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胡宝成
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- 所属机构:军事医学科学院生物工程研究所
- 所在地区:北京市
- 研究方向:生物学
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
- 绳纪坡
- 作品数:29被引量:36H指数:4
- 供职机构:军事医学科学院生物工程研究所
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- 于芳
- 作品数:57被引量:104H指数:6
- 供职机构:军事医学科学院生物工程研究所
- 研究主题:抗HIV-1 单链抗体 稳定性 脆性组氨酸三联体 原核表达
- 高宁
- 作品数:34被引量:35H指数:3
- 供职机构:军事医学科学院生物工程研究所
- 研究主题:普氏立克次体 重组蛋白 表面抗原 贝氏柯克斯体 外膜蛋白
- 田媛
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- 供职机构:军事医学科学院生物工程研究所
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- 研究主题:细胞外基质磷酸糖蛋白 MICRORNA 靶向 MEPE 抗体制备
- Hus1(Hus1f)基因可溶性表达、蛋白纯化及抗体制备被引量:2
- 2005年
- 为进一步了解Hus1蛋白在细胞周期检查点信号传导通路中的功能 ,用RT PCR技术从NIH3T3细胞的总RNA中扩增出Hus1基因片段Hus1f(6 0 6~ 84 6bp) ,使其在大肠杆菌中呈可溶性表达 .用镍离子螯合柱 (Ni NTA)纯化Hus1f蛋白 ,获得纯度较高的蛋白 .用纯蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体 .ELISA结果显示效价达到 1∶6 40 0 .Western印迹结果表明 ,该抗体可以与Hus1蛋白特异结合 .通过免疫共沉淀实验发现 ,Hus1蛋白与Chk1蛋白之间存在相互作用 ,为进行信号转导通路的研究奠定了基础 .
- 刘爽田媛胡宝成黎舒佳
- 关键词:原核表达抗体制备
- 脆性组氨酸三联体基因小干扰RNA的构建及干扰效果检测
- 2010年
- 目的:构建脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的小干扰RNA(siRNA),并检测其对293T细胞内源性FHIT基因表达的干扰效果。方法:根据FHIT基因序列,通过生物信息学网站预测可能的siRNA,从中筛选出2条合理的FHIT-siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSilencer2.1-U6Hygro中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆进行测序鉴定;将构建成功的FHIT-siRNA重组载体转染人胚肾细胞293T,Western印迹检测siRNA对293T内源性FHIT表达的干扰效果。结果:构建了2个FHIT-siRNA重组质粒,2条siRNA都有干扰作用,其中一条的作用效果可达50%以上。结论:构建的FHIT-siRNA为进一步研究FHIT的功能提供了有利的工具。
- 林宇翔于芳绳纪坡高宁马祖兴胡宝成
- 关键词:脆性组氨酸三联体基因小干扰RNA
- 利用体内噬菌体展示技术进行人源肿瘤细胞特异性结合肽的筛选被引量:1
- 2003年
- 目的 :寻找肿瘤细胞特异性结合肽 ,为肿瘤诊断试剂及肿瘤药物的研制奠定基础。方法 :用培养的人源肿瘤细胞使裸鼠致瘤 ,将随机肽库从裸鼠的尾静脉注射到裸鼠体内 ,循环数分钟后取肿瘤组织及正常对照组织进行噬菌体筛选 ;经过 2~ 3轮体内筛选 ,获得在肿瘤组织中富集的肽段。结果与结论 :利用体内噬菌体展示技术 ,结合人源肿瘤细胞 (SMMC_772 1和PLA_80 1D)裸鼠致瘤模型 ,从随机十二肽库中成功地筛选到可以较高特异性地结合SMMC_772 1肿瘤细胞或肿瘤血管的噬菌体多肽 ,通过对噬菌体单克隆进行测序 ,初步确定了几种可能的多肽基序(motif)。
- 绳纪坡李赏胡宝成
- 关键词:肿瘤细胞结合肽肽库
- 转化的大鼠胚胎成纤维细胞系差异表达基因的筛选研究被引量:10
- 2002年
- 来源于转化的大鼠胚胎成纤维细胞系的两株细胞,A1-5细胞与B4细胞相比表现出非常强的抗辐射性并伴随不同寻常强的G2延迟效应;用PCR选择性抑制消减杂交方法对这两株细胞进行差减,希望找到对A1-5细胞表现出的不同寻常的表型起关键作用的某一个或某一些基因。结果得到了160个差减转化子,逐个进行序列测定,并进行Dotblot杂交,共得到35个差异表达基因片段(EST)。通过对美国国家生物技术信息中心(NCBI)的非冗余序列库(NT)、鼠EST库及人EST库的BLAST进行同源检索,发现其中21个代表了尚未登录的新基因,另外14个分别与已知基因高度同源。
- 胡宝成王翔George Iliakis王亚
- 关键词:差异表达基因胚胎成纤维细胞
- MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用机制研究
- 成骨细胞/骨细胞因子45(Osteoblast/Osteocyte Factor 45,0F45),亦称细胞外基质磷酸糖蛋白 (Matrix Extracellular PhosphoglycoprotEin,MEPE)...
- 胡宝成刘爽高宁绳纪坡
- 关键词:结构域耐受性磷酸盐细胞株作用机制研究DNA
- 文献传递
- 肝素结合的EGF样生长因子成熟肽的基因克隆
- 1994年
- 采用PCR方法扩增出肝素结合的EGF样生长因子(HB-EGF)成熟肽的cDNA。该cDNA用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后,回收含HB-EGF成熟肽基因长约270bP的DNA片段,插入经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切的pUC18载体中,进行序列分析。结果表明所扩增出的片段与原设计完全一致。
- 薛沿宁周廷冲王会信胡宝成赵明王芳
- 关键词:PCR基因克隆
- DNA损伤检查点蛋白调节子1片段的表达纯化及抗体制备
- 2009年
- 目的:原核表达、纯化DNA损伤检查点蛋白调节子1(MDC1)片段,并制备其多克隆抗体。方法:设计特异引物,通过RT-PCR扩增编码MDC1 N端194个氨基酸残基的基因片段,测序正确后插入含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果:原核表达并纯化了MDC1 N端片段,并获得了抗MDC1的多克隆抗体,抗体效价达到1∶12800,Western印迹显示该抗血清能特异识别原核及真核细胞表达的MDC1。结论:MDC1 N端片段能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究MDC1在Fhit特异信号通路中的作用奠定了基础。
- 高宁张勇于芳张鸿声绳纪坡胡宝成
- 关键词:多克隆抗体
- 普通型脆性位点的研究进展被引量:5
- 2008年
- 脆性位点是DNA合成被部分抑制之后,在中期染色体上发生的位点特异的缺口或断裂区域,它也是基因组不稳定的区域。通常脆性位点在体细胞中是稳定的,但它们在许多癌细胞中经常发生缺失或重排。在已发现的80多种脆性位点基因中,研究最多的是FHIT和WWOX,它们与肿瘤的发生发展密切相关。简要综述了普通型脆性位点的研究进展及其与肿瘤的关系。
- 于芳张勇胡宝成
- 关键词:抑癌基因肿瘤
- 原核系统可溶性表达策略被引量:45
- 2005年
- 获得大量目的蛋白的最简单最经济的方法是利用原核表达系统表达外源基因。但由于原核系统的自身特点,使所表达的蛋白常常形成无活性的包涵体。多年来世界各国的研究者为解决这一问题尝试了多种方法。本文简单介绍原核表达系统的特点及提高蛋白可溶性表达的常用方法。
- 刘爽胡宝成
- 关键词:大肠杆菌可溶性表达原核系统包涵体基因表达系统
- 人CD34单链抗体基因的构建及序列测定被引量:3
- 1999年
- 目的:获得抗人CD34单链抗体基因。方法:选用一株分泌抗CD34抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株,提取总RNA,经RT-PCR扩增出此抗体的重链可变区和轻链可变区基因,与Kabat抗体库比较得到其框架区和互补决定区的氨基酸序列;重新合成两对引物去掉保留的分泌信号前导序列并加入适当的限制性内切酶酶切位点,再经PCR得到所需要的重链可变区和轻链可变区基因,经一弹性连接肽连接构建成抗人CD34的单链抗体(sFv)基因。结果:DNA序列分析结果表明,获得的单链抗体基因的轻链可变区属于鼠κ轻链第Ⅴ亚族,重链可变区属于鼠重链第Ⅰ(B)亚族。结论:构建的抗人CD34单链抗体基因全长为813个碱基,编码蛋白的相对分子质量约为30000。
- 胡宝成段陵浔
- 关键词:CD34单链抗体克隆聚合酶链反应