要在卵泡颗粒细胞、子宫内膜和输卵管黏膜表达;IF定位 结果显示,FHL2蛋白 主要分布在卵泡颗粒细胞的细胞核中。综上所述,牦牛FHL2基因在动物进化过程中比较保守,在心、肺、卵巢、输卵管和子宫中表达量高,可能在参与牦牛低氧适应性、卵泡发育和妊娠维持等生理功能的调控中发挥重要作用。 龚三你 蒋旭东 马瑶 卢建远 字向东关键词:牦牛 实时荧光定量PCR 免疫组化
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李连城 作品数:223 被引量:1,774 H指数:21 供职机构:中国农业科学院作物科学研究所 研究主题:编码基因 相关蛋白 氨基酸残基 小麦 植物育种 马有志 作品数:397 被引量:1,796 H指数:25 供职机构:中国农业科学院作物科学研究所 研究主题:编码基因 小麦 氨基酸残基 相关蛋白 植物育种 徐兆师 作品数:278 被引量:808 H指数:15 供职机构:中国农业科学院作物科学研究所 研究主题:编码基因 氨基酸残基 相关蛋白 小麦 植物育种 陈明 作品数:277 被引量:858 H指数:16 供职机构:中国农业科学院作物科学研究所 研究主题:编码基因 氨基酸残基 相关蛋白 小麦 植物育种 郑炜君 作品数:66 被引量:194 H指数:8 供职机构:西北农林科技大学 研究主题:编码基因 小麦 植物育种 相关蛋白 蛋白定位