搜索到28篇“ NCSRS2基因“的相关文章
- 新孢子虫NcSAG1与NcSRS2基因的原核表达与纯化被引量:1
- 2013年
- PCR扩增新孢子虫NcSAG1与NcSRS2基因,将其构建至原核表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌BL-21菌株。对重组表达质粒pET28a/SRS2与pET28a/SAG1IPTG的诱导浓度和诱导温度等条件进行了摸索,确定蛋白最佳诱导时间分别为5、3h,IPTG浓度均为0.8 mmol/L。经组氨酸标记Ni 2+柱纯化后获得的蛋白纯度均大于93.5%,蛋白质量浓度分别为1.23、1.1g/L。经Western blotting检测证明表达的蛋白具有较好的特异性。用纯化后pET28a/SRS2、pET28a/SAG1和二者等量混合物包被酶标板,经ELISA检测表明,表达的蛋白具有较强免疫活性,2种蛋白等量混合物包被酶标板与各蛋白单独包被酶标板检测比较,并未见D值升高。
- 史茜员丽娟季新成于学辉
- 关键词:新孢子虫WESTERNBLOTTINGELISA
- 牛新孢子虫NcSRS2基因腺病毒穿梭载体的构建及在293细胞中的表达被引量:3
- 2012年
- 应用PCR技术扩增牛新孢子虫NcSRS2基因,纯化PCR产物后与克隆载体pMD18-T Simple Vector连接,将PCR、酶切鉴定及测序分析正确的pMD-18T-NcSRS2重组质粒进行EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切,克隆至相同酶切回收后的腺病毒穿梭载体pCR259中,再将PCR、酶切鉴定正确的pCR259-NcSRS2重组质粒转染293细胞,应用IF-AT和Western-blotting技术检测重组质粒在293细胞中的表达情况。结果显示,扩增的牛新孢子虫NcSRS2基因长度为1 227bp,与GenBank中发表的NcSRS2(AF061249)核苷酸序列同源性为99%,构建的pCR259-NcSRS2重组质粒在293细胞中得到瞬时表达,表达蛋白的相对分子质量为43 000,具有较好的反应原性。本试验为新孢子虫病腺病毒载体疫苗的构建奠定了基础。
- 贾立军张守发刘明明
- 关键词:新孢子虫NCSRS2基因
- 表达牛源犬新孢子虫NcSRS2基因重组腺病毒的构建及免疫原性分析被引量:6
- 2012年
- 为构建牛源犬新孢子虫NcSRS2基因重组腺病毒,并分析其免疫原性,PCR扩增牛源犬新孢子虫Nc-SRS2基因,构建克隆质粒pMD18-T-NcSRS2、重组腺病毒穿梭质粒pCR259-NcSRS2及表达质粒Transpose-Ad-NcSRS2,脂质体介导转染QBI-HEK293细胞,包装重组腺病毒Ad5-NcSRS2,PCR检测重组腺病毒NcSRS2基因,IFAT和Western blotting检测NcSRS2基因在QBI-HEK293细胞中的表达,测定病毒滴度后,收集病毒液免疫BALB/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清IgG抗体水平。结果显示,扩增的牛源犬新孢子虫NcSRS2基因大小为1 227bp,与GenBank中发表的NcSRS2(AF061249)核苷酸序列相似性为99%;重组腺病毒Ad5-NcSRS2在293细胞中包装成功,表达蛋白的相对分子质量为43ku,具有较好的反应原性;测得重组腺病毒Ad5-NcSRS2滴度为109 TCID50.mL-1,间接ELISA检测二免后3周BALB/c小鼠血清中IgG抗体效价达1∶2 048。本研究成功构建了具有良好免疫原性的重组腺病毒Ad5-NcSRS2,为牛源犬新孢子虫NcSRS2基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了基础。
- 贾立军于龙政张守发
- 关键词:犬新孢子虫NCSRS2基因重组腺病毒免疫原性
- 牛新孢子虫NcSRS2基因真核重组质粒的构建及鉴定
- 2011年
- 为了解牛新孢子虫NcSRS2基因的生物学特性,试验扩增牛新孢子虫NcSRS2基因,亚克隆至pMD18-T载体后进行PCR鉴定、酶切鉴定及测序分析,最后克隆至pVAXⅠ真核表达载体中,并进行PCR鉴定和酶切鉴定。结果表明:牛新孢子虫NcSRS2基因长度为1 227 bp,与GenBank中发表的NcSRS2(AF061249)核苷酸序列同源性为99%;构建的真核重组质粒pVAXⅠ-NcSRS2正确。
- 贾立军张守发
- 关键词:NCSRS2基因
- 表达牛源犬新孢子虫NcSRS2基因重组腺病毒的构建及免疫原性分析
- PCR扩增牛源犬新孢子虫NcSRS2基因,构建克隆质粒pMD18-T-NcSRS2、重组腺病毒穿梭质粒pCR259-NcSRS2及表达质粒Transpose-Ad-NcSRS2,脂质体介导转染QBI-HEK293细胞,包...
- 贾立军于龙政张守发
- 文献传递
- 犬新孢子虫新疆Nc-1株NcSRS2基因的克隆及原核表达被引量:4
- 2010年
- 根据GenBank中犬新孢子虫NcSRS2基因序列设计了1对引物,从新孢子虫病阳性牛血液中提取总DNA,经PCR扩增NcSRS2基因,将其插入原核表达质粒pGEX-4T-2中,重组质粒pGEX-4T-NcSRS2经测序确定后,转入表达菌株BL21,优化其表达条件,并探讨了GST-NcSRS2蛋白的生物活性。结果显示,在37℃条件下,经终浓度为0.5mmol/L的IPTG诱导表达4h后,获得融合蛋白。Western-blot分析表明该融合蛋白可与相应抗体发生特异性结合,rELISA检测与弓形虫和布鲁氏菌阳性血清无交叉反应。
- 杨帆陈亮王莲芳巴音查汗
- 关键词:犬新孢子虫NCSRS2基因原核表达
- 新疆地区流产奶牛新孢子虫病流行病学研究及NcSRS2基因原核表达载体的构建
- 新孢子虫病(Neosporosis)是由犬新孢子虫(Ncaninum)寄生在宿主体内引起多种家畜共患的原虫病,此病对牛的危害尤为严重,主要造成母牛流产、产死胎以及新生犊牛的运动神经系统疾病,给畜牧业造成了巨大的经济损失。...
- 王常汉
- 关键词:奶牛新孢子虫病NCSRS2基因原核表达载体
- 文献传递
- 犬新孢子虫NcSRS2基因原核表达质粒的构建被引量:2
- 2008年
- 根据已发表的犬新孢子虫NcSRS2基因序列,设计1对含有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点的引物。以提取犬新孢子虫虫体基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得NcSRS2 ORF基因片段,将此基因片段克隆到pMD18-T Simple载体上,用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切该片段,回收得到含有两个酶切位点黏端的Nc-SRS2 ORF基因,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的PGEM-4T-2原核表达载体中,获得重组质粒pGEX-NcSRS2,经PCR鉴定,限制性内切酶分析和克隆片段序列测定比较,证实了重组质粒的正确性。
- 丁德梁晚枫田野田万年贾立军张守发
- 关键词:犬新孢子虫聚合酶链反应NCSRS2基因
- 犬新孢子虫NcSRS2基因片段的克隆及原核表达被引量:3
- 2008年
- 以含有犬新孢子虫NcSRS2基因的质粒pMD18-NcSRS2为模板,应用PCR方法扩增Nc-SRS2基因,将该基因片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,构建了重组表达质粒pGEX-Nc-SRS2,转化大肠杆菌BL21中并诱导表达。结果显示,克隆的基因片段长1100bp,SDS-PAGE、Western blotting分析显示,重组质粒pGEX-NcSRS2在大肠杆菌中得到了高效表达。
- 丁德贾立军其木格薛书江张守发
- 关键词:犬新孢子虫NCSRS2基因克隆原核表达
- 犬新孢子虫吉林株NcSRS2基因片段的原核表达及初步应用
- 新孢子虫病(Neosporiasis)是由犬新孢子虫(Neospora caninum)寄生于犬、牛、马、羊等多种宿主动物细胞内而引起的一种原虫病。该病对牛的危害尤为严重,主要造成孕畜流产、死胎以及新生犊牛的运动神经系统...
- 丁德
- 关键词:犬新孢子虫NCSRS2基因原核表达基因克隆
- 文献传递
相关作者
- 刘群
- 作品数:222被引量:627H指数:15
- 供职机构:中国农业大学动物医学院
- 研究主题:新孢子虫 弓形虫 新孢子虫病 柔嫩艾美耳球虫 免疫保护
- 余劲术
- 作品数:52被引量:150H指数:7
- 供职机构:广东省农业科学院
- 研究主题:柔嫩艾美耳球虫 鸭疫里默氏杆菌 NCSRS2基因 饲料 基因克隆
- 汪明
- 作品数:500被引量:1,936H指数:21
- 供职机构:中国农业大学动物医学院
- 研究主题:柔嫩艾美耳球虫 球虫 寄生虫病 超微结构 球虫病
- 张守发
- 作品数:355被引量:844H指数:16
- 供职机构:延边大学农学院
- 研究主题:猪附红细胞体 犬新孢子虫 牛瑟氏泰勒虫 克隆 PCR
- 贾立军
- 作品数:262被引量:434H指数:10
- 供职机构:延边大学
- 研究主题:犬新孢子虫 猪附红细胞体 牛瑟氏泰勒虫 新孢子虫 PCR