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稳定表达Cas9-gfp融合蛋白的二化性家蚕品种的育种方法及应用: 本发明公开了稳定表达Cas9‑gfp融合蛋白的二化性家蚕品种的育种方法及应用，所述方法以稳定表达Cas9‑gfp融合蛋白的多化性家蚕品种Nistari‑Cas9gfp为母本，二化性家蚕为父本，杂交获得F1代；F1代回交二...; 朱娟李倩雯张懿中沈兴家陈安利

NCre/CCre系统及Cre-GFP融合蛋白的构建方法与应用: 本发明公开了NCre/CCre系统及Cre‑GFP融合蛋白的构建方法与应用。本发明公开的NCre/CCre系统为由序列15所示的Spy‑GNCreaa59与序列17所示的Spy‑GCCre...; 周旭宇马洁魏训东张建华

NCre/CCre系统及Cre-GFP融合蛋白的构建方法与应用: 本发明公开了NCre/CCre系统及Cre‑GFP融合蛋白的构建方法与应用。本发明公开的NCre/CCre系统为由序列15所示的Spy‑GNCreaa59与序列17所示的Spy‑GCCre...; 周旭宇马洁魏训东张建华

超电荷GFP融合蛋白递送质粒DNA的体内外实验研究: 随着生物技术的发展，生物大分子如质粒DNA、siRNA、多肽和蛋白质被用于治疗多种疾病。但是由于细胞膜的天然屏障作用，生物大分子很难进入细胞或体内发挥作用。如何使外源功能基因或蛋白质等治疗材料高效高速的穿透并进入细胞内发...; 王利丹; 关键词：药物载体生物大分子

一种基于EPSP合酶与GFP融合蛋白检测草甘膦的快速检测方法: 本发明公开了一种基于EPSP合酶与GFP融合蛋白检测草甘膦的快速检测方法，包括克隆的草甘膦主要靶点EPSP合酶作为草甘膦的受体蛋白；将受体蛋白与绿色荧光蛋白进行融合，构建了EPSPS‑GFP这一既含有草甘膦结合部位，又带...; 王淼王静佘永新; 文献传递

一种基于EPSP合酶与GFP融合蛋白检测草甘膦的快速检测方法: 本发明公开了一种基于EPSP合酶与GFP融合蛋白检测草甘膦的快速检测方法，包括克隆的草甘膦主要靶点EPSP合酶作为草甘膦的受体蛋白；将受体蛋白与绿色荧光蛋白进行融合，构建了EPSPS‑GFP这一既含有草甘膦结合部位，又带...; 王淼王静佘永新; 文献传递

金黄色葡萄球菌LukS-PV-GFP融合蛋白的载体构建及表达纯化被引量：3: 2019年; 目的构建LukS-PV与GFP融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中表达纯化并鉴定。方法煮沸法提取金黄色葡萄球菌铜23的DNA作为模板,PCR扩增得到LukS-PV基因产物,经胶回收后与pMDN8T质粒连接过夜后转化至感受态菌DH5$中。提取质粒经PCR、测序鉴定无误,双酶切后连接到peW8a和6HTFP载体上,先转化至感受态菌DH5$再转化到BL21宿主菌中。对LukS-PV-GFP表达产物使用SDS-PAGE电泳分析,并取诱导前和IPTG诱导5 h菌液涂片置于荧光显微镜下观察。使用Western blot对诱导前及纯化后蛋白进行鉴定。结果成功构建了LukS-PV与GFP融合蛋白表达载体,诱导纯化后获得较高浓度和纯度的重组融合蛋白,且诱导前无荧光,诱导后宿主菌BL21可在荧光显微镜下显示绿色荧光。Western blot结果显示纯化后蛋白出现特异性条带&结论成功地纯化得到了具有生物学活性的LukS-PV-GFP重组融合蛋白,为进一步研究LukS-PV的功能定位和相互作用奠定了基础.; 汪自然常文娇戴媛媛马筱玲; 关键词：杀白细胞素绿色荧光蛋白原核表达

金黄色葡萄球菌类肠毒素K与GFP融合蛋白工程菌的构建及其表达蛋白生物学活性分析: 2018年; 目的构建携带金黄色葡萄球菌类肠毒素K(staphylococcal enterotoxin-likeK,SElK)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)融合基因的工程菌,并对SElK-GFP融合蛋白进行初步生物学活性分析。方法利用PCR和OverlapPCR克隆获得SElK-GFP融合基因,并插入pET28a表达载体中,通过菌落PCR,质粒双酶切及测序验证后,将构建成功的pET28a-SElK-GFP质粒转化到E.coliBL21菌株中进行诱导表达,通过Ni+亲和磁珠试剂盒纯化获得SElK-GFP融合蛋白;并利用MTT法检测SElK-GFP刺激小鼠脾淋巴细胞增殖;ELISA法检测SElK-GFP尾静脉注射后小鼠血清中细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌水平。结果成功构建能够表达SElK-GFP融合蛋白的工程菌,纯化获得高纯度的SElK-GFP融合蛋白可观测到明显的绿色荧光,融合蛋白生物学活性分析表明,SElK-GFP能够呈剂量依赖性地显著刺激小鼠脾淋巴细胞增殖;同时ELISA检测发现SElK-GFP可显著增加小鼠血清中细胞因子IL-2及IFN-γ的分泌水平。结论成功克隆、表达及纯化获得高纯度的SElK-GFP融合蛋白,其不仅保留了SElK的超抗原活性,同时兼具GFP绿色荧光的可视性,为深入研究SElK生物学活性提供有利工具。; 何亚南孙钰椋任雅坤梁盛英杨芬刘彦礼林俊堂; 关键词：超抗原

内源表达dXPR1-GFP融合蛋白的果蝇品系的构建: 原发型家族性大脑钙化(Primary Familial Brian Calcification,PFBC)是一种家族性遗传的常染色体神经变性病,以两侧对称性基底节钙化为最常见特征,故又称之为特发性基底节钙化(Idiopa...; 李云鹏; 关键词：PFBC 黑腹果蝇; 文献传递

人源KOR-GFP融合蛋白在昆虫细胞中的表达和活性鉴定: 2017年; 通过PCR方法扩增人源kappa型阿片受体基因(hKOR)和GFP基因,然后采用重叠延伸PCR(SOEPCR)将hKOR与GFP基因连接,并将融合基因通过无缝克隆技术克隆入pFastBac1载体,将筛选的阳性重组载体转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10αBac感受态细胞获得重组杆粒Bacmid-hKOR-GFP。采用重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,收获上清作为重组病毒P1代,采用流式细胞术检测病毒感染效率;采用Western blot鉴定hKOR-GFP的表达情况;采用cAMP酶联免疫方法检测hKOR-GFP的功能活性。结果表明,采用感染复数(MOI)值为2,感染后72 h,hKOR-GFP在Sf9昆虫细胞中可达到高效表达;Western blot实验表明hKOR-GFP在昆虫细胞中获得正确表达;cAMP酶联免疫实验结果证明在激动剂存在下,Sf9细胞内cAMP含量出现剂量依赖性下降,表明hKOR-GFP具有生物活性。在昆虫细胞中高效表达具有功能活性的hKOR-GFP可为建立非成瘾性镇痛药物筛选技术平台奠定基础。; 周国超石童陈学军王陈李丽琴张瑞华鹿晓晶; 关键词：杆状病毒表达系统绿色荧光蛋白转染效率

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