博士科研启动基金(XJ201013)
- 作品数：8 被引量：29H指数：4
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- RBP4分子RNAi载体的制备及对人肝细胞系LO2中ERK信号通路的影响
- 2012年
- 目的制备人视黄醇结合蛋白4(RBP4)分子RNAi载体,检测其干涉人肝细胞系LO2中RBP4的表达后对ERK1/2表达及磷酸化和葡萄糖摄取的影响。方法分别构建针对RBP4基因表达框5'端和3'端的干涉载体及真核表达载体,经测序和酶切鉴定后将载体转染LO2,RT-PCR和Western blot法确定其干涉RBP4表达的效率,选择干涉较高的载体用于后续实验;Western blot检测ERK1/2的表达及磷酸化水平的改变,葡萄糖氧化酶法检测上清液中葡萄糖的残留量。结果构建的真核表达载体和干涉载体经酶切、测序鉴定结果正确,并有明显的高表达或干涉效果。Western blot结果表明ERK1/2的表达量无明显变化,RBP4高表达组其磷酸化显著下降,RBP4干涉组其磷酸化显著上升。胰岛素刺激后RBP4高表达组的葡萄糖摄取明显下降,RBP4干涉组的葡萄糖摄取明显增加。结论成功制备RBP4基因的干涉载体并应用于LO2细胞中ERK1/2通路的研究,为后续RBP4的进一步功能研究奠定基础。
- 陈冠军陈利春钱磊陈莉陈兵鲁云霞
- 关键词：视黄醇结合蛋白4RNA干涉葡萄糖摄取
- 内质网应激介导高脂及棕榈酸致骨骼肌胰岛素抵抗及非诺贝特的干预机制初探
- 2014年
- 目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)介导高脂及棕榈酸致骨骼肌胰岛素抵抗及非诺贝特(fenofibrate,FF)的干预机制。方法♂SD大鼠随机分为标准饮食组(SCD)、高脂饮食组(HFD)及治疗组(HFD+FF)。高脂组和治疗组先分别给予高脂饮食20周,高脂组继续给予高脂饮食8周,治疗组给予非诺贝特(30 mg·kg-1·d-1)灌胃治疗8周。分析大鼠胰岛素抵抗的改善作用、骨骼肌葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子GADD153(CHOP)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)基因的表达。将骨骼肌细胞C2C12分为正常对照组(NC组)、模型组(棕榈酸组,PA)、阳性对照药组(衣霉素组,TM)、治疗组(棕榈酸+非诺贝特酸,PA+FA),分别检测GRP78、CHOP、Akt和pAkt的表达。结果与SCD组相比,HFD组大鼠体重和血脂水平明显增高,出现明显的胰岛素抵抗,GRP78和CHOP基因表达水平均明显上调;与HFD组相比,HFD+FF组上述指标均出现明显改善。与NC组相比,PA组GRP78和CHOP基因表达明显增加,p-Akt明显下调;与PA组相比,PA+FA组GRP78和CHOP基因表达明显降低,p-Akt明显上调。结论非诺贝特有改善骨骼肌细胞胰岛素抵抗的作用,这可能与其降低ERS中CHOP和GRP78的表达有关。
- 鲍莹莹鲁云霞陈冠军程静静章秋
- 关键词：内质网应激高脂棕榈酸非诺贝特
- 非诺贝特对高脂血症大鼠肝脏氧化应激和内质网应激的影响被引量：8
- 2014年
- 目的:研究非诺贝特对高脂血症大鼠肝脏氧化应激和内质网应激的影响。方法:12周高脂饮食建立高脂血症大鼠模型,非诺贝特[100 mg/(kg·d)]灌胃治疗4周。糖耐量和胰岛素耐量实验分析胰岛素抵抗的改善作用,检测大鼠空腹血糖、胰岛素、血脂指标,油红染色分析肝脏脂质沉积,肝匀浆测定总SOD、GSH和T-AOC等氧化应激指标,Realtime RT-PCR、Western blot分析肝组织GRP78的mRNA和蛋白表达变化。结果:高脂血症大鼠经非诺贝特治疗后糖耐量和胰岛素耐量明显改善,空腹血胰岛素、TG、TC水平均显著降低(P<0.05),肝脏组织切片中脂滴的数目和大小均明显减少,T-SOD水平明显升高(P<0.05),GSH和T-AOC水平升高,但差异无显著性(P>0.05),GRP78的mRNA、蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:非诺贝特具有明显的改善胰岛素抵抗和调脂作用,可能与其减少氧化应激进而降低内质网应激有关。
- 周卫凤沈馨如汪凌云章秋鲁云霞
- 关键词：非诺贝特高脂血症胰岛素抵抗氧化应激内质网应激
- 豹皮樟总黄酮对实验性2型糖尿病大鼠胰腺的保护作用及部分机制研究被引量：4
- 2014年
- 目的研究豹皮樟总黄酮(TFLC,Total Flavonoids of Litsea Coreana)对实验性2型糖尿病SD大鼠胰腺的保护作用及部分机制。方法以本实验室改良的方法建立2型糖尿病大鼠模型,将成模大鼠分为模型组和治疗组,治疗组分别采用小剂量TFLC(STFLC)和大剂量TFLC(LTFLC)治疗6周。取胰腺组织作胰岛素的免疫组化、氧化应激指标(GSH、T-SOD、Mn-SOD和T-AOC)和PTP1B的蛋白表达分析。结果 TFLC治疗组胰岛面积显著增加,胰腺的氧化应激明显减轻,胰腺中PTP1B的蛋白表达显著降低,且有一定的剂量效应。结论 TFLC具有明显的保护胰岛作用,其机制可能与减少胰腺中的氧化应激和PTP1B蛋白表达有关,且表现为一定的剂量效应。
- 周卫凤汪凌云孙玉秀鲁云霞陈冠军
- 关键词：豹皮樟总黄酮2型糖尿病胰腺PTP1B
- 非诺贝特保护非酒精性脂肪性肝病小鼠胰岛素抵抗作用机制的探讨被引量：4
- 2014年
- 目的研究非诺贝特改善非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠的胰岛素抵抗是否与内质网应激(ERS)有关。方法采用高热量高胆固醇饮食(HCD)建立NAFLD小鼠模型,非诺贝特40 mg/(kg·d)灌胃治疗2周,葡萄糖耐量试验(GTT)和胰岛素耐量试验(ITT)分析胰岛素抵抗的改善作用,检测血清血脂和丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)指标,HE及油红O染色观察肝脏组织的病理学变化,Real-time PCR和Western blot法检测过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、ERS标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和转录因子GADD153(CHOP)的表达。结果与正常饮食(SCD)组相比,HCD组小鼠胰岛素抵抗明显,血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)显著升高(P<0.01,P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显降低(P<0.01),肝细胞内有大小不等的脂滴形成,可见气球样变的肝细胞及炎性细胞浸润;PPARα、GRP78 mRNA及蛋白表达显著降低,CHOP mRNA及蛋白表达显著升高。与HCD组相比,HCD+非诺贝特(HCF)组小鼠血清TG明显降低(P<0.05),肝细胞脂滴含量、变性肝细胞及浸润的炎细胞明显减少,PPARα、GRP78mRNA及蛋白表达明显升高,CHOP mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论非诺贝特有明显的改善NAFLD小鼠胰岛素抵抗、降低TG的作用,这可能与激活PPARα及减轻ERS有关。
- 沈馨茹鲁云霞章秋
- 关键词：非诺贝特非酒精性脂肪性肝病胰岛素抵抗内质网应激PPARΑPPARΑ
- 人肝细胞核因子-1β基因cDNA全长的克隆与表达
- 2011年
- 目的构建人肝细胞核因子-1β(hHNF-1β)基因cD-NA全长的原核表达质粒[pET-28a(+)-hHNF-1β]并在大肠杆菌(E.Coli)中高效表达。方法提取正常成人肝脏组织的总RNA,RT-PCR后的扩增产物回收,构建克隆载体pMD-HNF-1β,设计带酶切位点BamHⅠ和HindⅢ的引物,PCR后酶切连入pET-28a(+)中,转化DE3,测序后IPTG诱导表达,Western blot检测其特异表达,并对重组hHNF-1β(rhH-NF-1β)诱导表达时IPTG的浓度、时间和温度等条件进行了优化。结果测序证实所得的hHNF-1βcDNA序列与其在GenBank中的序列一致,重组质粒pET-28a(+)-hHNF-1β的双酶切结果与预期大小完全一致。IPTG诱导的最佳浓度是0.04 mmol/L,时间为6 h,温度为37℃。结论成功克隆和构建了hHNF-1β基因的原核表达载体并对诱导表达的条件进行了优化,为进一步的功能分析奠定基础。
- 陈冠军汪凌云钱磊徐少聪杨坤常玲陈兵鲁云霞
- 关键词：包涵体
- 白藜芦醇通过减缓内质网应激及增加eNOS的表达改善高热量高胆固醇饮食引起的内皮损伤被引量：6
- 2014年
- 目的探讨白藜芦醇改善高热量高胆固醇饮食引起的血管内皮损伤的机制是否与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)及内皮型一氧化氮合酶(e NOS)表达的改变有关。方法将24只♂C57BL/6小鼠随机分为标准饮食组(SCD)、高热量高胆固醇饮食组(HCD)及高热量高胆固醇饮食+白藜芦醇组(HCD+RES,白藜芦醇,400 mg·kg-1·d-1),共12周。观察胸主动脉内皮的病理学变化,检测eNOS的表达和ERS上下游相关基因的表达。将血管内皮细胞(MAEC)分为正常对照组(NC组)、模型组(棕榈酸组,PA)、中浓度RES药物对照组(RES)、低中高剂量RES治疗组(RES dose+PA),观察其对棕榈酸(PA)诱导的小鼠MAEC增殖的影响,检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子GADD153(CHOP)蛋白和eNOS蛋白的表达。结果与SCD组相比,HCD组小鼠胸主动脉管壁明显增厚,弹力纤维排列紊乱,ERS上下游基因表达明显升高(P<0.05),eN OS蛋白表达减少;与HCD组相比,HCD+RES组血管弹力纤维排列明显改善,ERS相关基因的表达水平明显降低(P<0.05),eNOS蛋白表达增加。与NC组相比,PA组细胞增殖明显减少(P<0.05),GRP78和CHOP表达明显增加(P<0.05),eNOS表达降低,中、高剂量RES干预后MAECs增殖明显增强(P<0.05),GRP78和CHOP表达明显减少(P<0.05),eNOS蛋白表达增加。结论白藜芦醇有明显的改善高脂饮食引起的内皮损伤和PA诱导的抑制内皮细胞增殖作用,可能与其减缓ERS、增加eNOS的表达有关。
- 程静静陈莉李朝飞陈冠军鲍莹莹鲁云霞
- 关键词：内质网应激内皮损伤白藜芦醇
- 白藜芦醇改善高脂血症小鼠脂肪组织胰岛素抵抗的机制探讨被引量：7
- 2014年
- 目的探讨白藜芦醇对高脂血症小鼠2种白色脂肪组织胰岛素抵抗相关基因瘦素(Leptin)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响。方法24只雄性C57BL/6小鼠随机分为标准饮食组(SCD)、高热量高胆固醇饮食组(HCD)及高热量高胆固醇饮食+白藜芦醇组[HCD+RES,白藜芦醇400 mg/(kg·d),12周]。葡萄糖耐量实验和胰岛素耐量实验分析胰岛素抵抗的改善作用,检测血脂指标,称取皮下脂肪(SAT)和肾周脂肪组织(VAT)重量,HE染色检测脂肪组织的病理学变化,免疫组化和实时荧光定量PCR分析Leptin、TNF-α、GRP78的胞内分布和基因表达的改变。结果 HCD组小鼠出现明显的胰岛素抵抗,血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白C(LDL-C)显著增高,高密度脂蛋白C(HDL-C)明显降低,体重、SAT、VAT的重量均明显增加,脂肪细胞体积明显增大,Leptin、TNF-α、GRP78的mRNA和蛋白表达显著增加,且均位于胞质中;白藜芦醇能显著改善胰岛素抵抗,明显降低体重和逆转血脂水平变化,明显下调SAT和VAT中Leptin、TNF-α、GRP78的蛋白表达和分布,显著降低SAT中Leptin、TNF-α、GRP78和VAT中Leptin、TNF-αmRNA的表达。结论白藜芦醇具有明显的改善胰岛素抵抗和降脂作用,其机制可能是通过抗炎、减少Leptin表达和内质网(ER)应激有关,但对不同部位白色脂肪组织基因表达的影响差异不大。
- 陈莉陈冠军陈兵程静静鲁云霞
- 关键词：白藜芦醇高脂血症小鼠白色脂肪组织胰岛素抵抗
