搜索到71篇“ D-海因酶“的相关文章
- 一种具有环酰亚胺水解酶活性D-海因酶的工程菌及其构建、培养方法和应用
- 本发明公开一种具有环酰亚胺水解酶活性D‑海因酶的工程菌及其构建、培养方法和应用。本发明首先提供一种工程菌，该工程菌可以表达一种具有环酰亚胺水解酶活性的D‑海因酶；其构建方法是将该酶基因克隆到质粒pET‑20b，得到重组质...
- 钮利喜王丽俊石亚伟
- 文献传递
- 来源于Bacillus sp.AR9 D-海因酶半理性设计的研究被引量：3
- 2021年
- D-对羟基苯甘氨酸是一种重要的精细化工品,在制药行业具有广泛的应用前景。酶法是生产D-对羟基苯甘氨酸的主要手段,但由于缺乏高催化效率的酶而限制了D-对羟基苯甘氨酸的生产。为了提高来自Bacillus sp.AR9的D-海因酶(HYD)的催化效率,进而提高D-对羟基苯甘氨酸的产量,对HYD的底物结合通道进行分析,选取底物通道瓶颈处的氨基酸进行饱和突变和筛选,以提高HYD的催化效率。结果显示,突变体F159S、F159A和F65V的活性相较于野生型HYD分别提高了51%、40%和17%,通过对突变体F65V、F159S和双位点突变F65V/F159S的酶动力学研究发现,突变体的K_(m)值基本与野生型HYD相似,而k_(cat)是野生型HYD的1.3、1.9和2.0倍,最终双位点突变F65V/F159S的催化效率k _(cat)/K_(m)是野生型HYD的2.4倍。高催化效率突变体的获得,以及对突变体动力学的分析,对酶法制备D-对羟基苯甘氨酸具有重要的研究意义和应用价值。
- 樊帅刘坤金媛媛杨兆勇
- 关键词：D-海因酶酶动力学
- 一种具有环酰亚胺水解酶活性D-海因酶的工程菌及其构建、培养方法和应用
- 本发明公开一种具有环酰亚胺水解酶活性D‑海因酶的工程菌及其构建、培养方法和应用。本发明首先提供一种工程菌，该工程菌可以表达一种具有环酰亚胺水解酶活性的D‑海因酶；其构建方法是将该酶基因克隆到质粒pET‑20b，得到重组质...
- 钮利喜王丽俊石亚伟
- 文献传递
- 异源D-海因酶和N-氨甲酰水解酶共表达重组枯草芽孢杆菌的构建被引量：3
- 2017年
- 【目的】构建异源D-海因酶和N-氨甲酰水解酶共表达的重组枯草芽孢杆菌,探讨其作为全细胞催化剂合成D-对羟基苯甘氨酸的可行性。【方法】采用P_(aco)表达盒表达D-海因酶基因hyd或sd1,采用P_(AE)表达盒表达N-氨甲酰水解酶基因adc。分别以质粒pHP13和pUB110为载体,构建D-海因酶和N-氨甲酰水解酶共表达质粒pHCS、pHCY和pUCS。在受体菌中整合表达了acoR和sigL基因,敲除了skf和sdp基因。将共表达质粒分别转化不同的受体菌,通过测定全细胞催化活性,表征D-海因酶和N-氨甲酰水解酶共表达的效果。【结果】带有质粒pHCY和pHCS的重组菌,全细胞催化活性分别为0.21 U/mL和0.31 U/mL。整合表达acoR和sigL基因以及高拷贝质粒pUCS,使全细胞催化活性达到1.0 U/mL。【结论】异源D-海因酶和N-氨甲酰水解酶在枯草芽孢杆菌中能够正确表达。基因拷贝数、acoR和sigL基因表达水平,及skf和sdp基因缺失对重组菌的催化活性具有显著影响。
- 王亚盟班睿刘露申雨
- 关键词：枯草芽孢杆菌D-海因酶D-对羟基苯甘氨酸
- 产D-海因酶微生物的筛选及其催化特性被引量：1
- 2016年
- 为获得高活性和立体选择性海因酶生产菌株,首先采用氨基酸关环法合成了数种5'-单取代海因衍生物及N-氨甲酰-氨基酸,建立了相关液相色谱检测方法。然后以实验室保藏的野生菌株出发,利用底物诱导的方法筛选到6株具有D-海因酶活性的野生菌,其中荧光假单胞菌产生的D-海因酶具有较好的底物谱,较高的活性和立体选择性。经优化后,其最适产酶温度为30℃,培养时间为12 h,发酵活力达到92.1 U/L。该菌催化D-海因水解的最适反应温度为60℃,pH 8.5。在50 m L体系中,利用0.25 g菌体(干重)可对映选择性水解20 mmol/L对羟基苯海因底物,反应3 h转化率达到98%。
- 李磊许国超韩瑞枝倪晔
- 关键词：D-海因酶D-氨基酸荧光假单胞菌
- 异源D-海因酶和N-氨甲酰水解酶共表达重组枯草芽孢杆菌的构建
- D-对羟基苯甘氨酸是半合成β-内酰胺类抗生素的重要原料，海因酶法是普遍采用的D-对羟基苯甘氨酸工业生产方法。海因酶法就是采用D-海因酶和N-氨甲酰水解酶催化D, L-对羟基苯海因，转化为D-对羟基苯甘氨酸的生物化学方法。...
- 王亚盟
- 关键词：枯草芽孢杆菌D-海因酶D-对羟基苯甘氨酸重组菌
- D-海因酶固定化的研究及展望
- 2013年
- 酶的固定化（enzyme immobilization）是将水溶性酶经物理或化学方法处理后，成为不溶于水但具有酶活性的一种衍生物，在催化反应中以固相状态作用于底物。固定化酶因具有载体与酶结合的可逆及重复性、粗酶液与载体结合的直接性以及因恰当的结合方式而产生的酶活性位点的充分暴露等特质而在生物催化领域被广泛应用。
- 李海凤曾红宇许岗杨兆勇
- 关键词：D-海因酶固定化酶化学方法生物催化活性位点
- D-海因酶和水解酶在中华根瘤菌中的增强表达
- 2013年
- 以质粒pBBR1MCS-5为载体,将D-Case和D-Hase基因以多顺反子形式置于其lac启动子控制下,转入中华根瘤菌,经30℃发酵培养24 h,在不添加诱导剂的情况下,总酶活比野生菌提高了2倍.为减少葡萄糖效应,将lac启动子替换成lacUV5,对核糖体结合位点进行优化,工程菌的酶活比野生菌提高了4倍,达0.5 U/mL.
- 崔明鑫孙家佳李强
- 关键词：D-海因酶D-对羟基苯甘氨酸中华根瘤菌
- 豆类来源D-海因酶的提取及特性研究被引量：3
- 2010年
- 首次对几种豆类来源的二氢嘧啶酶进行了提取和纯化,并对其D-海因酶酶活进行了测定,筛选出具有D-海因酶酶活的三种豆子,其中红小豆来源的D-海因酶酶活最高,对影响酶活的相关因素进行了研究。结果表明,在底物为0.8%的对羟基苯海因、pH值为8.0、反应温度为65℃的最佳酶促反应条件下,D-海因酶活力最高,达8.348U.mL-1。
- 董妍玲郑月潘学武
- 关键词：D-海因酶红小豆
- D-海因酶产生菌的筛选、性质及固定化研究
- 本文以DL-对羟基苯海因/(DL-p-HPH/)为唯一氮源,从自然资源中进行D-海因酶产生菌株的筛选。利用双层平板法和微孔快速筛选法,共筛得三株有活力的菌株,对其中活力较好的一株进行了深入研究。
对上述菌株进...
- 孙婧
- 关键词：D-海因酶D-对羟基苯甘氨酸产碱杆菌属固定化
- 文献传递
