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TNF蛋白的原核表达及阻断活性单克隆抗体的制备
2024年
为制备针对猫TNF-α的具有阻断活性的单克隆抗体,本研究基于可溶性猫TNF-α(sTNFα)基因成功构建、表达及纯化了重组质粒pET-28a-sTNFα,并进一步对重组蛋白诱导表达的条件进行摸索和优化,鉴定其生物活性;其次将猫TNF-α重组蛋白作为免疫原进行小鼠免疫、细胞融合、阻断活性杂交瘤细胞的筛选和腹水制备,并对获得的单克隆抗体进行鉴定。结果显示,成功构建了pET-28a-sTNFα质粒并通过大肠杆菌系统表达出具有生物活性的猫TNF-α重组蛋白,相对分子质量为34 kDa,半数细胞活性抑制质量浓度为1.22μg/L;成功筛选出3株具有阻断活性的单克隆抗体(A6-B7-9、H5-E2-94和C8-A10-100),Western blot检测显示3株单抗均能与TNF-α特异性结合,效价可达1∶512000,3株单抗在质量浓度为100 mg/L时,对TNF-α的拮抗效果最强。本研究筛选了猫TNF-α的阻断活性抗体,以期为由猫TNF-α介导的相关疾病的防治提供新型的安全的有效的候选药物。
王阅李佳康李秋燕曹胜波叶静曹龙龙周登元
关键词:肿瘤坏死因子-Α单克隆抗体重组蛋白表达
GYPA、CD68和TNF蛋白鉴别水中晚期尸体生前死后伤的作用研究
2024年
目的探讨血型糖蛋白A(Glycophorin A,GYPA)、CD68和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)蛋白在水中晚期尸体生前伤和死后伤的表达情况,为在水中晚期生前死后伤鉴定筛选标志物。方法18只SD大鼠分为对照组(n=6)、生前挫伤浸没组(n=6)和死后挫伤浸没组(n=6),生前挫伤浸没组采用机械失重技术建立SD大鼠右后肢挫伤模型,死后挫伤浸没组是SD大鼠处死后用机械失重技术建立右后肢挫伤模型,对照组不予致伤处理,所有大鼠均浸没72 h。肉眼观察及HE染色观察生前伤和死后伤的情况;免疫组织化学染色(Immunohistochemistry,IHC)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测GYPA、CD68及TNF蛋白在挫伤组织表达情况;随后在实际案例中予以验证。结果肉眼观察和HE染色均无法较好地鉴别浸没72 h大鼠的生前伤和死后伤。免疫组织化学染色发现生前挫伤浸没组软组织GYPA表达呈阳性,CD68在炎性细胞膜呈阳性表达,TNF-α在胞质表达呈弱阳性,GYPA、CD68和TNF蛋白表达均显著高于死后挫伤浸没组和对照组(P<0.05)。GYPA、CD68和TNF蛋白在鉴别浸没尸体生前伤和死后伤实际案例中亦有相似结果。结论GYPA、CD68和TNF蛋白有望成为水中浸没尸体生前伤和死后伤鉴别的分子指标之一。
向明亮王廷宏刘勤进王陶罗涛张伟章丽霞邓小冬刘云
关键词:生前伤死后伤血型糖蛋白ACD68
抗小鼠TNF蛋白的抗体和抗体对及其应用
本发明属于免疫学检测技术领域,尤其涉及抗小鼠TNF‑α蛋白的抗体和抗体对及其应用。所述抗体为第一抗体或第二抗体,第一抗体轻链上CDR1‑3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3‑5所示,重链上CDR1‑3的氨基酸序列分...
祝超 田科 吴海 程瑶 吴飞鸽 蒋晓园 程朝霞
一种重组人TNF蛋白冻干小球及其制备方法和应用
本发明提供一种重组人TNF‑α蛋白冻干小球及其制备方法和应用,重组人TNF‑α冻干小球由重组人TNF‑α蛋白溶液、冻干保护溶液和聚甘氨酸‑精氨酸混合冻干成球状,冻干保护溶液包括封闭剂、乙二胺四乙酸二钠盐二水、卵磷脂、羟丙...
陈善问徐陈槐熊霞熊顺强
一种重组人TNF蛋白冻干小球及其制备方法和应用
本发明提供一种重组人TNF‑α蛋白冻干小球及其制备方法和应用,重组人TNF‑α冻干小球由重组人TNF‑α蛋白溶液、冻干保护溶液和聚甘氨酸‑精氨酸混合冻干成球状,冻干保护溶液包括封闭剂、乙二胺四乙酸二钠盐二水、卵磷脂、羟丙...
陈善问徐陈槐熊霞熊顺强
面向尿液中TNF蛋白浓度检测的A-MFET生物传感器研究
闫帅帅
重组人TNF蛋白表达、纯化及其与EGCG相互作用研究
类风湿性关节炎是一种常见的自身免疫性疾病,其特征为持续性滑膜炎并伴随剧烈疼痛,严重者导致功能损害和残疾。患者体内表现为免疫细胞的浸润和多种促炎细胞因子的表达。肿瘤坏死因子α(TNF-α)是由157个氨基酸残基组成的三聚体...
秦权
关键词:类风湿性关节炎肿瘤坏死因子ΑNF-ΚB成纤维样滑膜细胞EGCG
人源TNF蛋白生物信息学分析及相关治疗思路研究
2022年
目的应用生物信息学分析软件预测并分析人源肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白结构和功能,并结合该课题组前期实验结果提出一些新的治疗思路。方法利用在线Uniprot蛋白数据库、Expasy在线预测网站、SignalP-5.0、TMHMM Server V2.0、Cell-Ploc、SOPMA、SWISS-MODEL、在线数据库Protscale等生物信息学预测软件对人源TNF蛋白理化性质、信号肽、跨膜区、亚细胞定位、空间结构及疏水性分析;登录“http://www.cbs.dtu.dk/services/netrhos/”网站对该蛋白磷酸化位点进行预测;选取String及IEDB等在线网站分析人源TNF-α的相互作用蛋白及该蛋白优势表位预测。结果人源TNF蛋白为编码233个氨基酸的蛋白质,相对分子质量为26×10^(3),为不太稳定的亲水性蛋白,有跨膜区,无信号肽;预测该蛋白亚细胞定位在细胞膜中,蛋白序列中存在15个丝氨酸磷酸化位点,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主;三级结构模型显示该蛋白可形成同源三聚体,有多种蛋白与之相互作用。结论生物信息学预测分析人源TNF-α含有多个磷酸化位点和B细胞优势表位,并且该表位与前期实验找到的功能性肽段序列相符,可为临床针对人源TNF-α设计多肽或药物提供新靶点。
蹇艾利申元英姜石松
关键词:肿瘤坏死因子-Α生物信息学分析
TNF蛋白B细胞表位,含此表位的多抗原肽及应用
本发明提供一种TNF‑α蛋白的B细胞表位、及基于该表位、结合MAP方案合成的8分支肽构象的多抗原肽,以及在制备溃疡性结肠炎疫苗中的应用。创造性地将MAP设计方案应用于小分子自身抗原的免疫学研究领域,通过大量试验,筛选出人...
张骏张运龙崔盈陶厚权王惠菊
文献传递
高效氯氰菊酯对大鼠脑组织TH及TNF蛋白表达影响的研究被引量:1
2019年
目的通过动物实验观察高效氯氰菊酯对大鼠脑(TH)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组,高效氯氰菊酯低剂量组(20 mg/kg)、中剂量组(40 mg/kg)、高剂量组(60 mg/kg)。经口灌胃染毒,时间为30天,观察高效氯氰菊酯对大鼠的一般状况及体重变化,计算食物利用率、脏器系数,免疫组化方法检测TH在脑组织中表达情况,Western blot法检测TNF-α的蛋白表达水平。结果与对照组[(314.82±10.89)g]比较,高效氯氰菊酯能够导致大鼠体重[(287.38±18.17)g]下降(P<0.01),食物利用率显著降低[对照组为(20.31±4.33)%,高剂量组为(18.83±4.22)%,P<0.01]。高剂量组脏体比[(0.71±0.07)%]、中剂量组脑体比[(0.69±0.08)%]均高于对照组[(0.59±0.09)%](均P<0.05)。与对照组相比,高、中剂量组黑质纹状体内TH含量显著降低。高、中剂量组黑质纹状体内TNF-α含量明显高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论高效氯氰菊酯会导致大鼠脑组织内TH含量的减少和TNF-α含量的增加,因此会造成脑组织的损伤。
尚佳琦王琪田超张汝楠赵帅周晓蓉
关键词:高效氯氰菊酯肿瘤坏死因子-Α神经毒性