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景东湍蛙抗菌肽jindongenin-1d的分析和活性测定 被引量:1 2017年 新型抗菌肽研究有助于解决细菌对抗生素的耐药性问题。本研究用SMART技术构建了景东湍蛙Amolops jingdongensis皮肤的全长cDNA文库。通过单克隆 和测序获得一个抗菌肽cDNA序列,序列比对结果表明其属于jindongenin-1家族,命名为jindongenin-1d。其cDNA序列全长321bp,编码含66个氨基酸残基的多肽。该多肽包括1个信号肽和1个前肽序列。成熟jindongenin-1d多肽包含24个氨基酸残基,理论分子量为2 709.38,等电点为9.24。对人工合成的jindongenin-1d蛋白进行了抗菌和溶血活性分析,结果表明jindongenin-1d对所选的革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和真菌均有显著抑制作用,同时有弱溶血活性。本研究结果有助于进一步了解两栖动物皮肤分泌物活性物质的多态性和新型抗感染药物的设计。 陶双燕 邱雨莹 杨黎江 杨叶秀 刘子超关键词:抗菌肽 EDNA克隆 薤白EPSP合成酶基因cDNA的克隆 与原核表达分析 被引量:3 2009年 【目的】揭示棉田杂草薤白(Allium macrostemon Bunge)抗草甘膦的分子机理,开发利用其草甘膦抗性特性。【方法】运用RT-PCR结合RACE技术,分离克隆 了薤白中草甘膦作用的靶酶EPSP合成酶(EPSPs)基因cDNA,并将其构建成原核表达载体在大肠杆菌中诱导表达和鉴定其抗性。【结果】薤白EPSP合成酶基因cDNA序列全长1821bp,编码一段522个氨基酸的推导蛋白质。经BLAST及蛋白质结构预测,蛋白具有EPSPs的特征序列,并与已报道的EPSPs序列有高同源性,确认克隆 的cDNA序列即是薤白EPSPs基因序列,命名为EPSPsA。将该cDNA与原核表达载体pRSET-A重组后,构建成重组表达质粒pRSET-A-EPSPsA,并转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导了目标蛋白的高效表达。经SDS-PAGE电泳分析显示,该蛋白的分子量约为55kD,与预期大小一致。通过草甘膦对表达细菌处理,表达菌对草甘膦的抗性显著提高。【结论】薤白EPSPs对草甘膦具有一定抗性。 周晓卉 黄丽华 蒋向 李育强 张学文关键词:薤白 EDNA克隆 原核表达 百合ACC氧化酶基因全长cDNA的克隆 及序列分析 被引量:12 2008年 以亚洲百合‘Polyanna’(Lilium spp.)花瓣为材料,根据已报道的百合ACC氧化酶基因片段设计1对末端扩增特异引物,采用RACE方法,获得百合ACC氧化酶基因的全长eDNA(GenBank登录号为EU296623)。该eDNA全长1152bp,具有一个954bp的开放阅读框,编码318个氨基酸。Blast搜索结果显示,百合ACC氧化酶基因核苷酸序列与其它植物已报道的ACC氧化酶基因具有71%~82%的相似性,氨基酸序列有70%~87%的相似性,聚类分析表明,与单子叶植物百合科郁金香首先聚类,其次与双子叶植物聚类,最后与单子叶禾本科和兰科植物聚类。 刘鲜艳 刘雅莉 王跃进 张宗勤关键词:ACC氧化酶 百合 基因 Molecular Cloning and Expression Analysis of FTZ-F1 in the Half-smooth Tongue-sole, Cynoglossus semilaevis 被引量:10 2008年 To investigate the expression characteristics of sex related gene of FTZ-F 1 in the half-smooth tongue-sole (Cynoglossus semilaevis), the homologue FTZ-F1 (hsFTZ-F1) full-length cDNA was isolated from the testis by homologous cloning, and the cDNA included the open reading frame and a 66bp 5'-UTR, along with a 1619bp 3'-UTR, encoding a predicted 485 amino acid protein. Sequence, tissue distribution and phylogenic analyses of the FTZ-F1 showed that the hsFTZ-F1 belonged to SF-1/Ad4BP group. The hsFTZ-F1 transcripts were highly abundant in the gonads, kidneys, brain and head-kidneys, but weakly in other tissues. However, the expression level in the brain and head-kidney of female was highly abundant than in the male. The hsFTZ-F1 expression was highly abundant in the embryo than in the larvae, which suggested that the hsFTZ-F1 may be involved in the organogenesis in the tongue sole. 邓思平 陈松林 刘本伟黄瓜花叶病毒卫星RNA XJs1侵染性cDNA克隆 构建及其生物学功能初步研究 2006年 利用RT_PCR的方法,获得了黄瓜花叶病毒卫星RNA XJs1的全长侵染性cDNA克隆 pMSC20。序列分析显示,XJs1全长384nt(GenBank登录号:DQ070748),比较XJs1与具有代表性的CMV卫星RNA的序列结构表明,在XJs1核苷酸序列的325nt^350nt间,具有典型的坏死型卫星RNA保守序列。通过体外转录,将XJs1与不含卫星RNA的辅助病毒分离物CMV_AH组合接种普通烟和心叶烟并进行检测。初步研究结果表明,XJs1为一致弱卫星RNA。 席德慧 林宏辉 向本春关键词:黄瓜花叶病毒 卫星RNA 生物学功能 桐花树多酚氧化酶同源基因片段的克隆 及序列分析 2009年 以桐花树(Aegiceras corniculatum(L.)Blanco)叶为材料,采用同源PCR克隆 策略,扩增桐花树多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase,PPO)铜结合区之间的cDNA序列。该序列长度597 bp(Genbank accessionNo.GQ404509),编码了一段由199个氨基酸残基组成的多酚氧化酶保守区片段。桐花树PPO保守区片段具有PPO铜结合区A(CuA)的特征信号序列Hnswl.FFp FHRyyLyff E。同源比对表明,该序列与GenBank上其他已有的植物多酚氧化酶氨基酸序列的同源性都在65%以上。 王芳 董乐 戴聪杰 林娈 欧巧慧关键词:多酚氧化酶 基因克隆 甘草水通道蛋白基因(GuPIP1)RNAi双元表达载体的构建及鉴定 2009年 植物水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)是细胞膜上选择性高效转运水分子的特异蛋白孔道.本文根据植物中hpRNA(hairpin RNA)的原理,以甘草质膜水通道蛋白基因GuPIP1为靶基因,在GuPIP1-cDNA序列中选择378bp作为构建RNAi的序列,经三次亚克隆 ,最后形成含GuPIP1-hpRNAi表达盒的双元表达载体,并转入农杆菌EHA105. 王芳 董乐 戴聪杰关键词:甘草 水通道蛋白 RNAI 双元表达载体 福建插田泡果肉营养成分分析 被引量:8 2009年 [目的]探究福建插田泡果肉营养成分。[方法]以福建产插田泡果实为原料,对其总糖、果胶质、脂肪、酸度、粗蛋白、氨基酸等一般营养成分和超氧化物歧化酶(SOD)的含量进行分析。[结果]插田泡果肉鲜样维生素C含量丰富,SOD含量高达292.34μg/g(FW),另外,还含有丰富的糖类、蛋白质、有机酸、粗脂肪等营养成分。插田泡果实氨基酸含量为11.257 mg/g(DW),至少含有18种氨基酸,包括8种人体必需氨基酸。果肉鲜样中矿质元素含量丰富。[结论]插田泡果实有较高的营养价值,具有一定的开发利用潜力。 王芳关键词:果肉 营养成分 蓬蘽叶中茶多酚的微波提取 被引量:3 2009年 以蓬蘽叶为原料,采用乙醇作为提取溶剂,通过正交试验,探讨在微波辐射下微波功率、溶剂浓度、料液比、提取时间和提取级数对茶多酚提取率的影响,获得从蓬蘽叶中提取茶多酚的最佳工艺条件。结果表明,微波辅助法从蓬蘽叶中提取茶多酚的适宜工艺条件为:蓬蘽叶在40%乙醇溶液中料液比(W∶V)1∶10,提取功率320W,提取时间60s,微波浸提2次,此条件下茶多酚提取率为88.78%。 王芳 董乐 林娈关键词:茶多酚 微波辐射 GuPIP1抗体的制备及其在GuPIP1组织定位上的应用 2009年 利用PCR技术,从甘草质膜水通道蛋白1(plasma membrane intrinsic protein1 from Glycyrrhiza uralensis Fisch,GuPIP1)的cDNA中扩增其保守区段(420bp),并将其构入pGEX-KG。酶切、测序分析表明,重组质粒pGEX-GuPIP1结构正确。IPTG诱导表达分子量约40kDa融合蛋白GST-GuPIP1,该蛋白质主要以非包涵体的形式存在于大肠杆菌中。诱导表达后的菌体超声裂解液经谷胱甘肽亲和层析纯化得到高纯度的GST-GuPIP1,以纯化的融合蛋白为抗原免疫兔子制备甘草质膜水通道蛋白的抗体。抗血清经过纯化后以酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和Western印迹检测抗体的效价和特异性。结果表明,抗体具有高的效价和特异性。免疫组织细胞化学定位表明,GuPIP1在胚根根尖的表皮细胞和根冠细胞中强烈表达。 王芳 董乐 袁建军关键词:水通道蛋白 抗体 原核表达
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