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薰衣草非 特异性 脂质 转移 蛋白 基因nsLTP2-1和nsLTP2-2的克隆与功能分析 2024年 非 特异性 脂质 转移 蛋白 (nsLTP,non-specific lipid transfer proteins)在植物脂质 转运和分泌中发挥重要作用。本研究从薰衣草(Lavandula angustifolia)中克隆到2个II型nsLTP基因,命名为nsLTP2-1和nsLTP2-2,并对其进行功能分析。生信分析表明,nsLTP2-1和ns LTP2-2分别编码119个和117个氨基酸,具有脂转移 蛋白 (LTP,lipid transfer proteins)保守结构域和8个高度保守的半胱氨酸残基;系统进化分析显示它们处于两个分支,与同科的紫苏(Perilla frutescens)相似性最高。基因表达分析显示2个基因均在花蕾中高表达,在叶片、茎和花瓣中几乎不表达,在花萼中的表达存在差异,nsLTP2-1和nsLTP2-2分别在成熟花萼和幼嫩花萼中表达量更高;2个基因在花蕾和叶片中的表达均受到强光诱导,且在花蕾中的表达均受脱落酸诱导,而叶片中nsLTP2-1和nsLTP2-2的表达分别受茉莉酸甲酯和乙烯诱导。亚细胞定位显示2个nsLTPs均定位在细胞膜和细胞壁上,可能与次生代谢物的转运有关。过表达nsLTP2-1和nsLTP2-2烟草叶片经尼罗红染色后,经485~543 nm激发光激发,叶片腺毛头部的荧光显示多于野生型,说明本研究中的nsLTPs可能在脂类的合成和转运中起重要作用。这些结果为明确薰衣草脂转移 蛋白 在脂类及萜类转运中的功能研究提供了参考。关键词：薰衣草 非特异性脂质转移蛋白 激素处理 非生物胁迫 亚细胞定位 牡丹非 特异性 脂质 转移 蛋白 基因PsLTP的生物信息学分析 2024年 非 特异性 脂质 转移 蛋白 基因LTP的基因特征及其编码蛋白 的生物学特性,探索其生物功能。[方法]运用Blast、ORF-Finder、ProtParam、SignalP 4.1、ProtScale和TMHMM 2.0 Server等生物信息学软件,分析牡丹nsLTP基因序列及其编码蛋白 的基本理化性质、信号肽、磷酸化位点、保守结构域等,并运用DANMAN、MEGA软件进行多序列比对和系统发育树构建。[结果]牡丹nsLTP基因(NCBI登录号为:JZ840269.1)序列全长为685 bp,开放阅读框长为354 bp,编码蛋白 包含117个氨基酸,理论等电点为8.93,为不稳定性蛋白 。牡丹nsLTP蛋白 为疏水性蛋白 ,含有信号肽但不含跨膜结构域,NetPho Server预测其含有8个丝氨酸和3个酪氨酸磷酸化位点及5个苏氨酸磷酸化位点。PsnsLTP蛋白 具有植物LTP蛋白 典型结构,即4个α-螺旋,4对二硫键,1个可结合和容纳脂质 分子的疏水结构。多序列比对及系统发育树分析显示,PsLTP蛋白 与绒毛烟草LTP蛋白 (XP_009608993.1)的相识度62.7%,且进化树聚为同一小分支,遗传距离较近。[结论]通过对牡丹nsLTP基因特性及蛋白 结构研究,系统性研究了牡丹nsLTP基因的生物信息学特性,为牡丹抗病抗逆功能基因的研究提供了依据,也为其他植物nsLTP基因研究提供了参考。关键词：蛋白结构 生物信息学 烟草非 特异性 脂质 转移 蛋白 基因NtLTPI.38、及其编码的蛋白 和应用 非 特异性 脂质 转移 蛋白 基因NtLTPI.38、及其编码的蛋白 和应用。基因NtLTPI.38的CDS序列如SEQ ID NO:1所示。蛋白 质NtLTPI.38的氨基酸序列如SEQ ID N...烟草非 特异性 脂质 转移 蛋白 基因NtLTPI.38、及其编码的蛋白 和应用 非 特异性 脂质 转移 蛋白 基因NtLTPI.38、及其编码的蛋白 和应用。基因NtLTPI.38的CDS序列如SEQ ID NO:1所示。蛋白 质NtLTPI.38的氨基酸序列如SEQ ID N...烟草非 特异性 脂质 转移 蛋白 基因家族的鉴定与分析 被引量：8 2021年 非 特异性 脂质 转移 蛋白 (non-specific lipid transfer proteins, nsLTPs)可以在体外转移 脂质 ,调节植物的生长发育以及对环境非 生物和生物胁迫作出反应等。本研究从烟草栽培品种K326 (Nicotiana tabacum L.)基因组中鉴定出74个nsLTPs基因,对其系统发育关系、基因结构、保守基序、染色体定位、基因重复、启动子顺式作用元件、3D结构和激素与非 生物胁迫处理下的表达模式进行了分析。结果表明,根据8个半胱氨酸之间的间隔和序列相似性将其分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ和ⅩⅢ八种类型,相同类型的NtLTPs具有相似的内含子-外显子基因结构和保守基序模式, motif 2和motif 3是NtLTPs基因家族的特征基序。在进化过程中,片段重复是NtLTPs基因家族扩展的主要原因,干旱处理后的RNA-seq分析发现,在进化过程中,不同基因重复事件发生后功能分化模式存在差异。启动子分析表明,它们含有多种光反应、激素和非 生物胁迫响应顺式作用元件。进一步采用qRT-PCR分析发现, NtLTPs家族基因在烟草植株的不同组织和器官中具有不同的表达模式,可以响应干旱、盐等非 生物胁迫以及IAA、GA、SA等激素处理。研究结果为深入分析NtLTPs家族基因的功能提供了理论参考,并为进一步的分子育种提供了理论基础。关键词：烟草 基因家族 生物信息学 基因表达 番茄非 特异性 脂质 转移 蛋白 的鉴定与表达分析 非 特异性 脂质 转移 蛋白 (nsLTPs)是一类小的碱性蛋白 (6.5至10.5KD)，由多基因家族编码，它们参与多种生理生化过程。脂质 转移 蛋白 (LTP)具有转移 或结合不同类型的疏水性分子例如脂肪酸，磷脂，脂肪酰基-C...关键词：番茄 非特异性 基因结构 文献传递 甘薯非 特异性 脂质 转移 蛋白 基因克隆与表达分析（英文） 被引量：1 2016年 非 特异 脂质 转移 蛋白 (ns LTP)是植物界普遍存在的一类涉及多种胁迫反应的可溶性蛋白 。为了阐明甘薯中非 特异性 脂质 转移 蛋白 基因IbLTP1和IbLTP2在盐胁迫反应中的功能,本研究运用PCR技术,对IbLTP1和IbLTP2基因进行了克隆,并通过生物信息学方法分析了序列结构、蛋白 质保守结构域和系统进化关系;利用q RT-PCR方法检测了这两个基因在不同组织中的表达模式以及盐胁迫条件下的表达差异;将IbLTP1和IbLTP2基因克隆到大肠杆菌的原核表达载体p ET32a中,对重组菌BL21(p ET32a-LTP)的耐盐性进行分析。序列分析表明:IbLTP1和IbLTP2编码区均不含内含子并都具有等位基因。IbLTP1和IbLTP2基因的蛋白 质序列分别包括114和94个氨基酸残基并且不含色氨酸残基,蛋白 序列N端含有信号肽序列。保守结构域和系统进化分析结果表明:IbLTP1和IbLTP2均含有ns LTP蛋白 的保守结构域,IbLTP1属于TypeⅠ而IbLTP2属于TypeⅡ。实时荧光定量PCR分析表明:IbLTP1在幼叶中表达量最高,根中表达量最低;而IbLTP2在茎中表达量最高,成熟叶中表达量最低。在Na Cl胁迫条件下,IbLTP1和IbLTP2表达量在根中基本无变化而在茎和叶中上调。大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达IbLTP1和IbLTP2基因能够提高转基因菌株对Na Cl的耐受性。因此,本研究推测IbLTP1和IbLTP2基因可能在甘薯盐胁迫反应中发挥了作用。关键词：甘薯 非特异性脂质转移蛋白 氯化钠胁迫 基因克隆 实时荧光定量PCR 西伯利亚蓼非 特异性 脂质 转移 蛋白 基因PsnsLTP的功能分析 被引量：2 2015年 非 特异性 脂质 转移 蛋白 基因(植物表达载体:pROKII-PsnsLTP)对烟草进行遗传转化,经卡那霉素抗性分化筛选及PCR鉴定,获得6个转基因烟草株系。接种烟草炭疽病病菌和猝倒病病菌后观察转基因植株和野生型的表型差异,在Na Cl、Cd Cl2、7.5%PEG6000的胁迫下进行表型观察和生理指标的测定。结果显示:与野生型烟草相比,T1代转基因植株已具有较强的耐烟草炭疽病和猝倒病的能力;其超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性显著增强,丙二醛(MAD)含量显著降低,且幼苗具有较好的生长性状。由此证明,西伯利亚蓼非 特异性 脂质 转移 蛋白 PsnsLTP增加了转基因烟草抵御生物胁迫和非 生物胁迫的能力,这些工作为深入研究PsnsLTP基因的抗逆机制提供了参考。关键词：西伯利亚蓼 非特异性脂质转移蛋白 转基因烟草 生物胁迫 非生物胁迫 烟草非 特异性 脂质 转移 蛋白 基因的克隆与表达分析 被引量：5 2015年 非 特异性 脂质 转移 蛋白 基因Nt LTP1.1在烟草抗病抗逆反应中的功能,用c DNA末端快速扩增技术(Rapid-amplification of c DNA ends,RACE)从普通烟草中克隆了该基因全长,并通过生物信息学方法分析了c DNA序列结构、蛋白 理化性质、保守基序、三级结构以及系统进化关系;利用q RT-PCR检测了该基因在不同组织中的表达模式以及胁迫条件下的表达差异。结果表明:Nt LTP1.1基因全长615 bp,编码蛋白 含有129个氨基酸,为一种小分子碱性可溶性蛋白 。蛋白 序列N端含有信号肽,预测其可能定位于分泌途径中。Blast比对结果显示,烟草非 特异性 脂质 转移 蛋白 与番茄ns LTP1序列相似性最高,含有8CM保守基序(8个半胱氨酸残基组成的保守基序)。蛋白 三级结构预测表明,Nt LTP1.1具有ns LTP典型的三级结构,包括4个α-螺旋,4对二硫键,1个可结合和容纳脂质 分子的疏水腔。多重比对结果显示,Nt LTP1.1 8CM结构域模式为C1-X9-C2-X13-C3C4-X19-C5XC6-X22-C7-X13-C8。系统进化分析结果表明,ns LTP进化形成5类,Nt LTP1.1属于Type I。表达模式分析显示,Nt LTP1.1基因主要在烟草叶片中表达,具有明显的组织表达特异性 。在低温胁迫条件下表达受到抑制,在水杨酸诱导条件下表达上调。因此,推测Nt LTP1.1基因可能在烟草防御反应中发挥作用。关键词：烟草 克隆 生物信息学 小桐子非 特异性 脂质 转移 蛋白 A的基因克隆及其表达和功能分析 被引量：2 2015年 非 特异性 脂质 转移 蛋白 A基因Jcns LTPA。克隆到该基因的c DNA序列全长833 bp,开放阅读框长度513 bp,编码170个氨基酸,存在ATT_LTSS典型保守功能基序。其启动子区域中鉴定到了TATA框、CAAT框、CATA框、W框等顺式作用元件以及CRT/DRE低温响应元件。半定量RT-PCR分析表明,该基因在茎、根、叶中都有表达,以茎中表达量最高、且受低温诱导最显著。同时,酵母表达Jcns LTPA也提高了重组酵母菌的抗低温能力。这些结果充分说明了小桐子Jcns LTPA是与抗冷性密切相关的基因,可以用于小桐子的抗冷性遗传改良。关键词：小桐子 基因克隆 酵母表达
