国家自然科学基金(30400440)
- 作品数：7 被引量：17H指数：2
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- 肺癌原代细胞和细胞系A549对肿瘤浸润性淋巴细胞体外增殖的抑制作用被引量：1
- 2006年
- 目的研究肺癌原代细胞和细胞系A549对肿瘤浸润性淋巴细胞的抑制作用及其临床意义。方法分离和培养肺癌细胞及TIL细胞,用MTT法检测原代肺腺癌细胞及腺癌细胞株A549对TIL体外增殖的抑制作用及FasL抗体对TIL的保护作用。结果原代肺癌细胞及A549细胞株对TIL均有不同程度的抑制作用。结论肺癌细胞对TIL细胞的抑制作用可能是机体逃避免疫攻击的机制之一。
- 张国强蒋耀光王如文林一丹
- 关键词：A549细胞TIL
- COX-2与EGFR信号通路的联合抑制在晚期非小细胞肺癌治疗中的应用被引量：2
- 2016年
- 非小细胞肺癌对表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)的耐药问题已成为研究的热点。最近研究发现EGFR和COX-2信号通路之间存在着复杂的相互联系和作用,抑制COX-2信号通路能否提高EGFR-TKIs的治疗效果成为目前的热点。本文以此为基础,全面介绍联合抑制COX-2与EGFR信号通路在晚期非小细胞肺癌治疗中应用的研究进展。
- 邓汉宇王玺李刚刘琦林一丹
- 应用肺癌细胞系诱生肿瘤特异性T细胞的初步研究
- 2007年
- 目的探讨通过构建表达人白细胞抗原(HLA)HLA-A2的肺癌细胞系以诱生肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。方法将编码HLA-A2基因的质粒pcDNA3.1D/V5转染人肺腺癌A549细胞,得到能够稳定表达HLA-A2的肺腺癌细胞系。将其用丝裂霉素(MMC)处理后,行混合淋巴细胞肿瘤细胞培养(mixed lymphocyte tumor cell culture,MLTC)以诱导HLA-A2+的健康人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL)产生肿瘤特异性CTL,并通过特异性杀伤实验、单克隆抗体阻断实验、淋巴细胞增殖实验进行检验。结果HLA-A0201基因在A549细胞中的瞬时与稳定表达率分别为0.32、0.91。成功获得稳定表达HLA-A2的A549细胞株。MLTC诱导最终产生4组T淋巴细胞,且符合肿瘤特异性CTL的形态学特征与大量增殖的特点,但CTL杀伤实验和单克隆抗体阻断实验结果示肿瘤细胞未被有效杀伤,可能与肿瘤特异性CTL的数量较少及活性较低有关。结论本研究通过构建表达HLA-A2的肺癌细胞系,对建立肿瘤特异性CTL模型作了初步探讨,为进一步完善肺癌特异性CTL细胞模型并为研究肿瘤免疫逃避、免疫耐受及反杀伤淋巴细胞等生物学行为打下基础。
- 邓波林一丹王如文蒋耀光徐银祥
- 关键词：人白细胞抗原细胞毒性T淋巴细胞
- 利用PCR-SSP法研究肺腺癌细胞系A549、Calu-6的HLA-ABDR等位基因被引量：2
- 2006年
- 背景和目的已有的研究表明人类白细胞抗原(HLA)在抗原呈递及T细胞识别抗原的过程中起关键作用,此外还与肿瘤细胞的免疫杀伤及免疫逃避有着密切的关系。本研究探讨了人肺腺癌细胞系A549、Calu6中HLA-A、HLA-B、HLA-DR等位基因的存在状况。方法分离A549、Calu6细胞DNA,分别行PCRSSP法扩增、电泳后紫外透射扫描,根据反应格局表对HLA-A、HLA-B、HLA-DR进行判定。结果A549与Calu6细胞中HLAA、HLAB基因较杂合子均有缺失,而HLA-DR基因无缺失。A549细胞HLAABDR的基因分型为HLA-A30、HLA-B44、HLA-DR7/HLADR53。Calu6细胞HLAAB-DR的基因分型为HLAA01、HLAB08、HLADR17/HLADR52。结论肺腺癌中存在HLAⅠ和HLAⅡ基因。HLAⅠ基因可能在肿瘤细胞传代过程中发生选择性丢失,而HLA-DR基因完整保留。检测肿瘤HL-A对了解其免疫学行为及建立肿瘤特异性杀伤淋巴细胞(CTL)模型具有重要意义。
- 邓波林一丹王如文蒋耀光
- 关键词：肺腺癌细胞人类白细胞抗原PCR-SSP法
- RNA干扰肺癌细胞H460 FasL表达对T细胞凋亡的影响被引量：11
- 2007年
- 背景与目的已有的研究表明肺癌细胞可通过上调Fas配体(FasL)表达、借助FasL/Fas凋亡途径反杀伤Fas阳性肿瘤浸润淋巴细胞(TIL),主动逃避免疫监视,导致肿瘤局部抗肿瘤免疫下降。本研究旨在探讨遗传修饰调节肺癌细胞FasL基因表达对T细胞凋亡的影响。方法通过质粒载体,将体外化学合成的靶向FasL的小干扰RNA(siRNA)直接转染人大细胞肺癌细胞株H460,采用RT-PCR和Westernblot技术观察肺癌细胞FasLmRNA及蛋白表达的变化及其诱导T细胞凋亡的改变。结果化学合成的靶向FasL基因的siRNA能够显著下调肺癌细胞H460FasLmRNA和蛋白表达水平,产生序列特异性干扰效果。RNA干扰(RNAi)抑制H460细胞FasL表达后可以降低和逆转肺癌细胞诱导的T细胞凋亡,恢复T细胞增殖能力。结论FasL是一新的具有发展前途的肺癌基因治疗靶位。
- 向明章蒋耀光王慧春林一丹
- 关键词：非小细胞肺癌FASLRNAI凋亡
- FasL基因siRNA表达载体的构建及其在肺癌A549细胞中的表达被引量：2
- 2008年
- 背景与目的Fas/FasL是肿瘤坏死因子超家族成员,与肿瘤细胞的凋亡有关。激活的淋巴细胞由于FasL表达上调对于Fas/FasL凋亡途径非常敏感,从而可能被肿瘤细胞反杀伤攻击,使激活的淋巴细胞被清除掉。为研究FasL基因的功能及肺癌的基因治疗,构建了针对FasL基因的siRNA的表达载体,观察转染细胞A549后其对激活的T淋巴细胞的反杀伤作用。方法利用网站选择适当位点设计并合成针对FasL基因mRNA的寡核苷酸序列,插入质粒pGCsi-U6中形成重组载体pSi-FasL。重组载体经测序鉴定后转染肺癌细胞A549,Western blot检测转染前后FasL蛋白的表达情况。结果测序结果与所合成的寡核苷酸完全一致,证实成功构建了针对FasL基因的siRNA表达载体。Western blot检测显示转染肺癌细胞A549后有效抑制了FasL基因的表达。结论针对FasL基因的siRNA表达载体成功构建,并能有效的抑制肺癌细胞A549中FasL基因的表达。
- 王海东蒋耀光林一丹王如文邓波
- 关键词：肺肿瘤SIRNARNA干扰FASL
- 应用非变性聚丙烯凝胶电泳筛选siRNA质粒的实验研究
- 2006年
- 目的探讨利用非变性聚丙烯凝胶电泳筛选TGF-β1特异性siRNA表达质粒。方法以高表达TGF—β1人肺腺癌细胞株A549为肿瘤细胞模型。应用Angela原则选择siRNA序列，12％非变性聚丙烯凝胶电泳筛选siRNA表达质粒并经测序后转染A549细胞，间接免疫荧光和免疫印迹法检测转染前后A549细胞中TGF-β1表达水平。结果经典分子克隆方法成功构建pOligo1210、pOligo1216、pOligo1363。12％非变性聚丙烯凝胶可以清晰地分辨出被双酶切的插入片段。转染A549细胞后均产生特异性的表达抑制效应，抑制率为50％～83．2％。结论采用非变性聚丙烯凝胶电泳成功筛选出TGF—β1为靶点的siRNA表达质粒，并可广泛应用于筛选siRNA质粒。
- 邓波林一丹王如文蒋耀光
- 关键词：RNAITGF-Β1
