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转染反义微小RNA-155对人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431生长的影响: 2018年; 目的观察转染反义微小RNA？155（miRNA-155）对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖、凋亡以及细胞迁移和侵袭的影响。方法 A431细胞分为3组，采用脂质体介导法转染无义序列miRNA-155（无义序列组）、反义序列 miRNA-155（反义序列组）或仅用含Lipofectamine 2000的DMEM（空白对照组）处理。实时定量聚合酶链反应检测转染后各组A431细胞miRNA-155的表达水平，噻唑蓝法检测转染后24、36、72、96、120 h细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞周期变化和凋亡情况，Transwell法检测细胞迁移与侵袭力。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果转染后，无义序列组、反义序列组与空白对照组中A431细胞miRNA-155相对表达量分别为0.98 ± 0.02、0.28 ± 0.18、1.00 ± 0.01，3组差异有统计学意义（F = 634.57，P 〈 0.001），反义序列组低于空白对照组和无义序列组，均P 〈 0.05。孵育72、96、120 h时，3组细胞存活率差异均有统计学意义（均P 〈 0.05），反义序列组细胞存活率在3个时间点均低于空白对照组和无义序列组（均P 〈 0.05）；3组细胞G0/G1期细胞比例、S期细胞比例、细胞增殖指数差异均有统计学意义（F = 23.46、36.81、19.35，P 〈 0.01）。反义序列组G0/G1期细胞比例（74.63% ± 2.13%）高于空白对照组（62.92% ± 2.56%）和无义序列组（63.75% ± 3.06%），均P 〈 0.05；S期细胞比例及细胞增殖指数（9.88% ± 1.83%、25.36 ± 2.13）低于空白对照组（18.86% ± 2.78%、37.08 ± 2.56）和无义序列组（18.33% ± 3.72%、36.25 ± 3.06），均P 〈 0.05；反义序列组迁移细胞数和侵袭细胞数低于空白对照组和无义序列组（均P 〈 0.05）。结论皮肤鳞状细胞癌A431细胞转染反义miRNA-155可减少miRNA-155的表达，有效抑制A431细胞增殖、迁移、侵袭，促进其凋亡。; 时磊魏明师广勇刘佳龚艳杰陈河涛梁颖红涂玲; 关键词：微RNAS

转染反义CD44对人鼻咽癌细胞的影响被引量：1: 2018年; 目的分析CD44对鼻咽癌CNE2细胞的影响。方法采用转染技术将CD44反义RNA真核表达质粒(pcDNA3.1-Anti-CD44)转入CNE2细胞;qRT-PCR与蛋白质印迹法检测转染效率;采用划痕实验、侵袭实验分别检测反义CD44对CNE2细胞迁移与侵袭的影响。结果 qRT-PCR结果显示,pcDNA3.1-Anti-CD44组CD44 mRNA表达水平较空白对照组明显下调;Western blot显示,pcDNA3.1-Anti-CD44组CD44蛋白表达水平较空白对照组明显下调;划痕实验显示,pcDNA3.1-Anti-CD44组MGC-803细胞的迁移能力较空白对照组明显减弱;侵袭实验结果显示,pcDNA3.1-Anti-CD44组CNE2细胞的侵袭能力较空白对照组明显下降。结论反义CD44能抑制鼻咽癌CNE2细胞的迁移与侵袭。; 黄远见李巧云肖娟; 关键词：CD44 鼻咽癌迁移

转染反义MIF对人胃癌细胞的影响: 2017年; 目的探讨反义巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对人胃癌MGC-803细胞的影响。方法将胃癌MGC-803细胞分为pcDNA3.1-Anti MIF组与空白对照组。pcDNA3.1-Anti MIF组采用转染技术将MIF反义RNA真核表达质粒(pcDNA3.1-Anti MIF)转入MGC-803细胞;空白对照组转染pcDNA3.1-sh-MIF质粒。qRT-PCR与蛋白质印迹法检测转染效率;采用MTT法、侵袭实验、Annexin V-FITC和PI染色法分别检测反义MIF对MGC-803细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。结果 qRT-PCR结果显示,pcDNA3.1-Anti MIF组MIF m RNA表达量(2.086±0.248)较空白对照组(6.992±0.342)明显下调;Western blot显示,pcDNA3.1v Anti MIF组MIF蛋白表达水平量(0.361±0.043)较空白对照组(1.171±0.091)明显下调;MTT实验结果显示,pcDNA3.1-Anti MIF组MGC-803细胞的OD值(0.436±0.017)较空白对照组(0.563±0.019)明显下降;侵袭实验结果显示,pcDNA3.1-Anti MIF组穿过基质胶的MGC-803细胞数(73.67±8.54)较空白对照组(137.30±11.91)明显减少;Annexin V-FITC和PI染色法结果显示,pcDNA3.1-Anti MIF组MGC-803细胞的凋亡率(21.61±4.62)%较空白对照组(7.67±0.63)%明显增加。以上各项指标比较差异均具有显著统计学意义(P<0.01)。结论反义MIF能抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖与侵袭,并能诱导凋亡。; 张雪梅孙延亮杨扬兰辉王喜梅; 关键词：巨噬细胞移动抑制因子胃癌增殖凋亡

联合转染反义寡核苷酸Survivin和VEGF抑制肺癌A549细胞生长的研究: 目的：本实验针对Survivin和VEGF mRNA序列设计反义寡核苷酸（ASODN），以脂质体（Lip）为载体，应用Survivin和VEGF ASODN联合转染非小细胞肺癌A549细胞株，探讨同时抑制Survivin...; 颜洁; 关键词：肺癌 A549细胞生长; 文献传递

1,25-二羟基维生素D_3协同转染反义端粒酶RNA诱导肝癌细胞凋亡的实验研究被引量：1: 2011年; 目的观察在抑制肝癌细胞端粒酶活性表达情况下,1,25-二羟基维生素D3(1,25-VD3)对肝癌细胞凋亡的影响。方法经脂质体介导,将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212/hTR导入维生素D3受体(VDR)阳性的肝癌细胞株SMMC7721细胞中培养。细胞克隆转移扩大培养,将其分为对照组、药物组、转染组和转染药物组。添加1,25-VD3,分别作用于转染药物组、药物组,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)和电子显微镜检测肝癌细胞凋亡。结果转染组和对照组细胞的端粒酶活性分别为0.686和1.685,说明反义端粒酶RNA可显著降低肝癌细胞端粒酶活性。对照组、药物组、转染组和转染药物组细胞凋亡率分别为3.4%、12.2%、8.8%、23.6%;差异有显著统计学意义(P<0.01)。超微结构检查也证实存在凋亡发生。1,25-VD3或转染反义端粒酶RNA对肝癌细胞有促细胞凋亡作用,两者协同对肝癌细胞凋亡作用显著增强。结论转染反义端粒酶RNA,可降低肝癌细胞端粒酶活性,可显著增强1,25-VD3对肝癌细胞的促凋亡作用,并且对细胞的增殖也存在明显的抑制作用。; 张传山刘贵秋张勤胡佩珍王文亮; 关键词：细胞凋亡端粒酶

转染反义寡核苷酸对人胆管癌QBC939细胞XIAP基因表达及细胞周期作用的实验研究被引量：4: 2009年; 目的研究转染反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人胆管癌细胞株QBC939细胞凋亡抑制蛋白基因(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)表达的抑制作用及对细胞周期凋亡的影响.方法脂质体介导ASODN瞬时转染QBC939细胞,荧光显微镜观察ASODN转染入细胞的情况,并计算转染率;RT-PCR检测转染前后XIAP mRNA表达的变化;流式细胞仪检测转染后细胞周期的变化和凋亡率.结果转染后24h可达到最佳的转染效果;ASODN组的XIAP基因水平明显低于对照组(P<0.05),流式结果显示转染后QBC939G0/G1期细胞高于阴性对照组,凋亡率高于对照组(P<0.05).结论脂质体介导转染ASODN能特异性地抑制QBC939细胞中的XIAP基因表达,使其发生G0/G1期阻滞,并诱导胆管癌细胞凋亡,有望成为胆管癌基因治疗新的靶点.; 李鹏崔平贾俊琴贾伟刘鑫王熙才; 关键词：寡脱氧核苷酸反义胆管癌细胞周期

脂质体转染反义寡核苷酸对重型β-地中海贫血红系细胞α-珠蛋白的调控作用被引量：8: 2009年; 目的研究脂质体转染反义寡核苷酸（ASON）对重型β-地中海贫血（β-地贫）患者红系细胞α-珠蛋白基因的调控作用，为基因治疗β-地贫提供新的思路。方法将前期实验筛选获得的高效抑制α-珠蛋白基因表达的ASON以最佳浓度作用于体外培养的重型β-地贫患者红系细胞，并设空白对照组，经实时荧光定量RT—PCR分析ASON组和空白对照组中红系细胞α、β、γ-珠蛋白基因表达情况，观察ASON对相应珠蛋白基因表达的影响，通过高效液相色谱法（HPLC）检测ASON作用后血红蛋白水平，并经透射电子显微镜（电镜）观察ASON作用前后红系细胞内α-珠蛋白肽链沉积情况，了解ASON对β-地贫患者红系细胞内过剩α-珠蛋白肽链的影响。结果实时荧光定量RT—PCR结果显示ASON组α-珠蛋白基因mRNA表达（9．04±0．29）较空白对照组（24．23±0．29）减低（P〈0．01），α/（β＋γ）珠蛋白比例失衡得到改善[ASON组、空白对照组分别为（0．79±0．02）、（2．26±0．06），P〈0．01]；HPLC检测表明ASON作用后仅-珠蛋白基闪表达下调，HbA：和HbF表达增加；透射电镜结果证实ASON作用后重型β-地贫患者红系细胞内过剩的α-珠蛋白肽链沉积减少，特别是在早期幼稚红细胞中，在空白对照组中沉积物无明显变化。结论高效ASON可抑制体外培养的重型β-地贫患者红系细胞α-珠蛋白基因表达，有助于改善珠蛋白基因α（β＋γ）比例失衡，并减少过剩α-珠蛋白肽链在红系细胞内的沉积，为基因治疗β-地贫提供新的思路，; 刘容容马劼陈萍莫武宁林伟雄赖永榕; 关键词：珠蛋白类脂质体寡核苷酸类

移植物转染反义细胞外信号调节激酶-2基因减轻慢性移植物血管病: 2008年; 目的研究转染反义ERK2基因对慢性移植物血管病的抑制作用及其机制。方法构建含有反义ERK2基因和带有LacZ基因的腺病毒载体。以BN大鼠为供者，Lewis大鼠为受者，制作大鼠腹主动脉移植模型。ERK2组接受转染反义ERK2基因的腹主动脉移植，LacZ组接受转染LacZ基因的腹主动脉移植，对照组接受不进行处理的腹主动脉移植。移植后60d，取各组移植血管和血清样本，以2，3二羟基丙醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）为内参照，计算ERK2条带灰度与GAPDH条带灰度的比值（ERK2／GAPDH，即为ERK2的相对表达强度）；测量移植血管内膜厚度（I）和中膜厚度（M），计算I／（I＋M）之百分比；检测移植血管平滑肌细胞（VSMC）的数目和分布；检测血清血小板源性生长因子一BB（PDGF_BB）的浓度。结果对照组、LaeZ组和ERK2组ERK2／GAPDH的比值分别为1．21±0．15、1.02±0.06和0.47±0．09，后者显著低于前二者（P〈0．05）。对照组和LaeZ组移植血管呈典型的移植物血管病表现，两组I／（I＋M）比值分别为84．1％和79．9％；ERK2组移植血管呈移植动脉内膜炎表现，该组1／（I＋M）比值为13．7％，显著低于前两组（P〈0．05）。对照组和LacZ组内膜增厚处散在分布大量VSMC，计数分别为（71．3±9．2）个和（76．4±11．3）个；ERK2组内膜处VSMC计数为（34．8±5．3）个，明显少于前两组（P〈0．05）。对照组和LaeZ组受者血清PDF-BB浓度分别为（1075±70）pg／ml和（1200±25）pg／ml，ERK2组为（626±27）pg／ml，ERK2组明显低于对照组和LacZ组（P〈0．05）。结论转染反义ERK2基因可减轻慢性移植物血管病，并延缓其进展，其机制可能与VSMC增殖和迁移受到抑制以及PDGF-BB表达下调有关。; 陈曦林宫念樵陈知水丁召董冲郭晖; 关键词：细胞外信号调节MAP激酶类转染移植物

大鼠供肾转染反义ERK2基因减缓肾移植后慢性移植肾肾病的作用及机制: 2008年; 目的研究腺病毒介导的反义ERK2（Adanti-ERK2）基因转染供肾对减缓肾移植后发生慢性移植肾肾病（CAN）的作用及机制。方法建立大鼠间肾移植模型。按供肾移植前处理方式的不同分为对照组、空载病毒组和基因转染组，每组6只。对照组供肾灌注无菌HTK液0．5ml，空载病毒组供肾灌注含5×10^9pfuLacZ基因腺病毒（Ad-LacZ）的HTK液0．5ml，基因转染组供肾灌注含5×10^9pfuAdantbERK2的HTK液0．5m1。肾移植术后24周行移植肾的病理学观察，免疫组织化学法观察肾小管上皮细胞表面标志蛋白E-Cadherin、Vimentin、TβRⅠ的表达以及CD4＋、CD8＋T淋巴细胞和ED-1＋细胞的浸润情况；酶联免疫法检测受者血清中转化生长因子β（TGF-β1）的含量。结果肾移植术后24周，对照组和空载病毒组移植肾呈CAN表现；肾小球硬化，肾小管萎缩明显，伴严重间质纤维化以及明显的CD4＋、CD8＋T淋巴细胞和ED-1＋细胞浸润；病变区肾小管上皮细胞E-Cadherin表达减少，Vimentin、TβRI表达显著增多。基因转染组移植肾间质内仅有少量CD4＋、CD8＋T淋巴细胞和ED-1＋细胞浸润；肾小管上皮细胞E-Cadherin表达正常。对照组和空载病毒组血清中TGF-β。含量明显高于基因转染组。结论AdantkERK2基因转染移植肾可减缓CAN的发生，对移植肾具有保护作用。这种保护机制可能与减少炎症细胞的浸润、下调TGF-β等致纤维化因子的表达以及抑制肾小管上皮细胞向间充质细胞的转化有关。; 丁召宫念樵陈曦林郭晖陈知水陈孝平; 关键词：肾移植细胞外信号调节MAP激酶类

脂质体转染反义脱氧寡核苷酸对K562细胞α珠蛋白基因表达及细胞增殖的影响被引量：8: 2007年; 本研究查明脂质体转染反义脱氧寡核苷酸(ASON)对K562细胞α珠蛋白基因表达的抑制作用及对细胞增殖的影响,探讨基因调控治疗β地中海贫血的新思路。设计合成靶向α珠蛋白基因的ASON,并与正义寡核苷酸(SON)和空白对照进行比较。采用脂质体转染技术将ASON、SON与K562细胞共同培养,用荧光显微术、流式细胞术检测脂质体转染效率,用实时荧光定量RT-PCR法检测K562细胞中α珠蛋白基因表达情况,并通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)法观察脂质体转染ASON技术对细胞增殖的影响。结果表明:脂质体转染效率在ASON作用24h达到最高,脂质体转染ASON组的α珠蛋白基因表达水平显著低于SON和空白对照组(p<0.01),并对细胞的增殖有明显的抑制作用,上述效应呈浓度依赖性。结论:脂质体转染ASON能特异性的抑制K562细胞中α珠蛋白基因表达,可能会成为β地中海贫血基因治疗的一个新靶点。; 刘容容赖永榕马劼; 关键词：Α珠蛋白基因脂质体转染反义脱氧寡核苷酸 K562细胞细胞增殖地中海贫血

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