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慢病毒载体介导Gag-Caspase-8诱导三阴性乳腺癌原代细胞凋亡及S期阻滞: 2025年; 目的探讨携Gag-Caspase-8慢病毒样颗粒对三阴性乳腺癌原代细胞增殖、迁移、周期和凋亡的影响及作用机制。方法收集临床人乳腺癌标本3例,通过改良组织块培养法培养人乳腺癌原代细胞,通过HE染色、免疫组化及免疫荧光鉴定所培养的细胞是否为高纯度三阴性人乳腺癌原代细胞;慢病毒转染构建携Gag-Caspase-8慢病毒样颗粒,细胞分为PBS组、Gag-VLPs组和Gag-CASP8-VLPs组。采用MTT法评估细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移能力,AO/EB染色检测细胞凋亡,流式细胞术分析细胞周期和凋亡,蛋白质免疫印迹考察凋亡相关蛋白表达。结果临床肿瘤标本经HE染色确定为乳腺癌病理组织,免疫组化鉴定乳腺癌原代细胞特异性分子标记物CA153阳性高表达,并通过计算阳性细胞比例评估细胞纯度约为98%,免疫荧光检测结果显示,HER2、ER、PR均阴性表达,证明所培养的细胞为高纯度三阴性人乳腺癌原代细胞;Western blotting检测发现构建的Gag-VLPs和Gag-CASP8-VLPs内有慢病毒载体特异性分子标志物P24表达,证明慢病毒样颗粒包装成功。Gag-CASP8-VLPs干预三阴性人乳腺癌原代细胞24、48 h后,与对照组PBS和Gag-VLPs相比,倒置显微镜下观察到细胞皱缩、体积减小、贴壁能力下降且漂浮细胞增多;MTT检测显示,Gag-CASP8-VLPs组显著抑制了人乳腺癌原代细胞的生长(P<0.01),并呈时间依赖性;细胞划痕实验观察到,Gag-CASP8-VLPs组可显著抑制人乳腺癌原代细胞的迁移能力(P<0.05);流式细胞术检测发现,Gag-CASP8-VLPs组S期细胞数量显著增高(P<0.01),细胞阻滞于S期;AO/EB染色及流式细胞术检测发现,Gag-CASP8-VLPs组可诱导细胞发生凋亡(P<0.01);Western blotting结果显示,Gag-CASP8-VLPs组三阴性乳腺癌原代细胞内Gag-Caspase-8、Pro caspase-8、Activecaspase-8和Caspase-3凋亡相关蛋白表达显著增高(P<0.01)。结论慢病毒介导Gag-Caspase-8将活化的Caspase-8导入三阴性乳腺癌原代; 王敏李习平檀军邱梅侯泽宇田莹罗鸿莹范超文齐玲俞琦谢薇; 关键词：慢病毒载体 CASPASE-8

腺病毒载体介导编辑chNHE1基因对J亚群禽白血病病毒抗性研究: 2025年; 鸡Na^(+)/H^(+)离子交换蛋白-1(chNHE1)是J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的细胞受体,是ALV-J感染的细胞靶点。为了探索鸡抗禽白血病的育种目标,试验构建了定点编辑chNHE1基因的CRISPR/Cas9腺病毒系统,并对编辑后细胞抗ALV-J感染能力进行评价。结果显示:使用CRISPR/Cas9腺病毒载体介导的ssODNs同源重组方案可以在chNHE1中引入突变,其中36%单克隆细胞株存在W38缺失;T37缺失的细胞对ALV-J感染具备极显著的抗性;W38缺失的细胞对ALV-J感染具有完全抗性,同时具有E35A替换、P36缺失、T37缺失的细胞对ALV-J感染也具有完全抗性。研究表明,CRISPR/Cas9腺病毒载体可以有效地编辑鸡DF-1细胞,W38缺失或E35A替换P36、T37缺失都可以使DF-1对ALV-J感染具有抗性,该方案为培育抗ALV-J感染的基因编辑鸡提供技术储备。; 王震陈运通魏天悦陈洪岩王旭光王旭光高玉龙夏长友; 关键词：J亚群禽白血病病毒腺病毒载体

AAV载体介导的Sall2过表达延缓肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠疾病进展: 2025年; 目的检测过表达婆罗双树样基因2(Sall2)对人超氧化物歧化酶1(hSOD1)-G93A突变型肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠疾病进展的影响,为ALS基因治疗提供潜在靶点。方法通过生物信息学分析筛选出差异基因Sall2。选取48只ALS转基因小鼠,通过构建具有神经元特异性启动子人突触蛋白Ⅰ(hSyn)的AAV-PHP.eB-Sall2腺相关病毒,尾静脉输入6周龄小鼠体内,以回输AAV-PHP.eB-GFP腺相关病毒到同窝ALS小鼠作为对照组。免疫荧光双标染色检测小鼠脊髓和大脑皮层Sall2与神经元核抗原(NeuN)/GFAP染色情况,期间检测小鼠生存期、体重、运动能力和腓肠肌肌电变化;尼氏染色检测小鼠脊髓前角神经元形态学变化;Western blotting检测过表达Sall2基因对细胞周期蛋白E1(cyclin E1)表达的影响。结果生物信息学分析筛选到Sall2在ALS小鼠脊髓中异常低表达;相较于对照组ALS小鼠,过表达Sall2基因组ALS小鼠脊髓和大脑皮层中Sall2蛋白表达均增多,Sall2^(+)/NeuN+双阳性细胞中Sall2积分吸光度值均升高。过表达Sall2基因组ALS小鼠生存时间延长,体重下降速度变缓,转棒时间和倒置时间延长,腓肠肌肌电正锐波和纤颤电位减少。过表达Sall2基因组ALS小鼠脊髓前角尼氏体标记的神经元数量增加,神经元受损情况得到改善。过表达Sall2基因降低ALS小鼠脊髓和大脑皮层中cyclin E1的表达。结论过表达Sall2基因可延缓ALS转基因小鼠疾病进展,改善运动能力,影响cyclin E1的表达,对ALS转基因小鼠有一定的治疗效果。; 张雪王晨晨高学帅白雪王雪枚刘金梦管英俊陈燕春; 关键词：肌萎缩侧索硬化症腺相关病毒免疫印迹法转基因小鼠

一种慢病毒载体介导生产BLOC1S1转基因山羊方法: 本发明属于转基因山羊制备技术领域，公开了一种慢病毒载体介导生产表达BLOC1S1转基因山羊方法，其特征在于：（1）构建含有BLOC1S1基因的慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞后超速离心，PBS重悬后获得慢病毒浓缩液...; 华进联王聪亮朱海鲸雷安民万仕成李娜陈文博李剑南刘晓宇任赵飞马东杜晓敏屈雷张梦菲

慢病毒载体介导的类固醇生成因子-1沉默调控子宫内膜基质细胞蜕膜化与自噬: 2024年; 目的探讨慢病毒载体介导的类固醇生成因子-1(SF-1)沉默对人子宫内膜基质细胞(hESCs)蜕膜化进程的影响及机制。方法收集子宫内膜异位症(EM)患者与正常妊娠者的子宫内膜组织,通过Real-time PCR和免疫组织化学染色检测SF-1的差异表达情况。从正常妊娠者的子宫内膜组织中分离并鉴定hESCs,将hESCs分为对照组、雌二醇(E_(2))+孕酮(P4)组、短发夹RNA(shRNA,sh)-正常对照(NC)+E_(2)+P4组、sh-SF-1+E_(2)+P4组,进行对应处理后,倒置显微镜下观察hESCs形态变化,Real-time PCR和Western blotting分别检测细胞内人胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)、泌乳素(PRL)的mRNA表达水平和蛋白表达水平,流式细胞术测定细胞周期分布,免疫荧光染色观察细胞内自噬标记物微管相关蛋白轻链3(LC3)表达情况,Western blotting测定细胞内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平。结果EM患者子宫内膜组织中SF-1 mRNA相对表达量和SF-1蛋白阳性率均高于正常妊娠者子宫内膜组织(P<0.05)。与sh-NC+E_(2)+P4组比较,sh-SF-1+E_(2)+P4组细胞多为长梭形,未见明显蜕膜化,IGFBP1、PRL的mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均显著下调(P<0.05),G_(0)/G_(1)期细胞比例显著减少而S期细胞比例显著增加(P<0.05),细胞内LC3荧光表达增强,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,Beclin-1蛋白相对表达量也显著上调(P<0.05)。结论EM患者子宫内膜组织内SF-1表达升高,通过慢病毒载体介导的SF-1沉默能够抑制hESCs蜕膜化过程,该作用可能与调控细胞自噬水平相关。; 任健陈晓燕; 关键词：类固醇生成因子-1 蜕膜化自噬免疫印迹法

纳米载体介导的RNAi及农药纳米化作用机理研究——中国农业大学植物保护学院闫硕教授: 2024年; RNA干扰(RNA interference,RNAi)指由双链RNA(Double-stranded RNA,dsRNA)诱发的同源mRNA特异性降解的现象。与基因编辑相比,RNAi具有快速、简便、应用范围广等优势,在昆虫必需基因功能解析领域具有不可替代的作用,但dsRNA存在稳定性差。; 文心; 关键词：必需基因载体介导纳米化 RNAI 双链RNA

纳米载体介导的乙酰胆碱酯酶RNA干扰对朱砂叶螨生长发育的影响: 2024年; 为探明纳米载体介导的RNA干扰乙酰胆碱酯酶(ace)基因表达对朱砂叶螨的影响,通过NCBI上获取朱砂叶螨的ace 1基因,利用RT-qPCR技术对ace 1基因在朱砂叶螨各个时期的表达水平进行检测,并利用纳米递呈dsRNA-ace 1的RNAi技术,检测其对朱砂叶螨的影响.结果显示,乙酰胆碱酯酶基因在朱砂叶螨4个时期均有表达,其中以成螨期表达量最高,其次是卵、若螨和幼螨.通过叶碟饲喂dsRNA-ace 1能够有效抑制朱砂叶螨ace 1的表达,ace 1基因表达水平下降57%,72 h致死率达到41.77%,同时对朱砂叶螨的产卵、孵育造成显著的影响.通过纳米递呈dsRNA-ace 1能够显著提高对乙酰胆碱酯酶基因表达的抑制,抑制率同比未纳米递呈dsRNA-ace 1提高24%,致死率同比增幅32.08%,产卵率与孵化率也均有显著降低.同时进行微滴法施用dsRNA-ace 1/SPc复合物,对朱砂叶螨ace 1的RNA干扰效果,和叶碟饲喂法差异不显著.本研究表明纳米载体递呈dsRNA-ace 1能够提高对ace 1基因表达的抑制,提高对朱砂叶螨的致死效果,结果可为后期以纳米载体介导的RNAi技术对害虫开展生物防治提供理论基础.(图7参27); 王谦稳卜春亚陈耔霖马雪晶任争光; 关键词：朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶基因克隆 RNA干扰

用于载体介导的伊蚊体内外过表达环状RNA的基因序列及其应用: 本发明公开了用于载体介导的伊蚊体内外过表达环状RNA的基因序列，包括上游反向互补重复序列、所需表达的目的环状RNA的序列及其侧翼剪接受体和剪接供体以及下游反向互补重复序列，其中所述上游反向互补重复序列的核苷酸序列如SEQ...; 高永辉顾金保

载体介导的狂犬病蛋白疫苗的研制现状: 2024年; 狂犬病病毒(rabies virus, RABV)感染导致的狂犬病是人兽共患的中枢神经系统急性传染病, 而接种疫苗是防治狂犬病的主要方式。RABV糖蛋白和核蛋白是2种有效的候选疫苗抗原, 但其蛋白疫苗或核酸疫苗仍存在一些缺陷, 有必要探索载体介导的RABV疫苗。此文概述了腺病毒、痘病毒、α病毒、疱疹病毒、植物乳杆菌和根癌农杆菌等载体介导的RABV蛋白疫苗的构建及其免疫机制等方面的研究现状。; 李文桂陈雅棠; 关键词：狂犬病病毒糖蛋白核蛋白

载体介导的结核分枝杆菌ESAT-6疫苗的研制现状: 2024年; 结核分枝杆菌(MTB)引起的结核病是一种慢性呼吸道传染病,研制载体介导的ESAT-6疫苗是当前的热点之一,ESAT-6抗原是一种公认的疫苗分子。本研究概述了卡介苗、耻垢分支杆菌、母牛分支杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、格式链球菌、单核细胞增生性李斯特菌、根癌农杆菌、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、毕赤酵母、流感病毒、高度减毒的牛痘病毒、腺病毒血清型5、慢病毒和昆虫杆状病毒等载体介导的结核分枝杆菌ESAT-6疫苗的研制现状。; 李文桂陈雅棠; 关键词：结核分枝杆菌疫苗

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