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- CircCCND1调节miR-340-5p/TGIF1轴对H446肺癌细胞恶性生物学行为的影响
- 2024年
- 背景与目的 肺癌是常见的肺部恶性肿瘤,探究肺癌发生发展的分子机制是当前研究的热点。环状RNA细胞周期蛋白D1 (circular RNA Cyclin D1,CircCCND1)在肺癌中高表达,可能是治疗肺癌的潜在靶点。本研究旨在探讨CircCCND1调节miR-340-5p/转化生长因子β诱导因子同源框1 (transforming growth factor β-induced factor homeobox 1,TGIF1)轴对肺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 检测人正常肺上皮细胞BEAS-2B及人肺癌H446细胞中CircCCND1、miR-340-5p及TGIF1 mRNA表达。将体外培养的H446细胞分为对照组、CircCCND1 siRNA组、miR-340-5p mimics组、阴性对照组、CircCCND1 siRNA+miR-340-5p inhibitor组,检测细胞增殖、线粒体膜电位、凋亡、迁移和侵袭情况,以及各组细胞CircCCND1、miR-340-5p、TGIF1 mRNA、BCL2相关X蛋白(BCL2-associated X protein,Bax)、剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶3 (cleaved Caspase-3)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、TGIF1蛋白表达,并验证miR-340-5p与CircCCND1、TGIF1的靶向关系。结果 与BEAS-2B细胞相比,H446细胞CircCCND1、TGIF1 mRNA升高,miR-340-5p表达降低(P<0.05)。敲低CircCCND1或上调miR-340-5p表达可抑制H446细胞增殖、迁移、侵袭,降低TGIF1 mRNA和TGIF1蛋白表达,促进细胞凋亡;下调miR-340-5p可拮抗敲低CircCCND1对H446肺癌细胞恶性生物学行为的抑制作用。CircCCND1可能靶向下调miR-340-5p,miR-340-5p可能靶向下调TGIF1。结论 敲低CircCCND1可抑制肺癌H446细胞恶性行为,其作用可能是通过调控miR-340-5p/TGIF1轴实现的。
- 董怡朱翠敏柳新赵继伟李青山
- 关键词:肺肿瘤恶性生物学行为
- 益生菌的筛选鉴定、益生特性及其促H446 SCLC细胞凋亡机制研究
- 杨晓凤
- 基于蛋白组学分析旋毛虫原肌球蛋白过表达对小细胞肺癌NCI-H446细胞蛋白组分的影响被引量:1
- 2023年
- 目的研究旋毛虫原肌球蛋白(tropomyosin,Tm)过表达对人小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)NCI-H446细胞蛋白组分的影响。方法本研究通过串联质谱标记(Tandem mass tags,TMT)技术结合生物信息学分析旋毛虫Tm过表达对NCI-H446细胞蛋白组分的影响。比较旋毛虫Tm(Tm-pcDNA3.1)过表达和转染空载体(pcDNA3.1)48 h后NCI-H446细胞的蛋白组分,利用Uniprot数据库检索差异表达蛋白(Differentially expressed protein,DEPs)并对所得DEPs进行基因本体论(GO)富集分析。从STRING数据库获得DEPs相互作用数据,利用Cytoscape 3.9.0软件构建蛋白互作网络并筛选中心节点蛋白。通过Western blot对随机选取的中心节点蛋白NDRG1进行验证。结果旋毛虫Tm转染NCI-H446细胞48 h后,筛选出DEPs 70个,其中34个上调,36个下调;GO功能富集分析显示,DEPs主要涉及转录后的调控、免疫应答的调节等生物学功能;分析蛋白互作网络获得5个下调的中心节点蛋白:细胞周期蛋白G相关激酶(GAK)、组蛋白H3-7(H3-7)、辛普勒金Symplekin(SYMPK)、N-myc下游调节因子1(NDRG1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶N2(PKN2);Westrne blot结果显示旋毛虫Tm降低NCI-H446细胞中NDRG1的表达。结论旋毛虫TM能引起NCI-H446细胞蛋白组分的显著变化;旋毛虫Tm可能通过下调NCI-H446细胞中GAK、H3-7、SYMPK、NDRG1、PKN2的表达发挥其生物学作用。
- 王灏轩朱莹莹程露阳郭文平杜娈英
- 关键词:旋毛虫原肌球蛋白蛋白组学
- 鳖甲水提物和醇提物对人肺癌H446及H460细胞株的体外抑制作用研究被引量:1
- 2023年
- 为进一步探讨鳖甲水提物和醇提物对人小细胞肺癌H446及人大细胞肺癌H460细胞株的体外抑制作用。通过细胞增殖实验,研究鳖甲水提物和醇提物对人小细胞肺癌H446细胞株及大细胞肺癌H460细胞株的抑制效果。首先制备鳖甲水提物与醇提物冻干粉,其次体外培养H446、H460和BEAS-2B细胞株,将其分为空白对照组及药物组(H446细胞株:2、4、8、16、32 mg/mL;H460细胞株:8、16、32、64 mg/mL;BEAS-2B细胞株:2、4、8、16、32、64 mg/mL),最后计算鳖甲水提物和醇提物对肺癌细胞H446及H460细胞株以及对肺上皮细胞的细胞存活率。研究表明:鳖甲水提物随着浓度的提高,对人小细胞肺癌H446细胞株及人大细胞肺癌H460细胞株的抑制作用逐渐增强,其在32 mg/mL时对H446细胞株的抑制效果最佳,在64 mg/mL时对H460细胞株的抑制作用最好;鳖甲醇提物随着浓度的增加,对人小细胞肺癌H446细胞株及人大细胞肺癌H460细胞株的增殖抑制作用也逐渐增强,且对H446细胞株的最佳抑制浓度在32 mg/mL,对H460细胞株的最适抑制浓度为64 mg/mL。结果表明,鳖甲水提物和醇提物对人小细胞肺癌H446细胞株及人大细胞肺癌H460细胞株均具有抑制作用,并且随着提取物浓度的升高,对两株细胞的抑制效果也更加明显。结合鳖甲提取物对正常肺上皮细胞的影响,鳖甲水提物较鳖甲醇提物抑制效果更好。
- 柳金可周珊珊吴神佳王荣
- 关键词:大细胞肺癌鳖甲提取物细胞存活率
- 旋毛虫重组蛋白原肌球蛋白对小细胞肺癌H446细胞的影响及分子机制研究
- 本文主要从以下几个部分展开论述: 第一部分 旋毛虫重组蛋白原肌球蛋白对小细胞肺癌H446细胞恶性表型、周期及凋亡的影响 目的: 通过构建TM真核表达质粒,观察TM重组质粒作用于SCLC H446细胞对其恶性表型、周...
- 朱莹莹
- 关键词:重组蛋白旋毛虫原肌球蛋白小细胞肺癌
- 黄芩素联合5-FU调控ROS/MAPK信号通路对H446肺癌细胞生物学行为的作用研究
- 2022年
- 目的探索黄芩素(baicalein,BAI)联合5-FU对小细胞肺癌H466细胞增殖、凋亡及迁移的影响,并进一步探索其增敏机制。方法体外培养H466肺癌细胞,并分成对照组、BAI组、5-FU组和联合处理组;利用CCK-8实验检测各组细胞存活率;利用流式细胞术检测细胞凋亡情况和ROS水平变化情况;利用Western blot实验检测MAPK通路蛋白表达量变化情况。结果CCK-8结果中,4组细胞处理24 h后存活率依次为114.3%±2.8%,79.8%±3.4%,57.6%±1.8%,40.3%±2.7%,与其他3组相比,联合处理组对H446细胞的增殖抑制效果更强,差异有统计学意义(P<0.001);联合处理组凋亡的H446细胞比例为49.2%±3.8%,与5-FU单独处理组33.9%±4.3%相比,差异有统计学意义(P<0.001);联合处理组对H446细胞迁移的抑制率高于5-FU单独处理组,差异有统计学意义(P<0.001);黄芩素和5-FU联合处理能上调H446细胞中的ROS水平,进而调节MAPK信号通路。结论黄芩素与5-FU联合使用能通过上调肺癌H446细胞中的ROS水平,激活JNK及p38信号通路,抑制ERK信号通路,进一步增强5-FU对H446细胞的增殖抑制、诱导凋亡及抑制迁移作用,为黄芩素在小细胞肺癌中的应用提供了一定的实验依据。
- 郑涵予李艳丽杨菊菊崔伟建
- 关键词:黄芩素MAPK信号通路
- 转录因子SP1通过调控ABCC1影响小细胞肺癌H446/DDP细胞耐药的机制被引量:2
- 2022年
- 目的:探讨敲减转录因子特异蛋白1(SP1)对小细胞肺癌(SCLC)H466/DDP细胞顺铂(DDP)耐药的影响及其分子机制。方法:构建敲减SP1同时过表达ATP结合盒亚家族C成员1(ABCC1)的SCLC H466/DDP细胞,采用IHC法检测SP1、ABCC1在非耐药和耐药SCLC组织中的表达,用Spearman r法分析SP1与ABCC1在SCLC组织中表达的相关性;WB法检测SP1、ABCC1、CD44在转染后H446/DDP细胞中的表达;CCK-8法、FCM术、微球实验检测转染后H446/DDP细胞的增殖、凋亡及自我复制能力的变化;染色质免疫共沉淀(CHIP)实验检测SP1是否是ABCC1的转录因子。结果:耐药细胞H446/DDP和耐药SCLC组织中的SP1、ABCC1蛋白水平均高于H446细胞和非耐药SCLC组织(均P<0.05),SCLC组织中的SP1、ABCC1蛋白表达呈正相关;敲减SP1抑制H446/DDP细胞的增殖活力,降低CD44、ABCC1蛋白表达水平、减少细胞微球形成数(均P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05);SP1是ABCC1的转录因子。结论:转录因子SP1通过调控ABBC1的表达影响SCLC H446/DDP细胞的耐药,SP1是SCLC对DDP耐药的潜在治疗靶点。
- 高月娟李志平贺飞飞王加良
- 关键词:小细胞肺癌耐药转录因子
- 氯化两面针碱通过PI3K/Akt/Bcl-2/caspase-3/PARP通路诱导小细胞肺癌细胞H1688和H446凋亡被引量:9
- 2022年
- 目的探究氯化两面针碱诱导小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)细胞H1688和H446发生凋亡及其可能的作用机制。方法MTT法检测氯化两面针碱或顺铂(cisplatin,DDP)对SCLC细胞活性的影响;采用倒置荧光显微镜和HE染色法观察氯化两面针碱或DDP处理后细胞形态变化;流式细胞术检测氯化两面针碱或DDP对细胞凋亡的影响;MTT法检测凋亡抑制剂Z-VAD-FMK对氯化两面针碱或DDP诱导细胞发生凋亡的影响;Western blot法检测氯化两面针碱或DDP处理后细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3、PARP、p-PI3K及p-Akt蛋白的表达变化。结果MTT结果显示,氯化两面针碱作用于细胞48 h后,细胞的活力明显降低;与DDP相比,氯化两面针碱能以更小的IC_(50)抑制SCLC细胞;倒置荧光显微镜与HE染色结果表明,与DDP相似,氯化两面针碱可诱导SCLC细胞发生凋亡的形态学变化;流式细胞术结果表明,与DDP相似,氯化两面针碱可诱导SCLC发生细胞凋亡;MTT实验结果表明,氯化两面针碱对SCLC细胞凋亡的抑制作用可被凋亡抑制剂Z-VAD-FMK部分拮抗;Western blot结果显示,与DDP相似,氯化两面针碱可抑制PI3K及Akt的表达,升高Bax、抑制Bcl-2,促进caspase-3和PARP的裂解。结论氯化两面针碱可通过抑制PI3K及Akt的激活,来诱导SCLC细胞发生凋亡。
- 于菲罗卓黎骊莫小香沈小菊莫孝成谭惟丹何敬川邓志华阳洁
- 关键词:氯化两面针碱小细胞肺癌BCL-2CASPASE-3
- 光动力疗法对人小细胞肺癌H446细胞杀伤效应被引量:2
- 2022年
- 目的探讨光动力疗法(PDT)对人小细胞肺癌H446细胞的杀伤效应及其作用机制。方法实验分为空白对照组、单纯光敏剂组、单纯光照组和血卟啉衍生物(HPD)-PDT组。单纯光敏剂组加入HPD孵育;单纯光照组用630 nm激光照射;HPD-PDT组先用HPD孵育,再应用630 nm激光照射。采用CCK8法检测细胞活力,Hoechst 33258染色、流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞Bax、Bcl-2和Caspase-9 mRNA的表达水平。结果单独给予光敏剂或者激光照射对H446细胞无明显杀伤作用,二者联合时随着光敏剂浓度的增加和激光功率密度的增大杀伤效应更明显。RT-PCR检测结果显示,与各对照组相比较,HPD-PDT组Bax、Caspase-9 mRNA表达水平明显上调(F=445.426、1765.177,P<0.05),而Bcl-2 mRNA表达水平明显下调(F=171.193,P<0.05)。结论PDT对小细胞肺癌H446细胞有显著的体外杀伤效应,其作用机制可能与上调Bax、Caspase-9 mRNA水平以及下调Bcl-2 mRNA水平有关。
- 廖洁梅肖宝红郭彩宏巩秀珍程兆忠林存智
- 关键词:光化学疗法血卟啉衍生物
- rL⁃RVG抑制人小细胞肺癌细胞系NCI⁃H446的增殖及迁移
- 2022年
- 目的探讨重组新城疫病毒rL⁃RVG对人小细胞肺癌细胞系NCI⁃H446增殖、迁移的影响及可能的作用机制。方法将NCI⁃H446细胞随机分为3组,分别加入PBS、新城疫病毒(NDV)和rL⁃RVG,PBS为对照组。用免疫荧光法检测RVG及NDV蛋白在细胞内的表达;用MTT法测定病毒的抗增殖情况;划痕实验及Transwell小室法检测细胞迁移情况;免疫荧光法检测相关迁移蛋白E⁃cadherin和MMP2的表达。结果rL⁃RVG在NCI⁃H446细胞中的感染率高,并能够在其内稳定表达;rL⁃RVG对小细胞肺癌细胞的抑制效果强于NDV。rL⁃RVG组划痕距离显著小于NDV组及对照组(P<0.05);rL⁃RVG组穿过小室的细胞数明显少于对照组(P<0.05)。相较于NDV及对照组,rL⁃RVG组的MMP2蛋白表达下降,而E⁃cadherin蛋白表达上调。结论rL⁃RVG能够抑制NCI⁃H446细胞增殖,其机制可能是通过调节E⁃cadherin和MMP2而影响细胞迁移。
- 梁冰严玉兰
- 关键词:小细胞肺癌新城疫病毒迁移
相关作者
- 杜娈英
- 作品数:81被引量:204H指数:8
- 供职机构:承德医学院
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- 钱桂生
- 作品数:1,137被引量:6,949H指数:33
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- 研究主题:多药耐药 小细胞肺癌 多药耐药细胞 人小细胞肺癌 黄鳝
- 解智慧
- 作品数:24被引量:46H指数:4
- 供职机构:北京协和医学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室
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- 李丹
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- 供职机构:承德医学院
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