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甘肃省科技重大专项计划(0801NKDA003)

作品数：15 被引量：38H指数：4
相关作者：吴兵赵志强袁菲孔素娟刘方蕾更多>>
相关机构：兰州生物制品研究所有限责任公司阿拉巴马大学兰州生物制品研究所更多>>
发文基金：甘肃省科技重大专项计划“重大新药创制”科技重大专项国家科技重大专项更多>>
相关领域：医药卫生理学更多>>

文献类型

  • 11篇中文期刊文章

领域

  • 10篇医药卫生
  • 2篇理学

主题

  • 7篇球菌
  • 7篇脑膜炎球菌
  • 5篇脑膜
  • 5篇脑膜炎
  • 3篇免疫
  • 3篇免疫原性
  • 3篇结合疫苗
  • 3篇荚膜
  • 3篇荚膜多糖
  • 3篇C群
  • 3篇C群脑膜炎球...
  • 2篇血清
  • 2篇伤风
  • 2篇酸含量
  • 2篇破伤风
  • 2篇破伤风类毒素
  • 2篇唾液
  • 2篇唾液酸
  • 2篇唾液酸含量
  • 2篇酶联

机构

  • 10篇兰州生物制品...
  • 2篇阿拉巴马大学
  • 1篇兰州生物制品...
  • 1篇中国食品药品...

作者

  • 8篇吴兵
  • 8篇王晶
  • 7篇刘方蕾
  • 7篇袁菲
  • 7篇孔素娟
  • 7篇赵志强
  • 5篇王欣茹
  • 5篇谢贵林
  • 4篇侯亚莉
  • 3篇刘爱萍
  • 3篇罗树权
  • 3篇杨英英
  • 3篇李阿妮
  • 2篇刘佳
  • 2篇杨明
  • 2篇范锋锋
  • 2篇林纪胜
  • 1篇崔萱林
  • 1篇毛睿
  • 1篇乔瑞洁

传媒

  • 8篇中国生物制品...
  • 2篇微生物学免疫...
  • 1篇中华微生物学...

年份

  • 3篇2016
  • 3篇2015
  • 3篇2014
  • 1篇2012
  • 1篇2010
共 15 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
C群脑膜炎球菌家兔免疫血清的制备及其群特异性和相关方法专属性分析被引量：4
2014年
目的制备C群脑膜炎球菌家兔免疫血清,并进行群特异性和相关方法专属性分析。方法用制备的C群脑膜炎球菌菌液免疫青紫兰家兔,经耳缘静脉注射8×109个/ml菌液,0.5~1.0 ml/只,每周1、3、5免疫,共免疫4周,于第6周开始加强免疫,每周2次,连续3周,于末次免疫1周后,经颈动脉采血,分离血清,采用免疫双扩散法检测血清效价。采用ELISA、Western blot及火箭免疫电泳法分析其群特异性和相应方法专属性。结果建立了家兔免疫血清制备方法,制备的3份（1、2、3）免疫血清相应多糖抗体效价分别为1︰8、1︰8和1︰16。自制免疫血清1、3在使用工作浓度下,符合免疫学质量控制ELISA方法的特异性和专属性要求。自制免疫血清3可作为C群脑膜炎球菌结合物Western blot检测的Anti-PS血清,在该检测灵敏度下可完全达到与破伤风类毒素（TT）无交叉反应;血清1、2的轻微交叉反应可通过相应抗原预吸收血清消除,从而达到结合物Western blot检测的Anti-PS使用要求。自制3份免疫血清均可用于火箭免疫电泳分析。结论自制的家兔免疫血清可替代商品诊断血清,并达到了ELISA、Western blot及火箭免疫电泳法群特异性和相应方法专属性要求,可用于对C群脑膜炎球菌结合物制备过程的多糖抗原性分析及结合疫苗质量控制。
刘方蕾吴兵侯亚莉杨英英王晶于旭博范锋锋孔素娟袁菲赵志强谢贵林
关键词：脑膜炎球菌免疫血清特异性专属性
间苯二酚显色法测定唾液酸含量的影响因素被引量：2
2016年
目的探讨间苯二酚显色法测定唾液酸含量的影响因素,保证试验结果的一致性和准确性。方法按照《中国药典》2015版(三部)规定的唾液酸含量测定方法,分析单糖和二糖、载体蛋白质、不同溶液及化学试剂对该方法测定结果的影响;比较加热时间、加入有机相后的放置时间对检测结果的影响。结果选用的不同单糖和二糖中,蔗糖对试验的影响最大,低中高浓度时吸光值分别为0.065、0.196、0.420;其次是核糖,3种浓度的吸光值分别为0.037、0.113、0.187;高浓度的半乳糖、葡萄糖和乳糖的吸光值在0.02左右,对试验结果有一定影响,低浓度时对试验的影响可以忽略不计。N-乙酰甘露糖胺在低中高浓度时对结果均无影响。破伤风类毒素、重组绿脓杆菌外毒素A、小牛血清白蛋白、白喉类毒素对检测结果无影响,在500μg/m L质量浓度时吸光值均在0.008以下。选用的不同溶液对试验均无影响。选用的化学试剂中乙醇、低浓度的碳二亚胺以及己二酰肼对试验结果均无干扰,丙酮和脱氧胆酸钠均会对试验造成较大影响。反应液的吸光值随着加热时间的延长而增加,吸光值随着放置时间的延长而降低;第一小时内吸光值下降9%左右。结论在质控过程中,这些外源物质及操作过程对唾液酸含量测定结果有一定影响,应严格按照质量控制标准执行操作。
孔素娟于旭博袁菲王晶刘爱萍李阿妮吴兵谢贵林
关键词：唾液酸分光光度法影响因素
C群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物制备方法的比较被引量：4
2015年
目的对C群脑膜炎球菌多糖(group C meningococcal polysaccharide,GCMP)蛋白结合物的5种制备方法进行比较。方法以GCMP作为多糖抗原,破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和重组绿脓杆菌外毒素A(recombinant exoprotein A from Pseudomonas aeruginosa,r EPA)作为载体蛋白,采用5种结合路线制备7种结合物,并对其生化指标、免疫原性及磷酸铝佐剂的免疫增强效果进行检测。结果不同的结合方法均可将不同载体蛋白与多糖有效结合,在小鼠体内均具有良好的免疫原性。7种结合物的分子大小分布、游离多糖含量、多糖/蛋白值、回收率及免疫原性等指标有较大差异;采用相同结合方法,以TT和r EPA作为载体蛋白制备的结合物的生化指标及免疫原性无差异;磷酸铝佐剂可显著提高结合物的免疫原性。结论在选择GCMP蛋白结合物制备方法时应综合考虑原料多糖的化学结构、载体蛋白类型、结合路线、结合物纯化方法、质量控制方法和剂型等因素。本实验为GCMP蛋白结合物制备路线的选择提供了实验依据。
于旭博孔素娟袁菲王晶罗树权王欣茹李阿妮方红春赵志强谢贵林
关键词：破伤风类毒素免疫原性
人血清中A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖IgG抗体含量ELISA检测方法的建立被引量：1
2014年
目的建立人血清中抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖Ig G抗体含量的ELISA定量检测方法,并进行验证。方法筛选适用的酶标板,优化抗原包被浓度,确定ELISA检测过程的关键条件,对建立的ELISA方法的特异性、线性、准确性、精密度、最低检测值和稳定性进行验证,并建立实验室质控血清的质控检测范围。结果酶标板的板内CV为9.8%,板间CV为16.4%,符合检测使用要求。免疫血清经多糖吸收后,群特异性抗体含量与同群多糖吸收剂量呈明显的剂量依赖关系。12份美国CDC质控血清中各群Ig G抗体含量与血清的稀释度呈负相关,相关系数（r）和斜率（slope）均接近-1,线性关系良好;检测结果与CDC公布数据一致性良好,一致性相关系数A、C、W135、Y群分别为0.912 5、0.939 6、0.963 7和0.920 6,准确度较好。实验室内部质控血清Men20中各群Ig G抗体含量试验内和试验间精密度分别小于10%和20%,精密度较好;各血清群别的CV值均〈30%,稳定性较好;A、C、Y、W135群多糖Ig G抗体含量最低检测值分别为0.092、0.118、0.067和0.035μg/ml,质控血清的检测范围分别为：92.49~36.53、37.29~17.69、66.18~25.54和50.15~23.31μg/ml。结论建立了标准化的检测人血清中抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖Ig G抗体含量的定量ELISA方法,并确定了实验室日常用质控血清Men20的质控检测值范围。
王欣茹赵志强李亚南刘方蕾于旭博孔素娟范锋锋林纪胜叶强谢贵林
关键词：脑膜炎球菌荚膜多糖酶联免疫吸附试验
C群脑膜炎球菌结合疫苗的工艺稳定性及其免疫原性
2012年
目的研究C群脑膜炎球菌荚膜多糖(Group C meningococcal polysaccharide,GCMP)与破伤风类毒素(Tetanustoxoid,TT)结合疫苗的工艺稳定性及其免疫原性。方法以己二酸二酰肼(ADH)作为间隔剂,碳二亚胺(EDAC)为缩合剂,扩大量制备8批GCMP-TT结合物,以生化、免疫学方法分析8批GCMP-AH衍生物和GCMP-TT结合物的主要特性;将8批GCMP-TT结合物分别免疫NIH小鼠,ELISA法检测小鼠血清中特异性抗GCMP和抗TT的IgG抗体,分析其免疫原性。结果 8批GCMP-AH衍生物及GCMP-TT结合物各项生化检测指标基本一致,批间差异较小,均达到《欧洲药典》的规程(7.0版)要求,并具有良好的抗原性。免疫小鼠的血清中均产生了较高水平的抗GCMP和抗TT的特异性IgG抗体,与GCMP产生的特异性IgG抗体相比,差异有统计学意义(P<0.001);GCMP-TT结合疫苗第2针、第3针与第1针相比,免疫后产生的IgG抗体水平差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 GCMP-TT结合疫苗的制备工艺稳定、可靠,具有良好的免疫原性,并可诱导免疫记忆,为脑膜炎球菌结合疫苗的规模化生产提供了重要的实验依据。
吴兵刘方蕾王晶侯亚莉赵志强杨明崔萱林谢贵林
关键词：结合疫苗稳定性免疫原性
C、Y、W 135群脑膜炎球菌荚膜多糖化学结构核磁共振检测方法的建立被引量：5
2015年
目的建立基于核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)技术检测C群脑膜炎球菌荚膜多糖(group C meningococcal capsular polysaccharide,GCMP)、Y群脑膜炎球菌荚膜多糖(GYMP)和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖(GWMP)化学结构的方法。方法建立1H-NMR检测方法:使用布鲁克600 MHz超导傅里叶核磁共振谱仪,配置5 mm BBO正向宽带高分辨液体探头。脉冲程序为水峰压制(zgpr),温度为298 K(25℃)。具体参数设置如下:中心频率约为4.7 ppm;图谱宽度为7 211 Hz;采样时间为2.272 s;弛豫延迟时间为2 s;扫描次数为512次;信号经傅里叶转换后加入1.0 Hz的窗口函数,检测结果使用Topspin 3.0软件进行处理。验证该方法的专属性、重复性及中间精密性。结果 5批GCMP、GYMP和GWMP检测结果的CV值均小于0.35%;3个浓度GCMP、GYMP和GWMP在相同的操作条件下以及不同工作日间、不同实验员间的检测结果的CV值均小于0.35%。结论建立的1H-NMR检测方法简便、快速、准确,检测GCMP、GYMP和GWMP具有极高的专属性、重复性和中间精密性,适用于疫苗生产研究中GCMP、GYMP和GWMP样品的定性结构鉴定。
李阿妮于旭博罗树权胡浩孔素娟袁菲杨英英刘方蕾吴兵陈作江赵志强谢贵林
关键词：脑膜炎球菌荚膜多糖核磁共振
A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合物的制备及其工艺稳定性被引量：3
2010年
目的按初步确定的工艺,制备A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖(Group A Neisseria meningococcus capsular polysac charide,GAMP)与破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)的结合物,通过监测关键工艺参数,分析该工艺的稳定性。方法制备8批GAMP-TT结合物,经Sepharose4FF柱层析纯化后,进行各项生化鉴定,采用双向免疫扩散试验检测其抗原性,以结合物皮下免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清中抗GAMP及抗TT IgG抗体水平。结果制备的8批结合物工艺关键参数较稳定,均保持GAMP抗原特异性;免疫小鼠后,均可诱生较高水平的血清抗GAMP IgG抗体,并可诱生免疫加强应答。结论该制备工艺稳定,为GAMP-TT结合疫苗的研制提供了参考。
刘方蕾吴兵王晶袁菲赵志强杨明谢贵林
关键词：A群脑膜炎球菌荚膜多糖破伤风类毒素结合疫苗
成人免疫ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后血清中抗体水平的动态分析
2014年
目的：从血清抗体体外杀菌功能和IgG含量角度观察健康成人接种一剂ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后不同时间体内抗体的动态水平，探讨抗体功能和含量的相关性和疫苗的保护期限。方法对20名健康成人接种一剂四价脑膜炎多糖疫苗，分别采集免疫前和免疫后不同时期的血清。采用血清杀菌试验（SBA）和标准定量酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中杀菌抗体滴度和抗荚膜多糖IgG抗体含量。结果成人免疫前血清中存在一定水平的抗A、C、Y和W135群荚膜多糖抗体，并且除C群外，血清中针对A、Y和W135群球菌的杀菌抗体滴度都较高。免疫15d后，各群荚膜多糖抗体的含量和血清杀菌抗体滴度都较免疫前有了明显的升高（P＜0．05），并且在30～160d维持在较高的水平；免疫后近3年时杀菌抗体滴度和IgG抗体浓度降至免疫前水平。血清杀菌抗体滴度和IgG抗体浓度之间相关关系较弱（r＜0．3，P＞0．05），但免疫前后不同时间的受试者的血清杀菌抗体几何均数滴度（GMTs）和IgG抗体几何均数浓度（GMCs）之间具有良好的相关关系（r＞0．7，P＜0．05）。结论受试者免疫前后不同时间血清杀菌抗体GMTs和IgG抗体GMCs，在评价疫苗效果时具有一致性。接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗有效期大约3年。
王欣茹赵志强王浩刘佳刘爱萍于旭博何彦林乔瑞洁林纪胜谢贵林
关键词：酶联免疫吸附试验
测定唾液酸含量的改良间苯二酚-盐酸法的建立及验证被引量：6
2016年
目的建立测定脑膜炎球菌多糖、多糖衍生物及结合物中唾液酸含量的改良间苯二酚-盐酸法,并进行验证。方法以《中国药典》三部（2015版）测定多糖中唾液酸含量的间苯二酚-盐酸法为基础进行改良,去除有机相萃取步骤,优化方法中的检测波长（300~900 nm）及煮沸时间（10、15、20、25、30、35和40 min）;并对建立方法的线性范围、中间精密度及准确度进行验证。比较改良法与《中国药典》法对样品唾液酸含量及其层析分部产物中唾液酸含量测定结果的差异,同时检测乳糖对改良法测定唾液酸含量的影响。结果方法中最佳检测波长为569 nm,最佳煮沸时间为30 min。唾液酸对照品浓度在5~40μg/ml范围内与569 nm吸收值呈良好的线性关系,R2均〉0.999;3位实验人员在3个不同时间对样品中唾液酸含量测定9次结果的CV均〈3%;外加5、10、20μg/ml浓度的N-乙酰神经氨酸的回收率均在95%~105%之间。改良法与《中国药典》法检测的样品唾液酸含量差异无统计学意义（P〉0.05）,且两种方法的层析分部图谱一致。乳糖溶液浓度超过100μg/ml时对唾液酸测定结果的干扰较大。结论本实验建立的改良唾液酸测定法具有良好的线性、精密度和准确度,可用于脑膜炎球菌多糖、多糖衍生物和结合物唾液酸含量的测定。
袁菲于旭博孔素娟王晶王欣茹吴兵刘方蕾谢贵林
关键词：唾液酸含量
差异火箭免疫电泳定量检测四价脑膜炎球菌结合疫苗游离多糖方法的建立及验证被引量：3
2015年
目的建立差异火箭免疫电泳（differential rocket immunoelectrophoresis,DRIEP）定量检测四价脑膜炎球菌结合疫苗游离多糖的方法,并对该方法进行验证。方法制备非均一性抗体琼脂糖凝胶,建立脑膜炎A群、C群、Y群、W135群游离多糖的DRIEP定量检测法,并对该方法的专属性、分离效果、线性、重复性及稳定性进行验证。分别采用DRIEP法及DOC沉淀化学法对11批各群脑膜炎球菌单价结合物进行检测。结果各群多糖抗原只与其相应特异性抗体发生结合,无交叉反应;各群结合物或混合物中的TT可完全与多糖分离;A群、W135群游离多糖定量对照品在2.5~20μg/ml范围内,C群、Y群游离多糖定量对照品在2~10μg/ml范围内,与沉淀峰高度呈良好线性关系,R2均〉0.99;各群单价结合物的9次检测结果的CV值均〈15%;多价脑膜炎球菌结合疫苗中各群游离多糖含量均比较接近。DRIEP法检测值较DOC沉淀化学法高约1/2倍,但两种方法检测结果的高低趋势具有相似性。结论DRIEP法可用于四价脑膜炎球菌结合疫苗中游离多糖的定量检测,提高了该疫苗的质控水平。
侯亚莉于旭博刘方蕾杨英英吴兵刘佳王晶毛睿谢贵林
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