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国家自然科学基金(30270033)

作品数:18 被引量:92H指数:7
相关作者:林琳邹有土胡长浩刘燕雅施文芳更多>>
相关机构:福建师范大学更多>>
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相关领域:生物学化学工程轻工技术与工程更多>>

文献类型

  • 18篇期刊文章
  • 3篇会议论文

领域

  • 16篇生物学
  • 3篇化学工程
  • 2篇轻工技术与工...

主题

  • 21篇脂肪酶
  • 9篇热稳定
  • 9篇热稳定性
  • 9篇扩展青霉脂肪...
  • 5篇叠加突变
  • 5篇扩展青霉碱性...
  • 5篇碱性脂肪酶
  • 4篇最适作用温度
  • 4篇扩展青霉
  • 2篇单胞菌
  • 2篇低温脂肪酶
  • 2篇点突变
  • 2篇定点突变
  • 2篇生物柴油
  • 2篇酶学
  • 2篇酶学特性
  • 2篇酶学性质
  • 2篇酵母
  • 2篇菌种
  • 2篇假单胞菌

机构

  • 21篇福建师范大学

作者

  • 21篇林琳
  • 7篇胡长浩
  • 6篇施文芳
  • 6篇邹有土
  • 6篇刘燕雅
  • 4篇陈彦
  • 4篇黄平
  • 4篇冯蔚宗
  • 4篇沈麟
  • 4篇蔡少丽
  • 3篇吴义真
  • 3篇司圣乾
  • 3篇王彩梅
  • 2篇陈国仁
  • 2篇林俊涵
  • 2篇黄建忠
  • 1篇张娟梅
  • 1篇吴松刚
  • 1篇王冰冰
  • 1篇杨月梅

传媒

  • 3篇生物技术
  • 3篇生物工程学报
  • 2篇微生物学通报
  • 2篇中国生物工程...
  • 2篇华东六省一市...
  • 1篇生物技术通讯
  • 1篇工业微生物
  • 1篇安徽农学通报
  • 1篇福建畜牧兽医
  • 1篇应用与环境生...
  • 1篇生物技术通报
  • 1篇饲料工业
  • 1篇生物加工过程

年份

  • 1篇2013
  • 2篇2011
  • 2篇2010
  • 5篇2009
  • 3篇2008
  • 4篇2007
  • 1篇2006
  • 2篇2005
  • 1篇2003
18 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
K55R与ep8叠加突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的改善被引量:9
2007年
利用重叠延伸PCR对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,构建了K55R与随机突变体ep8叠加突变的重组质粒pAO815-ep8-K55R。将该质粒电转化引入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,进行异源表达。实验结果表明:该叠加突变体在毕赤酵母中获得了活性表达,得到表达产物脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS。其表达量为508u/mL,分别约为野生型脂肪酶PEL-GS(627u/mL)的81%,随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS(924u/mL)的55%;其比活力为2309.1u/mg,与随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS和野生型脂肪酶PEL-GS的相仿。叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的最适作用温度为37℃,与野生型脂肪酶PEL-GS和随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS一致;其Tm值为41.0℃,比野生型脂肪酶PEL-GS提高了2.3℃,比随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS提高了0.8℃。表明叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的热稳定性有了进一步的提高。
蔡少丽林俊涵王彩梅林琳
关键词:扩展青霉脂肪酶叠加突变热稳定性
扩展青霉碱性脂肪酶基因5’端侧翼区域的克隆与鉴定被引量:3
2007年
应用衔接头PCR技术,扩增得到约2000 bp的扩展青霉碱性脂肪酶基因5’端侧翼区域的单一产物。对该产物测序并提交GenBank数据库(GenBank accession DQ677520),经序列比对分析,发现该序列具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、CAAT盒、GC盒等元件。将扩增得到的脂肪酶基因5’端侧翼序列,连接到含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒中,构建了一个重组表达质粒,转化大肠杆菌细胞。荧光显微观察大肠杆菌阳性转化子发出荧光,侧翼序列含有启动子功能得到确认。
杨月梅江贤章张娟梅谢必峰杨欣伟林琳黄建忠
关键词:扩展青霉脂肪酶启动子GFP
E83V对扩展青霉脂肪酶最适作用温度的影响被引量:6
2005年
利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因作了体外定点突变,获得了最适作用温度有所提高的突变体。含突变基因的重组质粒pPIC3.5K-lip-E83V在PichiapastorisGS115中表达。对突变体表达产物PEL-E83V-GS与野生型表达产物PELGS作了比较:前者最适作用温度为45℃,比野生型提高了5℃;其热稳定性基本不变;突变体在37℃下的表达量为188U/mL,约为野生型的80%。最适作用温度的提高可能是由于83位亲水性的Glu用疏水性的Val取代,增加了脂肪酶表面的疏水作用,使其在高温下更适于与底物的结合。
陈国仁林琳
关键词:扩展青霉碱性脂肪酶定点突变最适作用温度
扩展青霉脂肪酶ep8与R182K叠加突变体的构建被引量:3
2007年
利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,并将含突变基因的重组质粒pAO815-ep8-R182K在毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中进行表达。叠加突变体PEL-ep8-R182K表达产物与野生型PEL、PEL-ep8比较实验表明:叠加突变体表达蛋白PEL-ep8-R182K最适反应温度与野生型PEL、PEL-ep8一致,均为40℃;热稳定性与野生型相似,比PEL-ep8降低2.25℃。但是,在比活上,PEL-ep8-R182K与PEL-ep8、野生型PEL相比,其比酶活分别提高了14.03%和3.86%。
王彩梅蔡少丽吴义真林琳
关键词:扩展青霉脂肪酶叠加突变最适温度热稳定性
冷藏牛奶中脂肪酶产生菌的分离
本文从福建农林大学及康利达乳品有限公司采集牛奶样品,并将其置于4℃预处理一周,让耐冷菌成为优势菌。采用常规稀释度方法稀释样品至适当浓度,涂布2%三丁酸甘油酷平皿筛选培养基,培养温度分别为4℃和18C,挑取在平皿筛选培养基...
施文芳胡长浩沈麟林琳
关键词:脂肪酶酶学特性假单胞菌
低温耐热脂肪酶的筛选、纯化及特性研究被引量:2
2009年
目的:对一株低温耐热脂肪酶产生菌Pseudomonas RT-7进行产酶、纯化和特性研究。方法和结果:该菌的发酵液经50%硫铵沉淀、DEAE-Sepharose及SephacrylS-100分离获得了纯化的脂肪酶(PL-7)。SDS-PAGE电泳估算其表观分子量为44kDa,对底物特异性、作用温度、作用pH和耐热性的研究表明该酶为碱性脂肪酶,最适温度在15~20℃。该酶对C≤12链长的甘油三酯有较好的水解能力。该酶具有在低温和高温下稳定而在中温下不稳定的特点:表现为该酶经60℃30min处理后残余酶活高达93.33%,90℃处理30min后残余酶活仍有35.19%,而在40℃处理30min酶活仅残余28.23%。结论:该酶为低温碱性脂肪酶并在高温条件下具有很好的耐热性。
施文芳胡长浩沈麟林琳
关键词:假单胞菌低温脂肪酶耐高温
扩展青霉脂肪酶K56R叠加突变对热稳定性的影响被引量:4
2009年
目的:扩展青霉脂肪酶随机突变体ep8是一株热稳定性比野生型有所提高的突变体。获得热稳定性提高的优良菌株。方法:在ep8的基础上利用重叠延伸PCR构建叠加突变重组质粒pPIC3.5K-ep8-K56R,将该质粒电转毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115进行异源表达。结果:该叠加突变脂肪酶在毕赤酵母中获得了活性表达。15%SDS-PAGE结果分析表明突变脂肪酶PEL-ep8-K56R-GS分子量与野生型PEL-GS一致,约为28kDa。叠加突变脂肪酶在37℃时酶活为852U/mL、野生型为760u/mL、随机突变体为824u/mL,叠加突变体酶活相比野生型提高了21.1%,相比随机突变体提高了3.4%。热稳定性分析数据表明叠加突变脂肪酶Tm值为40.1℃、野生型为38.7℃、随机突变体为39.9℃,Tm值相比野生型提高了1.4℃,相比随机突变体提高了0.2℃。
沈麟施文芳胡长浩林琳
关键词:扩展青霉脂肪酶叠加突变热稳定性
脂肪酶的固定化及其在生物柴油制备中的应用被引量:2
2009年
脂肪酶(1ipase EC3.1.1.3)又称三酰基甘油酰基水解酶,属于特殊的水解酶,它的天然底物是油脂.除了具有高催化效率、专一性、无污染性等生物酶的一般特性外,一个突出的特点是在异相体系中具有催化活性.即在油水界面能够催化酯水解或醇解、氨解、酯合成、酯交换、内酯合成、高聚物合成以及手性药物的拆分等反应^[1]。
刘燕雅黄平胡长浩林琳
关键词:脂肪酶生物柴油酯合成
脂肪酶菌种的筛选鉴定及部分酶学性质的研究
脂肪酶的热稳定性问题一直是脂肪酶生产和应用的瓶颈问题。本研究小组致力于从耐高温菌种筛选、分子突变、结构修饰等方面研究和解决该问题。从自然界筛选耐高温脂肪酶菌种,获得相应的基因,不但菌种本身将来有可能成为耐高温脂肪酶的生产...
胡长浩施文芳陈彦刘燕雅林琳
关键词:脂肪酶酶学性质
脂肪酶菌种的筛选、鉴定及酶学性质研究被引量:9
2009年
目的:筛选耐热脂肪酶产生菌并研究其酶学特性。方法:以固体平板法筛选产酶菌株,单因素和分子进化树分析确定产酶条件、酶学性质及分类地位。结果:产酶条件初步确定为2%糊精、3%酵母膏、MgSO4·7ddH2O 0.1%、K2HPO40.1%、CaCl20.1%、三丁酸甘油酯乳化液0.1%,起始pH7.0,装量为50mL/250mL摇瓶,发酵温度及周期为35℃,22h。酶学性质表明:较适作用温度,pH分别为45℃,10.0,在pH5.0~11.0范围内稳定;该酶具有较好的热稳定性,60℃下温浴30min仍保留77%的活性;可水解长链油脂(C18∶0);0.01%的SDS及10mmol/L的Pb2+、Ba2+抑制该酶的活性,0.05%的EDTA没有影响,0.01%的Triton X-100、Tween80及10mmol/L的K+有促进作用;16S rDNA的分子进化树分析表明,该菌株与Staphylococcus aureus有最紧密的亲缘关系。结论:获得了一株耐热脂肪酶产生菌FL-12,并初步鉴定为Staphylococcus aureus。
胡长浩施文芳沈麟林琳
关键词:热稳定性酶学性质
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