福建省自然科学基金(2010J01212)
- 作品数：4 被引量：10H指数：1
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- 家禽类白细胞介素-2的研究进展及其应用前景被引量：1
- 2012年
- 白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)是一种由T淋巴细胞分泌的T细胞生长因子,具有多种免疫调节功能和生物学活性。随着分子生物学、免疫学理论和技术的发展,应用重组表达技术生产IL-2已成为目前研究的热点。本文主要对家禽类IL-2基因的克隆、重组表达、纯化及其免疫活性等方面的研究进展作一综述,并对其应用前景进行展望。
- 韩龙杜翠红
- 关键词：家禽白细胞介素-2
- 葡萄糖-6-磷酸异构酶研究进展被引量：7
- 2012年
- 葡萄糖-6-磷酸异构酶(Glucose phosphate isomerase,GPI)是一类多功能蛋白质,在糖代谢的糖酵解中催化葡萄糖-6-磷酸和果糖-6-磷酸之间的可逆反应,同时它还具有其他重要生理生化功能。人体GPI的缺乏可导致非球型血红细胞贫血症以及神经功能的紊乱,GPI还具有细胞因子的活性,并与类风湿关节炎的发生有密切关系。此外在渔业研究方面有研究表明,鱼体GPI具有特异抑制鱼体自身肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶活性的功能等。文章GPI的功能、空间结构、酶学性质及克隆表达等方面简要介绍了目前研究的一些情况。
- 韩龙杜翠红
- 关键词：葡萄糖-6-磷酸异构酶蛋白质结构酶学性质克隆表达
- 大肠埃希菌与酿酒酵母偶联合成S-腺苷甲硫氨酸被引量：1
- 2015年
- 目的为大规模工业化生产S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)提供一套经济合理的生产工艺。方法将经DNA序列测定正确的SAM合成酶基因(SAMS)片段,经Eco RⅠ和NotⅠ双酶切,亚克隆至大肠埃希菌表达载体p ET-28a上,构建SAMS基因重组表达质粒p ET-28a-SAMS。将重组表达质粒转入大肠埃希菌表达宿主BL21(DE3),构建大肠埃希菌表达菌株BL21(p ET-28a-SAMS)。采用混合悬浮培养法,利用含有SAMS基因的重组大肠埃希菌BL21(p ET-28a-SAMS)中的SAM合成酶系和酿酒酵母JM-310中的ATP生物合成酶系,构建一个以葡萄糖为能源的中间偶合ATP再生系统,并对两种细胞的偶联合成比例、偶联时间、通透剂的种类及浓度、偶联缓冲液主要成分的浓度进行优化。结果经双酶切及菌落PCR鉴定证明,重组表达质粒p ET-28a-SAMS及大肠埃希菌表达菌株BL21(p ET-28a-SAMS)构建正确。大肠埃希菌BL21(p ET-28a-SAMS)与酿酒酵母的最佳偶联合成比例为4∶1,最佳偶联时间为5 h,添加5%甲苯通透效果最好,200 mmol/L磷酸缓冲液、200 mmol/L葡萄糖、10 mmol/L腺苷、30 mmol/L Mg Cl2·6H2O、30 mmol/L L-甲硫氨酸为最适偶联缓冲体系。最佳偶联条件下,偶联系统中SAM的浓度最高达1.7 g/L,对照组中SAM的浓度为0.17 g/L。结论本研究建立的方法操作方便,工艺简单,为SAM的廉价生产提供了一条新的途径。
- 魏晓楠燕龙龙李婷李欢杜翠红
- 关键词：大肠埃希菌酿酒酵母偶联S-腺苷甲硫氨酸
- 鲫鱼MBSP的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备被引量：1
- 2017年
- 构建鲫鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)的原核表达菌株Rosetta(pET28aMBSP),获得重组MBSP,以制备MBSP多克隆抗体。将鲫鱼MBSP全长基因(MBSP)借助表达载体pET-28a构建重组表达菌株Rosetta(pET28a-MBSP),并进行诱导表达后获得重组MBSP。利用Ni-NTA agarose亲和层析柱纯化重组蛋白并进行质谱鉴定。以纯化后的重组MBSP作为抗原免疫新西兰兔,获得MBSP多克隆抗体。分别采用ELISA和Western blot技术测定其效价和特异性。诱导表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析、Western blot检测及质谱鉴定,结果表明该蛋白质为重组MBSP,其相对分子质量约为28×10~3,与天然MBSP大小一致,主要以包涵体形式存在。将其免疫兔子后,从血清中获得了与MBSP发生特异性反应的高效价多克隆抗体。本研究中成功表达和纯化了重组MBSP蛋白,制备了高效价的特异性MBSP多克隆抗体,为MBSP的相关研究奠定基础。
- 李婷李欢陈海英杜翠红
- 关键词：原核表达蛋白纯化WESTERNBLOT多克隆抗体
