国家自然科学基金(30400428)
- 作品数：6 被引量：6H指数：1
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- 小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒载体的构建及体外对树突状细胞的作用
- 2008年
- 目的构建小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒表达载体,并在体外观察其对小鼠骨髓源性树突状细胞(dendritic cell,DC)的作用。方法针对已经筛选确定的CD80基因RNA干扰有效靶序列,合成靶序列的双链DNA,接入pGCL-GFP载体,再与pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度;同法构建出CD86基因RNA干扰慢病毒载体。慢病毒感染体外培养的DC,通过荧光显微镜检测感染效率,Annexin V/PI双染色法检测感染细胞凋亡和坏死情况,流式细胞仪检测CD80和CD86的表达情况。结果PCR和测序证实,pGCL-CD80 shRNA和pGCL-CD86 shRNA慢病毒载体构建正确,病毒滴度均达2×107 TU/mL,适合感染DC的MOI值为20,此时慢病毒对DC具有低毒性,感染效率为85.42%。CD80和CD86表达的抑制率分别为82.05%和77.78%。结论成功构建出小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒载体,其有明显抑制DC表面CD80和CD86的表达,这为移植物排斥提供了新的治疗手段。
- 顾晓冬洪军项建斌陈宗祐
- 关键词：慢病毒CD80CD86RNA干扰树突状细胞
- B7反义肽预处理的受体树突状细胞抑制移植动脉的内膜增生
- 2007年
- 目的建立同种异基因小鼠颈总动脉原位移植模型,探讨B7反义肽预处理的受体树突状细胞(DC)抑制移植动脉内膜增生的有效性。方法利用B7反义肽封闭负载供体抗原的受体DC,对受体C3H小鼠进行预处理后,建立异基因小鼠(Cm7BL／6→C3H)颈总动脉原位移植模型,2个月后对移植动脉作病理分析。结果DC预处理组移植动脉内膜增生减弱(P<0．05)．免疫组化分析示TGFβ1在动脉壁内的表达减少(P<0．05)。结论B7反义肽预处理的负载供体抗原的受体DC能够抑制移植动脉内膜的增生。
- 姚宇锋项建斌蔡端
- 关键词：树突状细胞动脉
- B7反义肽预处理的受体树突状细胞诱导供体特异性的免疫低反应被引量：6
- 2006年
- 目的探讨负载供体抗原的受体耐受性树突状细胞(DC)在器官移植慢性排异中的作用,为抗移植慢性排异提供新的途径。方法利用B7反义肽与负载供体抗原的成熟DC体外孵育,封闭表面B7分子,模拟不成熟DC,建立体外供体间接识别途径反应体系,观察其体外抑制受体T细胞增殖作用,收集两者反应后的受体T细胞与负载供体抗原或无关供体抗原的DC作混合淋巴细胞反应；或者通过以B7反义肽封闭的负载供体抗原的受体DC对受体小鼠预处理,3 d后取脾脏分离T细胞,与负载供体抗原或无关供体抗原的DC作混合淋巴细胞反应。结果B7反义肽封闭的DC具有抑制T细胞增殖的作用(P＜0．01),同时反应体系中抑制作用在B7反义肽终浓度处于10 mg/L与1 mg/L之间出现突变。与B7反义肽封闭的负载供体抗原的DC反应后的T细胞,产生对间接途径呈递的供体抗原的低反应性。结论B7反义肽封闭的DC可以抑制T细胞增殖,以此诱导针对间接途径呈递的供体抗原的特异性低反应性,从而抑制移植物慢性排异反应。
- 姚宇锋项建斌蔡端
- 关键词：树突状细胞免疫反应肽类
- 抑制性树突状细胞诱导移植免疫耐受的研究进展
- 2007年
- 树突状细胞（DC）是功能强大的专职抗原呈递细胞。在器官或细胞移植中，DC通过直接或间接识别途径呈递抗原活化T细胞，引起移植免疫排斥反应，但某些特殊类型的DC也可以产生抑制免疫应答，促进免疫耐受的作用。基于DC这种生物学特性的异质性，目前有多种生物学策略诱生抑制性DC诱导移植免疫耐受。
- 顾晓冬项建斌陈宗祐
- 关键词：树突状细胞移植免疫免疫耐受
- 化学合成siRNA阻断小鼠骨髓源性不成熟树突状细胞GAPDH基因的表达
- 2006年
- 目的 观察化学合成siRNA在转录后水平降低小鼠不成熟树突状细胞基因表达的效率及其影响因素。方法 体外取小鼠胫骨和股骨的骨髓，分离、培养不成熟树突状细胞，应用化学合成的不同浓度siRNA在LipofectAMINE2000转染试剂介导下转染树突状细胞，流式细胞仪检测siRNA的转染效率，RT-PCR检测小鼠不成熟树突状细胞中GAPDHmRNA水平的变化，锥虫蓝染色测定各组中培养细胞的存活率。结果 转染终浓度为100～600nmol／L的siRNA能特异有效地阻断GAPDH基因的表达，而转染终浓度为50～400nmol／L的siRNA对细胞具有低毒性。结论 siRNA能在不成熟树突状细胞内启动RNA干扰作用，400nmol／L的siRNA能在特异有效地阻断内源性基因表达的同时，最大限度地保持细胞活力。
- 顾晓冬项建斌陈宗祐姚宇锋
- 关键词：SIRNA树突状细胞GAPDHRNA干扰
- 异基因小鼠颈动脉移植慢性排斥模型的制作被引量：1
- 2006年
- 目的建立同种异基因小鼠慢性排斥反应的实验模型。方法运用显微外科血管吻合技术切取C57BL/6小鼠颈总动脉,原位行对端吻合植入C3H小鼠,建立同种异基因C57BL/6→C3H小鼠动脉移植慢性排斥模型,对照组为C3H→C3H同基因小鼠动脉移植,移植后不同时间(14d、30d、60d、120d)观察移植血管的动脉硬化情况以及受体小鼠脾脏细胞因子的表达水平。结果受体平均手术时间40min,手术成功率为100%。移植手术60天后,同种异基因移植组小鼠颈动脉移植段全部或大部分栓塞伴有明显的淋巴细胞浸润,对照组移植段血管通畅;异基因移植组脾脏组织中mIFN-γ和mIL-2表达明显上调,而对照组未见明显变化。结论通过显微外科法成功建立了同种异基因小鼠颈动脉移植慢性排斥反应模型,为探寻移植物慢性排斥机制提供有用的实验工具,其发生机制可能与Th1/Th2免疫偏离有关。
- 项建斌程峰陈宗佑孙鹏姚宇锋蔡端
- 关键词：慢性排斥动脉
