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OsKAT3 RNAi转基因水稻植株的构建被引量：1: 2016年; [目的]本研究以水稻‘日本晴’为遗传转化受体材料,利用RNAi技术对水稻气孔调控型钾吸收通道OsKAT3进行功能研究。[方法]通过将OsKAT3与拟南芥和水稻中的KAT类钾通道进行同源性比对,找到编码此蛋白基因C端的一段特异区域,并用于OsKAT3 RNAi表达载体的构建。设计含有相应酶切位点的引物扩增该特异片段,以OsKAT3作为模板进行RNAi-OsKAT3顺式和反式目的片段的PCR扩增。经菌落PCR鉴定挑选阳性克隆后送测序,测序结果表明:RNAi-OsKAT3顺式和反式目的片段均已正确连接到p MD19-T载体上,分别利用SacⅠ/SpeⅠ和Bam HⅠ/KpnⅠ酶切RNAi-OsKAT3顺式和反式目的片段,并将其连接到含有发夹结构的质粒p TCK303上,然后采用农杆菌介导的方法将经酶切验证正确的OsKAT3RNAi表达载体转化到水稻‘日本晴’中。[结果]以表达载体p TCK303多克隆位点两侧的通用引物进行转基因阳性植株鉴定,PCR结果显示OsKAT3顺式和反式特异片段已成功整合到再生水稻植株基因组中,定量PCR结果也证实RNAi转基因植株中OsKAT3基因表达被成功抑制。[结论]通过RNAi技术成功沉默了OsKAT3基因并获得T0代种子,为后续研究该基因功能奠定了一定基础。; 王莉黄亚楠郭满园苏彦华; 关键词：水稻 RNAI 转基因植株

集胞藻Slr1515基因提高转基因水稻植株剑叶长度及叶绿素含量被引量：2: 2013年; 蓝藻是古老的原核光合生物,不仅在植物进化上有重要地位,也是可利用的生物资源及重要的基因资源。Slr1515是来源于集胞藻6803(Synechocystis sp.PCC 6803)的基因,其同源基因在蓝藻中普遍存在,但对其生物学功能所知有限。以易于转化的水稻品种中花11(Oryza sativa subsp.japonica cv.‘Zhonghua 11’)为材料,通过农杆菌介导的遗传转化方法将Slr1515基因导入水稻胚性愈伤组织中。经过诱导分化,获得了一系列转基因幼苗。通过PCR、GFP荧光及免疫印迹检测,筛选出单拷贝插入的转基因阳性株系,并对野生型和转基因株系的表型进行比较分析。结果表明,灌浆期转基因株系的剑叶长度比同期的野生型提高了27.7%。进一步的测定结果显示,转基因株系的剑叶叶绿素含量和PSII最大量子产率分别比野生型提高了0.65倍和4.4%。推测Slr1515基因可能在改善水稻农艺性状方面有一定价值。; 杨浩萌薛哲勇赵乐漆小泉黄芳; 关键词：叶绿素含量水稻蓝藻

OsVIP1 RNAi转基因水稻植株的构建被引量：2: 2012年; 为进一步阐明农杆菌介导的遗传转化分子机制,进而利用分子生物学方法提高农杆菌转化水稻效率,以水稻品种中花11为遗传转化受体材料,利用RNAi技术对水稻中拟南芥AtVIP1蛋白的同源蛋白进行了功能研究。通过同源性比对得到水稻中拟南芥AtVIP1蛋白的同源蛋白序列,命名为OsVIP1,构建了该蛋白基因2个片段(R1和R2)的RNAi表达载体pDS1301-2-R1和pDS1301-2-R2,通过农杆菌介导的方法分别转化水稻中花11。对转基因抗性愈伤进行统计,结果表明,由携带pDS1301-2-R1和pDS1301-2-R2载体转化的抗性愈伤的形成受到一定程度抑制。经PCR检测,证明2个片段R1和R2均成功整合到再生水稻植株基因组中;半定量RT-PCR分析显示部分RNAi转基因植株中OsVIP1基因表达被成功抑制。; 娄丽娟史雪罗美中; 关键词：水稻 RNAI 转基因

洁净DNA转化培育安全转基因水稻植株的技术优化: 传统的遗传转化中,普遍使用完整质粒DNA,非目的基因的质粒载体主干序列经常随着目的基因整合到植物基因组中,并通过形成稳定的次级结构,产生重组热点或导致异常重组,重组产生的基因多拷贝经常导致转基因的低表达甚至基因沉默。近年...; 赵潇; 关键词：水稻转化率

抗纹枯病转基因水稻植株的创制: 纹枯病菌/(Rhizoctonia solani/)是水稻纹枯病的病原菌,由于在自然状态下水稻缺乏有效的抗源,该病害有越来越严重的趋向,部分地区的危害程度甚至超过了稻瘟病。随着分子生物学技术的发展,利用转基因技术培育抗纹...; 彭世文; 关键词：水稻纹枯病几丁质酶草酸脱羧酶农杆菌介导转基因水稻; 文献传递

农杆菌介导的氮高效利用转基因水稻植株的获得被引量：2: 2011年; 将从深海硅藻中克隆的与氮具有高度亲和性的硝酸盐转运蛋白基因NAT3通过农杆菌介导的遗传转化方法,转入水稻品种中花11,在含30 mg/L Basta的选择培养基上筛选,获得456棵抗性植株,对NAT3目标基因检测,获得313棵阳性植株,初步证明目标基因已整合到中花11基因组中。; 查中萍万丙良殷得所杜雪树戚华雄; 关键词：转基因水稻氮高效利用

广谱抗真菌转基因水稻植株化学成分与结构动态变化: 2011年; 【背景】种植广谱抗真菌水稻可能会带来一定的环境生物安全问题,对其植株的化学成分进行实质等同性分析是转基因水稻安全性评价的重要内容之一。【方法】以表达广谱抗真菌蛋白转基因水稻转品1和转品8及其相应非转基因水稻七丝软粘的秸秆为研究材料,采用化学法和扫描电镜技术分析外源基因的导入对水稻秸秆化学成分以及组织显微结构的影响。【结果】(1)在整个生长发育过程中,广谱抗真菌转基因水稻转品1和转品8与其非转基因水稻七丝软粘叶片、叶鞘和茎的纤维素、半纤维素、木质素以及粗蛋白含量的变化趋势基本一致,且品种间化学成分的含量不存在显著差异。(2)广谱抗真菌转基因水稻叶片表皮的硅质瘤状结构以及气孔的形状和致密程度与其非转基因水稻七丝软粘相似;茎壁、厚壁组织、薄壁组织以及大小维管束的形态和分布情况未发生明显变化。【结论与意义】表达广谱抗真菌蛋白转基因水稻秸秆的化学成分和组织显微结构与非转基因水稻基本一致。这为广谱抗真菌转基因水稻的环境安全性评估提供了依据。; 黄薇姚清华陈丽华宋永康黄敏敏李玥仁; 关键词：转基因水稻秸秆化学成分

标记基因诱导剪切和洁净DNA转化培育安全转基因水稻植株: 转基因植物中存在的抗性选择标记基因和质粒载体框架序列是目前公认的两个主要导致转基因植物安全性问题的根源。Cre/LoxP诱导剪切系统是剔除标记基因的有效系统。本文以nptⅡ为抗性标记基因，报告基因gusA为目的基因，采用...; 张晓丽; 关键词：水稻标记基因转基因植株; 文献传递

一种简便的获得无标记耐盐转基因水稻植株的NaCl有效筛选浓度选择法被引量：6: 2011年; 以4个粳稻品种(日本晴、秀水11、武运粳7号、中花11)为材料,研究发现,在含NaCl的NB培养基上,NaCl对水稻种子发芽的抑制率与对成熟胚愈伤组织生长的抑制率之间呈线性正相关。水稻种子发芽抑制率达50%左右时的NaCl浓度与愈伤组织生长抑制率达80%左右时的NaCl浓度一致,可以作为耐盐基因转化水稻时NaCl有效筛选浓度的重要参考。由此获得日本晴、武运粳7号和中花11NaCl有效筛选浓度为200mmol/L,秀水11NaCl有效筛选浓度为250mmol/L。采用上述浓度的NaCl对BADH基因转化的日本晴和秀水11愈伤组织进行筛选,成功获得了无标记基因的转基因水稻植株,转化率分别达到38.9%和32.0%。建立的NaCl筛选浓度确定法通过测定NaCl对水稻种子的发芽抑制率来确定水稻耐盐基因转化时合适的NaCl筛选浓度,操作简便,实验周期短,无需其他抗性标记基因。; 赵艳罗园园张晓丽郭龙彪钱前董禹然; 关键词：水稻耐盐基因甜菜碱醛脱氢酶基因

多抗转基因水稻植株的获得及其抗性鉴定被引量：3: 2004年; 利用转Xa21基因(抗白叶枯病)纯合稳定的圣稻301与转Bt基因(抗螟虫)、转car基因(抗除草剂)的纯合稳定株系GK-1杂交,依据田间抗病虫性表现,利用标记基因选择,分子标记辅助选择,获得了多抗转基因水稻植株,其中某些多抗转基因水稻株系表现出良好的农艺性状和丰产潜力。; 姜明松李广贤宫德英姚方印; 关键词：水稻多抗转基因

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