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抗克伦特罗单链抗体表达载体的构建与鉴定被引量：5: 2008年; 为构建克伦特罗(Clenbuterol,CBL)单链抗体(scFv)表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达。以pCANTAB5E-CBL质粒为模板,扩增CBL的scFv基因,与pPICZαA载体重组,然后以重组质粒pPICZαA-scFv为模板扩增scFv及其相连的6个组氨酸(6×His)片段,再与载体pBV220连接,转化大肠杆菌DH5α,阳性克隆质粒经酶切和PCR鉴定后进行目的片段的序列测定。重组菌经温度诱导表达重组单链抗体,并通过SDS-PAGE和Western blotting对其鉴定。采用竞争ELISA检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明重组质粒pBV220-scFv含有插入片段,与原序列的同源性达99.8%。重组蛋白的分子量接近37kD,能够被抗His标签单克隆抗体特异性识别且可被游离的CBL竞争性抑制,IC50值为4.55ng/mL。这说明我们成功构建了重组质粒pBV220-scFv并实现了其在大肠杆菌中的表达,为进一步进行CBL免疫法快速检测奠定了一定的基础。; 王弘梁艳杨金易刘细霞张宏斌雷红涛沈玉栋孙远明; 关键词：克伦特罗原核表达

除草剂丁草胺人工抗原合成及其抗体制备研究被引量：1: 2005年; 以除草剂丁草胺、巯基丙酸为原料,合成丁草胺半抗原,用氢核磁共振、电喷雾质谱、红外光谱方法进行鉴定;通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备丁草胺人工抗原,用紫外扫描法鉴定;免疫动物后,间接竞争ELISA检测鉴定抗体.结果表明,巯基丙酸与丁草胺连接生成半抗原,半抗原被连接到载体蛋白上,抗血清能被丁草胺阻断,丁草胺人工抗原合成成功,获得了抗丁草胺多克隆抗体.; 雷红涛孙远明黄晓钰王弘方坚生冯伟雯; 关键词：丁草胺半抗原人工抗原抗体

有机磷农药三唑磷半抗原合成与鉴定被引量：4: 2006年; 以三氯硫磷、苯唑醇、6-氨基己酸为原料,采用3步反应合成三唑磷半抗原6-[O-乙基-O-(1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-基)硫代磷酰胺基]己酸,经质谱和1H-NMR鉴定表明,合成成功,为进一步制备三唑磷抗体奠定了基础。; 雷红涛孙远明邓礼舜肖治理王弘沈玉栋; 关键词：三唑磷

Lipocalin文库的构建及与克百威有结合活性的小分子筛选被引量：2: 2008年; 构建大菜粉蝶Lipocalin蛋白家族中的BBP蛋白突变文库,依据基因序列,分别设计10条和12条引物,通过PCR重叠延伸法得到包含随机突变蛋白BBP的基因序列,并重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中构建Lipocalin突变文库,库容达到4.0×109.以偶联分子BSA-克百威和OVA-克百威为靶分子,采用柱式和平皿式交叉法对Lipocalin文库进行了筛选,用竞争洗脱法洗脱特异结合活性的噬菌体.经过3轮筛选,从第3轮的洗脱液中随机挑选了10个重组克隆,用Dot-blotting法检测出K7anticalin分子能与克百威特异结合.为研发克百威的Anticalin类检测试剂盒提供了候选分子,也为拓宽Lipocalin文库在有害小分子检测方面的应用奠定了基础.; 武婕杨金易张宏斌潘科王弘雷红涛郑霖肖治理孙远明; 关键词：克百威

除草剂丁草胺直接竞争ELISA检测方法研究被引量：7: 2006年; 制备出3种不同结合比的酶标抗体,对检测条件进行了优化,建立了标记抗体固相抗原直接竞争ELISA(cdELISA)检测丁草胺的方法。结果表明,酶标抗体克分子比为1.55时偶合物活性最高,包被浓度1μg·mL-1,酶标抗体800倍稀释,稀释液采用2×PBS,不含BSA、甲醇,建立的标准曲线IC50=1.7ng·mL-1,检测限为0.006ng·mL-1,检测范围0.06～2616.7ng·mL-1,批内变系数9.25%,批间变异系数23.55%。蒸馏水以及稀释10倍后的矿泉水、池塘水、稻田水添加1ng·mL-1和10ng·mL-1的丁草胺,用所建立的方法检测,平均回收率分别为93.27%、158.50%、119.75%、124.51%。本研究为进一步开发丁草胺免疫分析试剂盒奠定了基础。; 雷红涛冯伟雯沈玉栋杨金易王弘方坚生孙远明; 关键词：丁草胺酶标抗体除草剂

丁草胺人工抗原及抗体制备研究: 以除草剂丁草胺、巯基丙酸为原料,合成丁草胺半抗原,用氢核磁共振、电喷雾质谱、红外光谱方法进行鉴定;通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备丁草胺人工抗原, 用紫外光谱法鉴定;免疫动物后,间接竞争ELISA检测鉴定抗体。结果...; 雷红涛方坚生孙远明王弘沈玉栋黄晓钰冯伟雯; 关键词：丁草胺半抗原人工抗原抗血清; 文献传递

有机磷农药三唑磷半抗原合成与鉴定被引量：1: 2005年; 以三氯硫磷、苯唑醇、6-氨基己酸为原料,采用三步反应,合成三唑磷半抗原6-[O-乙基-O-（1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-基）硫代磷酰胺基]己酸,经质谱和1H-NMR鉴定表明合成成功,为进一步制备三唑磷抗体奠定了基础.; 雷红涛孙远明邓礼舜肖治理王弘沈玉栋; 关键词：三唑磷半抗原

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国家自然科学基金(20477012)