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腐食酪螨主要过敏原Tyr p 35基因克隆、表达及其产物的Western blot分析被引量：2: 2018年; 目的克隆、表达腐食酪螨主要过敏原Tyr p 35的cDNA,检测其表达产物与血清IgE结合活性。方法根据Tyr p 35基因序列(GenBank Accession No.KX060612)设计引物,PCR扩增cDNA,构建原核表达载体pET-28a(+)-Try p 35,转化至E.coli BL21(DE3)plysS,用异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导表达,层析法纯化重组蛋白,Western blot法检测其与血清IgE的结合率。结果克隆Tyr p 35基因全长为1 461bp,编码486个氨基酸,为稳定的亲水性蛋白,含有醛/组氨醇脱氢酶活性位点。将测序正确的表达质粒pET28a(+)-Tyr p 35转化Competent cell BL21(DE3)T1R,经IPTG诱导表达目的蛋白,部分可溶性表达。Western blot检测rTyr p 35血清IgE结合率为82.35%(14/17)。结论成功克隆rTyr p 35基因,其表达产物为主要过敏原之一,纯化后仍具有血清IgE结合活性,为腐食酪螨过敏原标准化,诊断试剂以及脱敏治疗制品的研发奠定了基础。; 周鹰易中权夏伟赵盼雯崔玉宝; 关键词：腐食酪螨基因克隆基因表达蛋白纯化

毒害艾美耳球虫卵囊壁蛋白的SDS-PAGE及Western blot分析: 2017年; 利用聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳技术,分析了毒害艾美耳球虫未孢子化卵囊壁可溶性蛋白。用鼠抗毒害艾美耳球虫重组配子体蛋白rEnGAM56和rEnGAM59多克隆抗体,对卵囊壁可溶性蛋白进行了Western blot分析。结果显示,至少有24条较清晰的电泳条带,其中6条为相对明显的主带,其相对分子质量分别为37 000,35 000,34 000,20 000,14 000和12 000。Western blot分析显示,鼠抗rEnGAM59和rEnGAM56多抗均能识别1条条带,前者的相对分子质量约14 000,后者约30 000。推测30 000和14 000卵囊壁蛋白分别来自毒害艾美耳球虫配子体蛋白EnGAM56和EnGAM59。; 杜彩娟查夕馨黄晓星刘丹丹许金俊陶建平; 关键词：毒害艾美耳球虫 SDS-PAGE WESTERN BLOT

细胞样Western Blot分析技术探讨被引量：5: 2017年; Western Blot分析技术是定性和定量检测蛋白的常用技术,其操作流程已很成熟;但我国很多分子生物学实验室起步较晚,其操作还存在较大困难。针对Western Blot实验效果不理想的情况,该文以动物细胞样品为研究对象,通过反复地摸索和分析,建立了一套细胞样品进行Western Blot分析的技术操作流程。实践表明,本研究结果为本实验室的Western Blot分析解决了操作技术问题,同时也为本实验室进行Western Blot分析建立了技术规范。; 汤加勇赵华; 关键词：蛋白印迹细胞聚丙烯酰胺凝胶电泳

花生AhGPAT9与AhLPAAT4基因的原核表达及Western Blot分析: 2017年; 酰基转移酶基因家族是甘油三酯合成的关键基因。本研究以前期克隆的AhGPAT9与AhLPAAT4基因部分序列设计引物,构建原核表达载体,转化进大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE检测表明,重组蛋白在37℃,5h诱导条件下获得高效表达。重组蛋白经纯化和富集,对新西兰兔进行4次免疫,纯化获得的多克隆抗血清,通过间接ELISA检测,表明获得了效价比较高的多克隆抗体。通过对重组蛋白纯化后样品进行Western Blot分析,结果显示在纯化样品相应位置有明显信号,表明所制备的抗体具有很高灵敏度和特异性。并采用制备的抗体对AhGPAT9与AhLPAAT4蛋白在花生不同组织及种子不同发育时期的表达进行了Western Blot分析。为深入研究AhGPAT9与AhLPAAT4基因的功能提供了科学数据。; 杨珍郝翠翠李昊远焦坤王通王冕陈娜陈明娜潘丽娟姜焕焕禹山林迟晓元; 关键词：花生原核表达多克隆抗体

茶树脱水素基因的克隆与非生物胁迫下蛋白的Western-blot分析: 茶树是一种多年生的木本植物,在生长发育的过程中受到多种逆境因素的影响。为了提高茶树的抗逆性,培育优质高产的茶树品种,一般都采用优化栽培措施,改善栽培条件等,但是品种的抗逆遗传特性才是起决定作用的因素。研究茶树抗逆机理,发...; 舒锡婷; 关键词：茶树脱水素基因克隆蛋白质提取蛋白质印迹法; 文献传递

茶树叶片类脱水素蛋白的Western-blot分析被引量：3: 2015年; 为了解茶树脱水素种类与功能,采用Western-blot技术,研究了不同季节及越冬过程中茶树叶片脱水素蛋白家族的表达模式。结果显示：（1）茶树叶片总蛋白提取采用酚-甲醇/醋酸铵沉淀法,用时短、蛋白浓度高、SDSPAGE电泳条带清晰,背景干净,满足茶树Western-blot技术要求。（2）在不同季节及越冬期中发现14～95kD共9种不同分子量的茶树类脱水素蛋白,其中95、65、48、37、34和14kD等6种蛋白表达量较为稳定,季节与越冬期变化不明显;58kD脱水素仅在冬季表达,越冬期不断上升,2月份增加到最高,表达丰度高;28kD脱水素蛋白在冬季表达量高,越冬期与茶树抗寒力变化规律一致;21kD脱水素在夏季和越冬期后期有较高的表达。研究表明,这3种脱水素可能在茶树抗逆中起着重要作用。; 舒锡婷欧阳娜江昌俊邓威威李叶云; 关键词：茶树脱水素蛋白质提取蛋白质印迹法

类猪圆环病毒 P1转录的 Northern Blot 分析被引量：2: 2014年; 为鉴定类猪圆环病毒P1的转录本,采用地高辛标记的RNA探针,通过Northern Blot方法,对转染PK15细胞的类猪圆环病毒P1进行了RNA转录分析。结果表明,Northern杂交可检测到2个RNA转录本,包括正链上ORF3的RNA和负链上ORF1的RNA。同时,ORF3 RNA表达时间比ORF1的短,且丰度也大大低于ORF1。类猪圆环病毒P1至少存在ORF1和ORF3 2个转录本。; 温立斌王凤芝何孔旺倪艳秀张雪寒李彬王小敏郭容利周俊明俞正玉茅爱华吕立新解建平; 关键词：转录分析 NORTHERN BLOT

豆状带绦虫抗原的SDS-PAGE及Western-blot分析被引量：1: 2014年; 为筛选豆状囊尾蚴的特异性抗原,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹（Western-blot）技术对自然感染的豆状带绦虫成虫、幼虫的头节、囊壁可溶性抗原及囊液抗原进行了分析.结果表明：从豆状带绦虫不同发育阶段的虫体中分离出5~12条主要蛋白区带,分子质量为25~114 ku.以第7周自然感染家兔血清对7种虫体抗原进行的Western-blot分析显示,7种虫体抗原在42、57、63 ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别.以家兔阳性血清中提取出来的 IgG免疫球蛋白对 7种虫体抗原进行的 Western-blot分析显示,7种虫体抗原在63 ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别.说明63 ku蛋白带可作为预防兔豆状囊尾蚴病的候选疫苗抗原.试验初步阐明了豆状带绦虫 7种不同抗原的部分生化特性,为对该抗原的进一步深入研究奠定了基础.; 张倩李作磊尚清炎范希萍苟惠天韩进欢韩乐乐孙晓林; 关键词：免疫印迹抗原

热带果树基因组DNA提取方法的改良及Southern blot分析被引量：2: 2012年; 以香蕉、番木瓜、龙眼为代表材料,建立一套适合热带果树基因组DNA提取的方法——改良CTAB法。将提取各基因组DNA经限制性内切酶完全消化后,分别以香蕉內源乙烯受体基因(AF113748)、番木瓜八氢番茄红素脱氢酶基因PDS(DQ779922)、龙眼开花相关基因LEAFY(ADQ160214)为探针进行Southern blot杂交,3种植物的基因组DNA适宜上样量的60μg,杂交条带清晰,背景弱,说明采用改良CTAB法,能保证基因组DNA提取的浓度和纯度,符合Southern blot的要求。; 彭军曾凡云龙海波黄俊生郭建荣; 关键词：热带果树 DNA提取 CTAB BLOT

旋毛虫成虫表面抗原的SDS-PAGE和Western blot分析被引量：1: 2010年; 目的研究大理猪源旋毛虫成虫表面抗原(surface antigen,SA)的蛋白组分,分析其抗原性。方法采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对旋毛虫成虫SA蛋白成分进行分析,并采用蛋白印迹(Western blot)分析其抗原性。结果旋毛虫成虫SA经SDS-PAGE,电泳显示4条主要蛋白条带,分子质量单位分别为50、48、40和34ku;经Western blot检测,上述4个蛋白组分均能被大鼠抗旋毛虫血清识别。结论旋毛虫成虫SA中主要含有50、48、40和34ku等4个蛋白组分,均具有抗原性。; 马鸣旺申丽洁董明治; 关键词：旋毛虫成虫表面抗原蛋白印迹

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