江苏省高校自然科学研究项目(02KJB320013)
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 相关作者：徐开林潘秀英杜冰高飞鹿群先更多>>
- 相关机构：徐州医学院附属医院徐州医学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金江苏省科技厅基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不同启动子指导的HSV1-sr39TK/GCV系统对小鼠淋巴细胞的敏感性研究被引量：1
- 2008年
- 目的观察慢病毒载体中不同启动子指导的突变型单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1-sr39TK)基因在小鼠T淋巴细胞内的表达差异,并进一步比较对丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)的敏感性。方法用亚克隆技术将PCR扩增的HSV1-sr39TK基因分别连接至慢病毒载体不同启动子后,然后在HSV1-sr39TK基因后以内部核糖体进入位点(internal ribosome entry sites,IRES)连接绿色荧光蛋白(green fluorescent pro-tein,GFP)报告基因;采用三质粒包装系统包装病毒,将病毒感染刀豆蛋白A(concanavalin,ConA)激活的小鼠淋巴细胞,分别用流式细胞术、RT-PCR法鉴定HSV1-sr39TK和GFP基因在小鼠淋巴细胞的表达,用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法观察感染不同病毒的淋巴细胞对前体药物GCV的敏感性。结果不同启动子指导的HSV1-sr39TK及GFP基因均可在小鼠淋巴细胞表达,巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子驱动表达能力最强,磷酸甘油激酶(phosphoglycerokinase,PGK)启动子最弱。感染含CMV启动子病毒的淋巴细胞对GCV的IC50值最小。结论在小鼠淋巴细胞内CMV启动子驱动的慢病毒载体HSV1-sr39TK基因表达最强,对前体药物GCV敏感性最高。
- 高飞徐开林潘秀英鹿群先杜冰
- 关键词：慢病毒载体丙氧鸟苷淋巴细胞
- rhG-CSF和rhGM-CSF动员小鼠外周血干细胞效果的比较研究被引量：1
- 2007年
- 目的比较重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)和重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)单独、同时或序贯联合应用对小鼠外周血干细胞(PBSC)的动员作用,从而选择最佳的动员方案。方法72只BALB/c小鼠随机分成6组,每组12只。A组皮下注射rhG-CSF 400μg.kg-1.d-1;B组皮下注射rhGM-CSF 400μg.kg-1.d-1;C组皮下注射rhG-CSF 200μg.kg-1.d-1+rhGM-CSF 200μg.kg-1.d-1;D组皮下注射rhGM-CSF 400μg.kg-1.d-1(前3天)+rhG-CSF 400μg.kg-1.d-1(后2天);E组皮下注射rhG-CSF 400μg.kg-1.d-1(前3天)+rhGM-CSF 400μg.kg-1.d-1(后2天),连续注射5天。对照组连续5天皮下注射生理盐水0.2 ml。动态观察各组外周血白细胞计数、CD34+细胞比例、CFU-GM产率的变化。结果rhG-CSF与rhGM-CSF单独或联合使用时,外周血白细胞计数、CD34+细胞、CD34+CD38-细胞和粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)产率明显高于对照组(P<0.01)。实验组中,含有rhG-CSF组的外周血白细胞计数、CD34+细胞产率明显高于单用rhGM-CSF组(P<0.01);含有rhGM-CSF组的CD34+CD38-细胞产率明显高于单用rhG-CSF组(P<0.01);rhG-CSF与rhGM-CSF联合组CFU-GM产率高于单用rhG-CSF、rhGM-CSF组(P<0.05)。结论rhG-CSF联合rhGM-CSF方案可作为外周血干细胞动员的一个较好的选择。
- 高立艳徐开林潘秀英
- 关键词：外周血干细胞动员粒-巨噬细胞集落刺激因子CD34+细胞
- 逆转录病毒与慢病毒介导HSV-TK/GCV防治移植物抗宿主病的比较研究
- 2007年
- 移植物抗宿主病（GVHD）是限制异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）临床应用的最主要并发症，现有的防治方法均不理想，应用自杀基因系统防治GVHD是一个新的尝试。本实验将携带单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因的逆转录病毒和慢病毒分别感染供鼠（C57BL／6小鼠）脾细胞，感染后细胞与供鼠骨髓细胞混合移植到经Co^60γ射线照射后的受鼠（BABL/C小鼠），移植后分别给受鼠腹腔注射更昔洛韦（GCV），初步观察HSV-TK／GCV系统控制GVHD的效果，并在体内外实验中对两种载体进行比较研究。
- 杜冰徐开林朱锋高飞陈香梅潘秀英
- 关键词：移植物抗宿主病TK/GCV慢病毒介导逆转录病毒C57BL/6小鼠
- HSV1-TK、HSV1-SR39TK及GCV、ACV对小鼠T淋巴细胞的杀伤作用研究
- 2007年
- 目的观察慢病毒载体携带的单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1-TK)和突变型单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1-SR39TK)基因在小鼠T淋巴细胞的表达及前体药物丙氧鸟苷(GCV)、无环鸟苷(ACV)对小鼠T淋巴细胞的杀伤效应。方法用亚克隆技术将PCR扩增的HSV1-TK、HSV1-SR39TK基因分别连接至慢病毒载体,在TK、SR39TK基因后以内部核糖体进入位点(IRES)连接绿色荧光蛋白(GFP)基因,采用三质粒包装系统包装病毒,将病毒感染刀豆蛋白A激活的小鼠T淋巴细胞,然后通过CCK-8方法观察其对前体药物GCV、ACV的敏感性。结果慢病毒载体携带的HSV1-TK及HSV1-SR39TK基因均可在小鼠T淋巴细胞内高效表达,GCV和ACV对转导TK基因的淋巴细胞均有杀伤作用,含突变型TK基因的淋巴细胞对前体药物敏感性更高,后者对GCV的IC_(50)值比野生型小2.5倍,对ACV的IC_(50)值比野生型小17.4倍。结论表达HSV1-SR39TK基因的T细胞对GCV有更高的敏感性,对ACV也较敏感,应用HSV1-SR39TK基因进行防治GVHD的研究是更好的选择。
- 高飞徐开林潘秀英鹿群先杜冰
- 关键词：移植物抗宿主病HSV1-TKIRES
- 全文增补中
- PGK驱动逆转录病毒载体介导HSV-TK／GCV控制GVHD的研究被引量：1
- 2007年
- 目的：研究磷酸甘油酸激酶（PGK）启动子驱动的逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦（HSV-TK／GCV）系统在小鼠异基因骨髓移植（allo-BMT）后能否减轻移植物抗宿主病（GVHD）。方法：将转HSV-TK基因的逆转录病毒感染供鼠（C57BL/6鼠）脾淋巴细胞，感染后细胞与供鼠骨髓细胞混合移植给Coγ7射线照射后的受鼠（BALB／c鼠）。移植后腹腔注射GCV，用药1周，按移植后首次给药时间，分为GCV0d组、GCV7d组、GCV12d组。观察移植后受鼠生存期、存活率、GVHD发生率及严重程度、T细胞免疫重建（CD3、CD4、CD8）及异基因嵌合等指标。结果：TK／GCV0d组、TK／GCV7d组小鼠平均生存时间分别为（26.90±4.88）d、（27.00±4.80）d，较TK／GCV12d组（21.504±3.26）d和移植对照组（15.10±O.43）d明显延长（P〈0.05），TK／GCV0d组与TK／GCV7d组之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。对照组小鼠12～14d100％发生Ⅲ～Ⅳ级GVHD，实验组死亡小鼠有Ⅱ～Ⅳ级GVHD病理学改变，而长期生存小鼠仅出现Ⅰ～Ⅱ级GVHD。TK／GCV0d组、TK/Gcv7d组、TK／GCV12d组在移植后5、10、15d3个时间点检测CD4^＋ T细胞均高于对照组（P〈0.05），CD8^＋ T细胞均低于对照组（P〈0.05）。移植后30d检测10只受鼠异基因嵌合率均在95％～100％。结论：PGK启动子驱动的逆转录病毒载体介导HSV-TK／GCV系统能有效控制小鼠allo-BMT后GVHD，移植后早期预防性用药效果优于发生GVHD后治疗性用药。
- 朱锋徐开林杜冰陈香梅潘秀英
- 关键词：逆转录病毒载体HSV-TK/GCV移植物抗宿主病异基因移植
- 慢病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶／更昔洛韦系统抑制移植物抗宿主病的实验研究被引量：2
- 2007年
- 目的研究慢病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶／更昔洛韦（HSV-TK／GCV）系统对小鼠异基因骨髓移植（allo—BMT）后移植物抗宿主病（GVHD）的防治作用。方法将转染HSV-TK基因的慢病毒感染供鼠（C57BL／6小鼠）脾脏淋巴细胞，将感染后的淋巴细胞与供鼠骨髓细胞混合，移植给经。Co1射线照射后的受鼠（BALB／c小鼠）。分别于移植后当天、移植后7天（＋7天）和＋12天腹腔注射GCV25mg／kg×7d，观察受鼠生存期、GVHD发生率及严重程度、T细胞亚群（CD3、CD4、CD8）及异基因嵌合等指标。结果HSV-TK／GCV使用0天、＋7天、＋12天组受鼠生存时间分别为（30．10±5．21）d、（36．40±5．28）d、（28．20±4．82）d，三组生存时间均较移植对照组[（15．10±0．43）d]明显延长（P〈0．05）；HSV-TK／GCV＋7天组小鼠50d存活率达60％，高于HSV-TK／GCV0天（40％）和＋12天组（30％）（P〉0．05）。对照组小鼠全部发生Ⅲ～Ⅳ级GVHD，实验组死亡小鼠有Ⅱ～Ⅲ级GVHD病理学改变，而长期生存小鼠仅出现Ⅰ～Ⅱ级GVHD。在＋5，＋10，＋15d，3个时间点实验组小鼠CD4^＋细胞明显高于对照组（P〈0．05），CD8^＋细胞均低于对照组（P〈0．05）。＋30天受鼠异基因嵌合率为100％。结论慢病毒载体介导的HSV-TK／GCV系统能有效控制小鼠allo—BMT后GVHD；＋7天外周血白细胞数开始回升时用GCV控制GVHD效果最佳。
- 徐开林朱锋杜冰高飞程海潘秀英
- 关键词：胸苷激酶慢病毒骨髓移植移植物抗宿主病
- 慢病毒介导的突变型胸苷激酶对T淋巴细胞杀伤作用的实验研究被引量：3
- 2005年
- 目的观察慢病毒介导的突变型单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-sr39tk)及野生型HSV-tk对T细胞的体外杀伤作用,比较HSV-sr39tk/更昔洛韦(GCV)、HSV-sr39tk/阿昔洛韦(ACV)、HSV-tk/GCV、HSV-tk/ACV对T细胞存活率的影响。方法采用改良的磷酸钙沉淀法将包装质粒、包膜蛋白质粒和含目的基因的转移质粒共转染293T包装细胞,收集的病毒上清感染T细胞后,分别与不同浓度梯度的前体药物GCV和ACV作用4d后,MTT法测定细胞存活率。结果共转染293T细胞后获得较高滴度的慢病毒(2×106IU/ml)。前体药物GCV和ACV浓度在0～10.0μmol/L时转染HSV-sr39tk细胞(39tk+T细胞)存活率下降比较明显,GCV组细胞存活率由(96.04±3.23)%下降为(36.76±4.38)%,ACV组细胞存活率由(97.31±4.61)%下降为(43.75±8.99)%,而GCV和ACV浓度大于10.0μmol/L时,39tk+T细胞存活率下降趋势则减缓。统计显示39tk+T细胞对GCV、ACV均有敏感性(P值均<0.05);转染HSV-tk T细胞(tk+T细胞)对GCV有敏感性(P<0.05),而对ACV不具有敏感性(P>0.05);同一浓度时39tk+T细胞+GCV与tk+T细胞+GCV两组间T细胞存活率差异具有统计学意义(P<0.05)。结论慢病毒载体可高效、稳定地感染T细胞,同时不影响细胞的增殖,与野生型HSV-tk基因比较,表达突变型HSV-sr39tk的T细胞对GCV具有更高的敏感性,而且对ACV也具有敏感性。
- 徐开林潘秀英杨宇娟鹿群先李振宇何徐彭
- 关键词：慢病毒T淋巴细胞杀伤作用病毒感染基因治疗
