国家自然科学基金(30200119)
- 作品数：11 被引量：53H指数：5
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- 小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达片段磷酸二酯酶2A(PDE2A)在多种肿瘤细胞中表达的研究被引量：4
- 2008年
- 目的:检测PDE2A在多种肿瘤细胞中的表达情况,以了解PDE2A基因的表达分布特点及初步功能特征,为进一步肿瘤多药耐药相关研究奠定基础。方法:利用Northern杂交与RT-PCR方法检测PDE2A在H446、H446/CDDP、A549、A549/CDDP、SK-HEP-1、Namalwa、SGC7901等7种肿瘤细胞中的表达情况。结果:PDE2A仅在H446/CDDP中表达,而在其他细胞中无表达。结论:在所检测的7种肿瘤细胞中,PDE2A在H446/CDDP中高表达。PDE2A可能参与了H446/CDDP多药耐药性的形成。
- 李昆霖吴国明戢福云徐智黄桂君
- 关键词：小细胞肺癌多药耐药
- 小细胞肺癌分子细胞生物学的研究进展被引量：2
- 2005年
- 在癌变的过程中,发生了多种遗传变异和生物学改变。遗传变异和生物学改变的结合,则促进肿瘤的恶性发展。小细胞肺癌是一种多基因参与和协同作用的恶性肿瘤,临床表现为早期广泛转移,以及对化疗药物初次敏感但易产生耐药性和复发等。目前,对小细胞肺癌而言,在了解其恶性转化的分子细胞生物学机制基础上,制定新的治疗方案迫在眉睫。小细胞肺癌的分子细胞生物学特征常表现为多种染色体异常,最为常见的是3p缺失,以及癌基因和抑癌基因的变异。伴随着遗传变异,小细胞肺癌还表现出细胞表面受体的过度表达,包括受体酪氨酸激酶、G蛋白耦合受体、整合蛋白及其它受体等。一些被激活的下游分子,例如磷脂酰肌醇激酶,有可能成为新的治疗方案的靶位点。
- 戢福云钱桂生黄桂君
- 关键词：小细胞性染色体异常癌基因抑癌基因细胞表面受体
- N-甲基化嘌呤-DNA-糖基化酶在肺癌H446多药耐药细胞中的表达被引量：3
- 2006年
- 目的本研究旨在观察N-甲基化嘌呤-DNA-糖基化酶在小细胞肺癌多药耐药细胞系H446/CDDP中的表达情况。方法以本所前期诱导成功的小细胞肺癌多药耐药细胞系H446/CDDP为研究对象,H446亲代细胞为对照,采用半定量RT-PCR法检测MPG基因mRNA的转录水平,免疫细胞化学法检测其蛋白表达。结果半定量RT-PCR显示,H446细胞MPG基因mRNA的转录量为0.19±0.15,H446/CDDP细胞为0.75±0.08;免疫细胞化学显示,H446/CDDP、H446细胞MPG蛋白表达呈阳性,均表达于细胞核。结论MPG的高表达可能同人小细胞肺癌多药耐药的产生有关。
- 余时沧黄桂君陆卫忠戢福云李玉英郭芮玲钱桂生
- 关键词：小细胞肺癌多药耐药
- 多西紫杉醇对肺腺癌多药耐药细胞A549/CDDP及其亲代细胞作用机制的初步研究被引量：9
- 2005年
- 目的 探讨多西紫杉醇对肺腺癌多药耐药细胞A5 49/CDDP及其亲代细胞的生长抑制作用及其抗肿瘤作用机制。方法 应用MTT比色法和透射电镜等方法,观察A5 49/CDDP及其亲代细胞在多西紫杉醇作用后,细胞生长曲线、生长抑制率及形态学等方面的变化。结果 MTT比色结果表明,多西紫杉醇对A5 49/CDDP细胞及其亲代细胞具有明显的生长抑制作用,并且在0 1～2 μg/ml剂量范围内存在剂量及时间依赖关系。A5 49/CDDP细胞在多西紫杉醇作用12～2 4h较亲代细胞敏感(P <0 0 1) ,在48h开始表现出其药物耐受性(P <0 0 1) ,在72h则与亲代细胞间无显著性差异(P >0 0 5 ) ;透射电镜观察结果发现,A5 49/CDDP细胞及其亲代细胞的胞质内空泡均明显增多,微绒毛减少甚至消失,线粒体出现肿胀甚至空泡化,同时,还存在少数凋亡小体和脱落的不含细胞器成分的细胞质。结论 多西紫杉醇对肺腺癌多药耐药细胞及其亲代细胞均具有明显的生长抑制作用,并可能通过诱导肿瘤细胞坏死、凋亡和胞质自切,从而发挥其细胞毒作用。
- 郭芮伶吴国明戢福云黄桂君陈维中
- 关键词：多西紫杉醇肺腺癌多药耐药
- 人小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达基因的克隆研究被引量：7
- 2006年
- 目的构建小细胞肺癌多药耐药细胞(H446/CDDP)差异表达消减cDNA文库。方法①以H446/CDDPcDNA为实验方(Tester),小细胞肺癌细胞H446cDNA为对照方(Driver),应用抑制消减杂交(SSH)技术结合T/A克隆技术构建小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达消减cDNA文库。②通过斑点杂交筛选、测序及同源性分析获取H446/CDDP细胞差异表达cDNA片段。结果成功构建了小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP差异表达消减cDNA文库,获得21个H446/CDDP细胞差异表达cDNA片段,经测序及同源性分析表明它们分别代表6个已知基因(同源性为96%～100%)。结论SSH技术是筛选新的功能基因的有效方法;获取的6个差异表达基因可能参与了小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP的耐药形成,进一步的功能研究有利于了解它们在小细胞肺癌多药耐药机制中所发挥的作用。
- 李昆霖吴国明戢福云徐智黄桂君
- 关键词：小细胞肺癌多药耐药抑制消减杂交技术
- bcl-2对人小细胞肺癌细胞系H446/DDP多药耐药性的影响被引量：8
- 2006年
- 目的探讨bc l-2表达上调对人小细胞肺癌(SCLC)多药耐药的影响及相关机制。方法通过定向克隆方法,构建bc l-2正义RNA真核表达载体pLXSN-bc l-2;同时,体外合成bc l-2反义硫代磷酸寡核苷酸(AS-PS-ODNs),然后采用脂质体分别将其转染至人SCLC H446细胞及H446/DDP细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和W estern b lot方法检测转染细胞中bc l-2 mRNA和蛋白的表达水平;流式细胞仪DNA倍性分析观察顺铂(DDP)诱导转染细胞凋亡情况。转染时细胞分3组,pLXSN-bc l-2转染组[或bc l-2 AS-PS-ODNs转染组(AS-PS-ODNs转染组)]、pLXSN转染组[或bc l-2无义硫代磷酸寡核苷酸转染组(NS-PS-ODNs转染组)]和对照组(H446细胞组、H446/DDP细胞组)。结果(1)W estern b lot检测结果表明,对照H446细胞组、pLXSN转染组、pLXSN-bc l-2转染组间Bc l-2蛋白表达水平差异有统计学意义(F=11 221,P<0.05)。转染pLXSN-bc l-2的H446细胞强表达Bc l-2蛋白(灰度值0.854±0.016),与对照H446细胞组(灰度值为0.103±0.005)相比差异有统计学意义(t=2.45,P<0.01);NS-PS-ODNs转染组的H446/DDP细胞,AS-PS-ODNs转染组的H446/DDP细胞,对照H446/DDP细胞组间Bc l-2蛋白表达水平差异有统计学意义(F=11 028,P<0.01)。转染bc l-2AS-PS-ODNs的H446/DDP细胞表达Bc l-2蛋白水平(灰度值为0.695±0.014),与对照H446/DDP细胞组(灰度值为0.942±0.018)相比,显著下降(t=2.26,P<0.01),但仍高于亲代H446细胞Bc l-2表达水平(t=2.31,P<0.01)。(2)流式细胞仪DNA倍性分析结果显示,转染pLXSN-bc l-2的H446细胞,经5μg/m l DDP诱导后凋亡率为(20.9±0.2)%,明显低于对照H446细胞组的(31.1±0.21)%,差异有统计学意义(t=2.45,P<0.01);5μg/m l DDP诱导转染AS-PS-ODNs的H446/DDP细胞的凋亡率为(31.5±0.4)%,对照H446/DDP细胞组的凋亡率为(9.0±0.1)%,转染细胞的凋亡率显著增加(P<0.05)。结论靶向性抑制抗凋亡相关基因bc l-2的表达可能是克服SCLC化疗耐药的重要的基因治疗方法之一。
- 戢福云钱桂生钱频陈琰郭芮伶李淑萍黄桂君
- 关键词：药物耐药性药物基因,BCL-2
- 小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达片段I-2^(PP2A)在多种肿瘤细胞中表达的研究
- 2009年
- 目的:检测小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP差异表达片段I-2PP2A在多种肿瘤细胞中的表达情况,以了解I-2PP2A基因的表达分布特点及功能特征,为进一步相关研究奠定基础。方法:利用Northern杂交与半定量RT-PCR相结合的方法检测I-2PP2A在H446、H446/CDDP、A549、A549/CDDP、SK-HEP-1、Na-malwa、SGC7901等7种肿瘤细胞中的表达。结果:I-2PP2A在H446细胞、H446/CDDP细胞及Namalwa细胞中均有表达,经进一步图像分析及统计学处理表明I-2PP2A在H446/CDDP细胞中的表达量明显高于在H446细胞中的表达量(P<0.01),在H446/CDDP与Namalwa间的表达量无明显差异(P>0.05)。结论:相对于H446细胞来说,I-2PP2A在其耐药细胞株H446/CDDP中有差异高表达。I-2PP2A可能参与了H446/CDDP多药耐药性的形成,其参与途径可能与细胞凋亡有关。
- 李昆霖吴国明戢福云徐智黄桂君
- 关键词：小细胞肺癌多药耐药
- 人小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达基因的克隆研究
- 2007年
- 目的本研究试图利用前期工作中诱导建立的小细胞肺癌多药耐药细胞系构建小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达消减cDNA文库,为进一步功能研究奠定基础。方法 (1)以小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP cDNA为实验方(Tester),小细胞肺癌细胞H446 cDNA为对照方(Driver),应用抑制消减杂交(sSH)技术结合T/A克隆技术构建小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达消减cDNA文库;(2)通过斑点杂交筛选、测序及同源性分析获取H446/CDDP细胞差异表达cDNA片段。方法成功构建了小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP差异表达消减cDNA文库,获得21个H446/CDDP细胞差异表达cDNA片段,经测序及同源性分析表明它们分别代表6个已知基因(同源性为96%～100%)。方法本研究表明SSH技术是筛选新的功能基因的有效方法;获取的6个差异表达基因可能参与了小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP的耐药形成,进一步的功能研究,有利于了解它们在小细胞肺癌多药耐药机制中所发挥的作用。
- 李昆霖吴国明戢福云黄桂君
- 关键词：小细胞肺癌多药耐药抑制消减杂交技术
- 顺铂诱导人小细胞肺癌细胞系NCI-H446细胞的凋亡被引量：6
- 2007年
- 背景与目的：近年的研究表明,诱导细胞凋亡是多种作用于核酸代谢不同环节的化疗药物抗肿瘤的重要机制.但顺铂杀灭人小细胞肺癌（SCLC）细胞的药物效应除了损伤其DNA外,诱导该类恶性肿瘤细胞凋亡是否是其杀灭细胞的重要机制尚无相应研究.基于此,本研究旨在探讨顺铂诱导人SCLC细胞系H446细胞凋亡的机制及其在SCLC化疗中的作用.方法：分别采用形态学观察、流式细胞仪分析技术和原位DNA断裂点的末端标记法,检测顺铂诱导H446细胞的凋亡作用.结果：终浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 μg/ml的顺铂均可诱导H446细胞凋亡,且呈浓度依赖性（处理48 h时,其凋亡指数分别为1.47±0.03、8.28±0.54、11.02±1.05、12.74±1.08、27.16±1.15）;终浓度为2 μg/ml的顺铂在24～72 h持续诱导细胞凋亡且诱导凋亡作用逐渐增强,呈时间依赖性;终浓度为5 μg/ml的顺铂可阻滞H446细胞于细胞周期的S期,终浓度＜5 μg/ml顺铂可阻滞H446细胞于细胞周期的G2期和S期.结论：诱导细胞凋亡可能是顺铂抗肿瘤作用的重要机制.
- 戢福云钱桂生钱频郭芮伶陈维中陈琰
- 关键词：小细胞肺癌顺铂
- 缺氧对人小细胞肺癌H446细胞DNA错配修复基因MLH1、MSH2表达的影响及其机制探讨被引量：5
- 2008年
- 背景与目的:缺氧对DNA错配修复系统(mismatch repair,MMR)活性的调控是肿瘤细胞遗传不稳定的重要原因,但其机制尚不完全清楚。本研究拟观察缺氧状态下人小细胞肺癌H446细胞DNA错配修复基因MLH1、MSH2的表达变化,初步探讨DNA甲基化在其中的作用。方法:应用RT-PCR、Western blot等方法检测H446细胞在缺氧状态下以及甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理后MLH1、MSH2基因的表达水平,同时,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测MLH1、MSH2基因启动子CpG岛甲基化状态。结果:缺氧状态下,H446细胞MLH1、MSH2基因在转录和翻译水平均显著性降低。同时,随着缺氧时间延长,MLH1基因启动子逐渐由非甲基化状态、部分甲基化状态转变为完全甲基化状态,而MSH2基因启动子则直接由非甲基化状态转变为完全甲基化状态。甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR可使MLH1、MSH2基因表达水平有所恢复,但去除5-Aza-CdR后其表达再次下调。结论:启动子甲基化可能是缺氧诱导H446细胞显著性下调MLH1、MSH2基因表达的重要机制,甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR可恢复其表达。
- 郭芮伶吴国明戢福云
- 关键词：缺氧小细胞肺癌DNA错配修复
