国家高技术研究发展计划(2008AA101007) 作品数:11 被引量:9 H指数:2 相关作者: 仓明 林嘉鹏 赵云程 刘东军 黄俊成 更多>> 相关机构: 内蒙古大学 新疆畜牧科学院 新疆农业大学 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 内蒙古自治区自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
牛早期胚胎发育中差异基因的表达研究 2009年 利用mRNA差异显示技术成功筛选到牛早期胚胎差异表达的3个基因,即calm3、trm112l和clip1,并通过RT-PCR技术检测了各基因在卵母细胞、8细胞期和囊胚期的表达情况。结果显示,在卵母细胞和8细胞期胚胎,基因calm3和trm112l的表达量无显著性差异,而在囊胚期的表达量与前两个时期的表达量存在显著性差异,推测这两个基因在牛胚胎发育过程中的表达可能属于母型调控,提示该基因在卵母细胞成熟和合子基因激活中起一定作用。基因clip1在牛卵母细胞、8细胞期和囊胚期的表达量均无显著性差异,可能既存在母型调控又存在合子型调控。基因calm3、trm112l和clip1在牛早期胚胎发育过程中mRNA表达量存在时间性差异,可能与其参与不同的生理活动有关。 张鑫 陈苏仁 栗雪冰 刘东军 仓明关键词:胚胎发育 胚胎 基因 白细胞介素6及其受体在绵羊卵母细胞成熟过程中的表达 被引量:1 2009年 采用实时定量PCR技术检测了不同成熟培养时间绵羊卵母细胞和卵丘细胞白细胞介素6基因(interleukin-6 gene,IL-6)及其受体基因(interleukin-6 receptor gene,IL-6R)mRNA的相对表达量。结果显示,在体外成熟培养过程中,卵母细胞和卵丘细胞中持续表达IL-6及其受体IL-6R mRNA,培养4-8h,其相对表达量呈现显著升高,随后则降低;在16-20h时卵母细胞中IL-6 mRNA表达重新升高;相应的卵丘细胞在12-16h时IL-6R mRNA表达也升高。绵羊卵母细胞和卵丘细胞中IL-6和IL-6R mRNA的持续表达以及动力学变化提示了白细胞介素6在卵母细胞成熟过程中具有潜在调控作用。 杨美玲 赵锡安 刘东军 仓明关键词:白细胞介素6 卵母细胞 体外成熟 实时定量PCR 3种药物对老化卵母细胞4种母源mRNA水平的影响 2010年 利用Real-Time PCR技术定量分析了绵羊(Ovis aries)卵母细胞在生长-成熟-老化过程4种母源mRNA(Mater、Zar1、Dnmt1、GDF9)发生的动态变化,以及3种药物(咖啡因、DTT和矾酸盐)对老化卵母细胞母源mRNA水平的影响。结果显示,除Dnmt1在12 h开始下降外,卵母细胞中其他3个基因的表达量都是从生发泡期逐渐下降,且在体外培养至24 h降到最低,然后随着卵母细胞的老化又逐渐上升。其中GDF9和Mater 2个基因在30 h组的卵母细胞中的表达量显著高于24 h组卵母细胞(P<0.05)。30 h卵母细胞中Zar1和Dnmt1的转录水平与24 h卵母细胞差异不显著(P>0.05)。除Zar1外,咖啡因和DTT都显著降低了老化卵母细胞中其他3个基因的表达量(P<0.05),且所有基因表达量与24 h组卵母细胞差异不显著(P>0.05)。矾酸盐处理后的卵母细胞其4种母源mRNA水平都是最高,除Zar1外其他3个基因表达量都显著高于24 h组(P<0.05)。结论是,Mater、Zar1、Dnmt1、GDF9 4种母源mRNA水平与卵母细胞质量成反比,咖啡因和DTT能在一定程度上延缓卵母细胞的衰老,改善卵母细胞质量;而矾酸盐则加速了卵母细胞老化进程,降低了卵母细胞质量。 叶小芳 陈静波 侯敏 汪立芹 赵云程 林嘉鹏 黄俊成关键词:咖啡因 DTT 构建骨骼肌特异表达人FS基因载体及其稳定转染绵羊胎儿成纤维细胞 被引量:1 2011年 旨在构建骨骼肌特异表达人卵泡抑制素(follistatin,FS)基因载体并得到其稳定转染的蒙古绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。首先通过RT-PCR方法克隆得到人FS基因cDNA序列,然后与猪骨骼肌特异表达启动子α-actin以及红色荧光蛋白表达元件连接,构建成FS基因骨骼肌特异表达载体pCFCDS。脂质体介导外源表达载体转染绵羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选后得到稳定转染的绵羊转基因细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,分析转基因细胞系的核型和生长状况。结果显示,成功构建得到绵羊骨骼肌特异表达人FS基因的真核表达载体,并得到其稳定转染的转基因绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。 王玮 袁建龙 金永 朱兵 岳群华 梁浩 郭旭东 刘东军 仓明关键词:卵泡抑制素 乙二醇及二甲基亚砜对小鼠卵母细胞冷冻后纺锤体及孤雌激活后发育能力的影响 2010年 试验采用EFS30、DFS30和EDFS30冷冻液对小鼠MⅡ期卵母细胞进行玻璃化冷冻,并对冷冻-解冻后卵母细胞存活率、纺锤体形态正常率、孤雌激活胚胎的发育能力进行研究。结果表明:利用EDFS30冷冻-解冻卵母细胞后的存活率(98.3%)显著高于EFS30组(88.2%)和DFS30组(89.5%)(P<0.05);DFS30组纺锤体形态正常率(44.9%)显著低于其他各组;而孤雌激活后EFS30、DFS30、EDFS30和对照组之间卵裂率(59.1%、56.3%、59.3%和60.0%)、囊胚率(52.0%、53.7%、61.2%和62.1%)和囊胚细胞数(49、48、50、50)均无显著性差异(P>0.05)。综上所述,3种冷冻液冷冻卵母细胞孤雌激活后均可获得较好的体外发育能力,其中EDFS30较适宜小鼠MⅡ期卵母细胞冷冻保存。 裴燕 索伦 王亮 朱士恩关键词:乙二醇 玻璃化 纺锤体 冷冻保护剂在卵母细胞上的研究进展 被引量:1 2009年 系统综述了细胞松弛素B、紫杉醇、咖啡因和谷胱甘肽4种冷冻保护剂在增强卵母细胞抗冻能力方面的研究,并分析了Bcl-2和Bax2种凋亡基因的表达程度与卵母细胞凋亡之间的关系。 郭娟 王志琴 赵云程 林嘉鹏 黄俊成关键词:冷冻保护剂 卵母细胞 抗氧化剂 牛体外发育胚胎特定阶段差异表达基因研究 被引量:2 2010年 [目的]研究不同发育时期牛体外受精胚胎在基因表达模式上的差异。[方法]利用单个胚胎mRNA差异显示技术,对单个8细胞期胚胎与囊胚进行mRNA差异显示,获得1条特异表达条带,对其进行克隆、测序,并与GenBank进行对比。[结果]该序列与牛核糖体蛋白L31(ribosomal protein L31,RPL31)基因序列具有99%的同源性。采用实时定量PCR技术检测8细胞期和囊胚期胚胎RPL31的mRNA表达量,结果表明,RPL31在8细胞期胚胎的相对表达量为囊胚期胚胎的3.2倍。[结论]为揭示和阐明控制牛早期胚胎发育的相关机理提供依据。 栗雪冰 仓明关键词:牛胚胎 基因 实时定量PCR 玻璃化冷冻对小鼠卵母细胞透明带超微结构变化及体外受精效果的影响 被引量:3 2013年 本实验采用OPS法玻璃化冷冻小鼠卵母细胞,通过扫描电镜观察透明带表面物理特性的变化。旨在研究冷冻导致小鼠卵母细胞透明带表面超微结构的变化以及冷冻卵母细胞体外受精后胚胎发育率和精子穿透透明带能力的影响。结果表明:冷冻后透明带表面网状结构消退或消失,发生熔融样变化。冷冻组中A型透明带比例(57.14%)显著低于毒性实验组(79.32%)及对照组(81.25%)(P<0.05),而发生熔融样变化的比例显著高于其他两组(P<0.05)。体外受精后,冷冻组的卵裂率和囊胚发育率(60.90%,39.51%)均显著低于毒性实验组及对照组(81.74%,55.72%;87.47%,61.63%)。体外受精4 h,冷冻组透明带平均结合精子数(10.56)与毒性实验组和对照组(10.26,10.21)间均无显著性差异(P>0.05);但受精后对透明带消化处理发现,冷冻组紧密结合精子的平均个数(3.28)与其他两组(5.11,5.21)存在显著性差异(P<0.05)。结果显示,冷冻导致透明带表面物理特性的变化,进而造成受精率下降。 袁佃帅 莫显红 王亮 梁莹 朱士恩关键词:透明带 玻璃化冷冻 扫描电镜 超微结构 细胞松弛素B对玻璃化冷冻牛卵母细胞的影响 被引量:1 2010年 用不同浓度细胞松弛素B(CB)预处理体外成熟牛卵母细胞,以固体表面玻璃化(SSV)法冷冻解冻后的存活率和孤雌激活发育能力作为评价指标,探讨CB对体外成熟牛卵母细胞冷冻保存的影响。结果显示,存活率方面,各浓度CB处理组与对照组无显著差异(P>0.05);激活后卵裂率方面,20μg/mLCB处理组显著高于对照组(47.67%和30.25%,P<0.05);囊胚率方面,20μg/mLCB处理组极显著高于对照组(9.00%和1.75%,P≤0.01),同时还显著高于其他4个处理组(P<0.05)。研究表明,CB在玻璃化冷冻过程中的保护作用存在一定浓度的依赖性,其中用20μg/mLCB浓度处理最适于牛成熟卵母细胞玻璃化冷冻效果的改善。 郭娟 王志琴 赵云程 林嘉鹏 黄俊成关键词:卵母细胞 玻璃化冷冻 细胞松弛素B 细胞松弛素B对牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响 2009年 本试验通过玻璃化冷冻前不同浓度细胞松弛素B(cytochalasin-B,CB)预处理来分析CB对牛GV期卵母细胞固体表面玻璃化(SSV)冷冻后发育潜力的影响。试验结果表明,玻璃化冷冻后,CB处理组和未处理组之间卵母细胞成熟率差异不显著(P>0.05),但均显著低于体外培养组。说明试验中所用CB浓度(2.5、7.5、15、20和30μg/mL)对牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的改善作用不明显。 郭娟 王志琴 赵云程 林嘉鹏 黄俊成关键词:玻璃化冷冻 细胞松弛素B GV期卵母细胞