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一种检测齿兰环斑病毒的引物组及其使用方法和应用: 本发明提供了一种检测齿兰环斑病毒的引物组及其使用方法和应用，本发明属于分子生物学技术领域。本发明提供的检测齿兰环斑病毒的引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：...; 徐匆郑芝波黄皓陈彦黄晓彦罗华建胡珊梁卫驱李昀哲

一种用于检测建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的双重RPA引物组: 本发明公开了一种用于检测建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的双重RPA引物组，所述引物组的序列为：CymMV‑F：5’‑AATTGTGGGTTAACA ACCTTGGCCTCCCCGCCG‑3’；CymMV‑R：5’‑TAGAG...; 王丽花孙爱青吴学尉张艺萍杨秀梅许凤苏艳张丽芳蒋亚莲

TaqMan探针双重实时荧光定量PCR法同步检测兰花中的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒: 2024年; 为建立一种同步定量检测建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)的高效检测方法,本研究根据CymMV和ORSV CP基因高度保守区分别设计引物和探针并筛选,获得156 bp和148 bp的靶标序列及对应的最优特异性引物探针组合,建立了基于TaqMan探针的双重实时荧光定量PCR方法。该方法最低检出限为1拷贝或6.2×10^(-3)fg,最低稳定检出限为10拷贝或6.2×10^(-2)fg,是RT-PCR的10~100倍;构建的标准曲线线性关系良好,扩增效率分别为97.7%和100.2%,相关系数R2分别为1.000和0.999;对其他5种常见病毒均无扩增曲线,检测特异性强;批组内与批组间重复性试验Ct值变异系数≤0.60%,重复性和稳定性好。利用该方法和基因芯片法分别对4个种属的66个兰花样品进行方法验证,该方法相较于基因芯片法检出率提高了53.85%(CymMV)和162.5%(ORSV)。综上所述,本方法可同时高通量检测CymMV和ORSV 2种病毒靶基因,结果可靠,应用前景广阔,可为开展病毒精准鉴定、科学防控以及从源头遏制病毒传播提供技术支撑。; 孙爱青王丽花张艺萍杨秀梅许凤苏艳; 关键词：建兰花叶病毒齿兰环斑病毒 TAQMAN探针 RT-QPCR 兰花

一种检测齿兰环斑病毒的引物组及其使用方法和应用: 本发明提供了一种检测齿兰环斑病毒的引物组及其使用方法和应用，本发明属于分子生物学技术领域。本发明提供的检测齿兰环斑病毒的引物组的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：...; 徐匆郑芝波黄皓陈彦黄晓彦罗华建胡珊梁卫驱李昀哲

蝴蝶兰建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的实时荧光定量PCR检测: 2023年; 建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,简称CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,简称ORSV)是蝴蝶兰生产中的主要病毒病害,建立稳定、灵敏的检测体系是进行病毒早期检测和脱毒技术研究的前提。本研究首先对CymMV和ORSV的外壳蛋白(coat protein,简称CP)基因片段进行克隆和序列比对,随后设计特异性引物,分别构建2种病毒的RT-qPCR(real time quantitative PCR,简称RT-qPC)检测体系,并对云南地区20份样品进行检测。研究结果显示,CymMV和ORSV CP基因序列与其他地区分离物中这2种病毒的核苷酸序列相似性分别为97.92%~98.66%和99.12%~99.56%,其CP基因序列具有保守性。CymMV和ORSV在RT-qPCR体系中最低检出浓度分别为30.9、35.0 copies/μL,灵敏度较RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction,简称RT-PCR)提高10倍。利用RT-qPCR体系对20份温室样品进行检测,CymMV阳性率为100%,ORSV阳性率为90%,阳性率均高于RT-PCR检测结果。本研究构建的CymMV和ORSV RT-qPCR检测体系将为蝴蝶兰病毒病早期监测和脱毒种苗的培育奠定基础。; 宋起萱浦艳飞余蓉培瞿素萍瞿素萍吴丽芳杨春梅阮继伟; 关键词：建兰花叶病毒齿兰环斑病毒实时荧光定量PCR 病毒检测

一种同步检测建兰花叶病毒、齿兰环斑病毒和建兰环斑病毒的引物探针及其应用: 本说明书实施例公开了一种同步检测建兰花叶病毒CymMV、齿兰环斑病毒ORSV和建兰环斑病毒CymRSV的引物探针及其检测方法。该方法，通过设计用于建兰花叶病毒CymMV、齿兰环斑病毒ORSV、建兰环斑病毒CymRSV的多...; 王丽花孙爱青吴学尉杨秀梅张艺萍瞿素萍许凤苏艳张丽芳蒋亚莲

齿兰环斑病毒RT-qPCR检测方法的建立被引量：1: 2023年; 【目的】针对齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)建立快速、有效检测方法,对于保障兰花规模化生产有重要意义。【方法】以齿兰环斑病毒为材料,根据NCBI上已登录的齿兰环斑病毒外壳蛋白(coat protein,cp)基因序列分析其序列保守区,使用Primer Premier 5.0设计反转录荧光定量PCR引物及TaqMan荧光探针,建立检测齿兰环斑病毒的一步法RT-qPCR。构建齿兰环斑病毒cp基因克隆质粒,并以该质粒作为标准品进行荧光定量PCR标准曲线测定;以齿兰环斑病毒、建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的病毒RNA为模板进行一步法RT-qPCR特异性检测;以10倍倍比稀释的cp基因质粒为模板进行灵敏性检测;用该法对大田18个兰花样品进行齿兰环斑病毒感染情况监测。【结果】齿兰环斑病毒一步法RT-qPCR检测法仅检出齿兰环斑病毒阳性模板,其余模板检测结果为阴性,说明检测方法具有特异性;该方法能够检测到的齿兰环斑病毒cp基因最低拷贝数为130;大田兰花样品感染齿兰环斑病毒的检出率为100%。【结论】一步法RT-qPCR是一种特异性强、灵敏度高,且适合监测实际生产过程中兰花感染齿兰环斑病毒情况的检测方法。; 徐匆黄皓黄晓彦陈彦李昀哲郑芝波; 关键词：兰花

一种基于数字PCR定量检测齿兰环斑病毒的方法: 本发明公开了一种基于数字PCR定量检测齿兰环斑病毒的方法，包括如下步骤：步骤一：待检样品前处理；步骤二：配置反应液：包括ddPCR Supermix for Probes、上下游引物、探针、模板和ddH<Sub>2</S...; 徐匆郑芝波黄皓黄晓彦李昀哲陈彦罗华建胡珊梁卫驱

一种超低温脱除建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的方法: 本发明公开了一种脱除建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的方法，包括以下步骤：以感染建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的蝴蝶兰组培苗为对象，在体视显微镜下取茎尖；茎尖放入在预培养基进预培养；用加载液加载茎尖；用冰冻保护液处理茎尖；将冰冻保...; 王仁睿李杰

建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)的脱除研究: 2021年; 本研究的主要目的是通过茎尖培养的技术手段来探索蝴蝶兰病毒的脱除问题,为建立工厂化无毒苗培养体系提供技术支撑。长期的工厂化生产,使蝴蝶兰经常感染各种病毒,导致叶片产生枯斑、褪绿、坏死等现象,使花朵畸形变色。其中建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)是最常见的2种病毒。实验取已检测出含有CymMV和ORSV病毒的蝴蝶兰植株花梗,进行诱导丛生芽的培养,对丛生芽进行继代增殖形成组培苗用于脱毒处理。切取组培苗的茎尖顶端分生组织进行培养,茎尖长度在1~6 mm之间,随着茎尖长度的增加,成活率上升,脱毒率明显降低。取2~3 mm组培苗茎尖,经0、10、20、30、40 mg/L的三氮唑核苷浸泡15 min处理和在含有相应浓度的三氮唑核苷培养基中培养30天后,继代培养形成再生植株。实验采用ELISA法对脱毒前的蝴蝶兰植株以及脱毒后的再生植株进行2种病毒检测,通过显色反应判断是否含有病毒病原。实验结果表明,蝴蝶兰脱毒苗的成活率随着三氮唑核苷浓度的增加而降低,当其浓度达到40 mg/L时,茎尖顶端分生组织出现严重的透明和褐变现象,未获得再生植株。而试管再生苗的脱毒率则随着三氮唑核苷浓度的升高而增加。在添加30 mg/L的三氮唑核苷进行化学抑制病毒的处理后,可以比单纯使用茎尖培养的方式脱毒率提高22.3%。; 靖晶李军刘凤军徐君姜红卫李青; 关键词：建兰花叶病毒齿兰环斑病毒化学处理茎尖培养

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