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介导GDNF促进DA能神经细胞存活与分化的信号路径的研究被引量：2: 2006年; 胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)可以通过跨膜的酪氨酸蛋白激酶受体RET激活细胞内两条信号通路,即磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信号通路和Ras/Raf/MEK/Erk信号通路。为探讨在GDNF促进中脑多巴胺(DA)能神经细胞存活和分化过程中,上述两条信号通路所发挥的作用,本研究在建立GDNF促进中脑DA能神经细胞存活和分化的细胞培养模型的基础上,以PI3K信号通路中PI3K的特异性抑制剂Wortmannin和Ras/Raf/MEK/Erk信号通路中MEK的特异性抑制剂PD98059分别阻断上述两条信号通路;结合免疫细胞化学染色技术,以DA合成的限速酶酪氨酸羟化酶(TH)的染色情况为指标来观察上述两条信号通路对DA能神经细胞存活和分化的影响。结果显示,Wortmannin可以阻断GDNF促进TH阳性神经细胞数目及其突起增加的作用;而PD98059对GDNF的生物学效应没有影响。结果提示PI3K而非Ras/Raf/MEK/Erk信号通路介导了GDNF对中脑DA能神经细胞存活和分化的促进作用。; 王红军曹俊平余景考高殿帅; 关键词：胶质细胞系源性神经营养因子多巴胺能神经细胞磷脂酰肌醇3-激酶

Integrin β1在出生前后大鼠中脑黑质的表达: 2009年; 为了检测integrin β1在出生前后大鼠中脑黑质的表达，并探索其在大鼠黑质神经细胞发育过程中的可能作用，本实验采用RT—PCR、Western blot和免疫组织化学染色方法，来测定胚龄（embryonic day，E）E16 d、E18 d、E20 d的健康SD胎鼠及出生后1d（postnatal day1，P1）、P3d、P7d、P14d、P21d的健康仔鼠中脑黑质组织中integrin β1的表达情况。RT—PCR和Western blot结果显示，在检测的各时间点，大鼠中脑黑质integrin β1都有明显表达，且其mRNA和蛋白质水平变化一致。在E16时，integrin β1 mRNA和蛋白质出现高表达，此高表达一直持续到P7时；而至P14时，integrin β1 mRNA和蛋白质表达水平明显降低，且此低水平表达随发育而持续；P21时与P14时相比无明显差异。而免疫组织化学染色结果显示，在各时间点，大鼠中脑黑质一直有大量integrint31阳性细胞存在。在E16～P14各时间点，integrin β1阳性细胞胞体逐渐增大，P21时与P14时相比，阳性细胞胞体大小无明显变化。而单位面积内integrin β1阳性细胞数，在E16-P7各时间点无明显差异，但至P14时，单位面积内integrin β1阳性细胞数则明显降低，且此降低随发育而持续，P21时与P14时相比无明显变化。以上结果表明，在大鼠中脑黑质发育过程中，integrin β1在E16～P7期间持续高表达，而至P14～P21期间，其表达量明显降低。这种表达变化与大鼠发育期间黑质多巴胺（DA）能神经元的自然凋亡时程相一致，提示integrin β1的表达与此期问黑质DA能神经元的凋亡有关。; 杨定学陈永珍曹俊平孙羽杜霞高殿帅; 关键词：整合素Β1 黑质

Calbindin D28k对帕金森病模型小鼠纹状体凋亡相关蛋白表达的影响被引量：1: 2010年; 目的观察1-甲基4-苯基1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)致帕金森病(PD)模型小鼠黑质多巴胺能神经细胞过表达Calbindin D28k(CB)时,纹状体细胞抗损伤作用机制。方法选择C57BL/6小鼠连续5 d腹腔注射MPTP,构建成功PD模型小鼠30只,随机分为模型组,人类免疫缺陷病毒(HIV)Ⅰ组(注射HIV Ⅰ)和CB-HIV-Ⅰ组(注射CB-HIV-Ⅰ),每组10只,连续6周对各组小鼠行为学检测,Western blot法检测各组小鼠CB,Bcl 2和Bax的表达变化。结果与模型组和HIV-Ⅰ组比较,CB-HIV-Ⅰ组小鼠各时间点移动格子次数,第1、2、5和6周站立次数,第6周时游泳和悬挂时间,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);CB-HIV Ⅰ组小鼠中脑黑质中CB的表达量显著升高(P<0.05),纹状体细胞中Bcl-2的表达量亦明显升高(P<0.01),而Bax的表达量明显降低(P<0.01)。模型组和HIV-Ⅰ组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论黑质多巴胺能神经细胞过表达CB时,纹状体细胞Bcl-2/Bax表达上调,提示其与纹状体细胞抗凋亡能力增强有关。; 孙申高秀先刘美英袁红花高殿帅; 关键词：帕金森病基因,BCL-2 BCL-2相关X蛋白质 CALBINDIN

成年与老年大鼠中脑黑质致密部多巴胺能神经元形态学研究被引量：2: 2007年; 目的研究大鼠中脑黑质致密部多巴胺能神经元随年龄老化的形态学变化规律，探讨其退行性变的形态学依据。方法SD大鼠16只，雄性，分为成年组（4-5月龄）和老年组（≥18月龄）。取中脑黑质，常规制片，连续冠状切片，分别进行焦油紫染色和TH免疫组化染色，用图像分析仪分别对Nissl染色细胞、TH免疫组化染色阳性神经元进行计数，透射电镜观察神经元的超微结构变化。结果老年大鼠中脑黑质神经元数量减少（P〈0．05），TH阳性神经元也同时减少（P〈0．05），且在超微结构上老年大鼠多巴胺能神经元出现内质网扩张及多量脂褐素形成。结论老年黑质退行性病变可能与中脑黑质致密部多巴胺能神经元数量减少有关。; 肖成华苗绘杜霞孙羽于红丽董红艳高殿帅; 关键词：黑质致密部多巴胺能神经元免疫组织化学

钙粘附蛋白N-cadherin基因RNAi质粒载体的构建与鉴定被引量：2: 2010年; 目的:构建有效的小鼠神经型钙粘附蛋白(N-cadherin)基因RNA干扰质粒载体。方法:在小鼠基因库中选择3个靶序列并设计合成相应3对寡核苷酸序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列,然后将以上4对寡核苷酸序列退火后连入pSilencerTM 3.1-H1 hygro质粒并分别命名为pSicad1、pSicad2、pSicad3、pSi-control。酶切和测序鉴定后,将以上重组质粒转染MN9D细胞,用Western Blot和半定量RT-PCR方法检测N-cadherin基因mR-NA和蛋白的表达水平。结果:酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pSilencerTM 3.1-H1 hygro质粒,与对照组相比,pSicad2和pSicad3转染MN9D细胞后,N-cadherin mRNA和蛋白水平的表达均受到明显抑制,其中N-cadherin蛋白水平在pSicad3组下降50%(P<0.01)。结论:结果表明已成功构建了小鼠N-cadherin基因RNAi质粒载体,为N-cadherin功能研究奠定了基础。; 孙申高秀先朱圆圆朱孝先袁红花高殿帅; 关键词：RNA干扰质粒载体

神经细胞黏附分子在GDNF保护大鼠多巴胺能神经元中的作用被引量：1: 2007年; 目的研究神经细胞黏附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)在胶质细胞系源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)保护帕金森(Parkinson's disease,PD)模型大鼠受损多巴胺(dopamine,DA)能神经元中的作用。方法右侧纹状体内立体定位注射6-羟多巴胺(6-OHDA)制备早期PD模型,而后分为4组:对照组(同侧黑质内注射PBS)、NCAM组(同侧黑质内仅注射anti-NCAM抗体)、GDNF组(同侧黑质内注射GDNF)、NCAM阻断组(同侧黑质内注射anti-NCAM抗体30min后注射GDNF),采用免疫组织化学染色技术和免疫印迹技术,观察各组酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达变化。结果GDNF组黑质致密部TH阳性神经元数目及表达的量明显多于PBS组,差别有统计学意义;NCAM阻断组与GDNF组相比,该处TH阳性神经元数目及表达的量明显减少,差别有统计学意义。结论NCAM参与了GDNF保护DA能神经元的作用。; 肖成华杨华曹俊平余景考高殿帅; 关键词：胶质细胞系源性神经营养因子神经细胞黏附分子酪氨酸羟化酶

胶质细胞系源性神经营养因子对帕金森病大鼠黑质钙结合蛋白表达的影响被引量：3: 2007年; 目的研究胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)对帕金森病(PD)大鼠黑质钙结合蛋白(CB)表达的影响,以及神经细胞黏附分子(NCAM)在其中的作用。方法制作PD模型大鼠36只,分为GD-NF组、NCAM阻断组和对照组,每组12只。采用免疫组化染色和免疫印迹法,检测各组大鼠黑质CB阳性细胞数和CB表达量。结果GDNF组黑质处CB阳性神经元数(46.50±6.28)及表达量(33770.60±6929.76)明显高于对照组[(27.00±8.60)、(18281.00±5266.78)](均P<0.05);与NCAM阻断组[(44.00±13.37)、(30857.00±7484.87)]相比差异无统计学意义(均P>0.05)。结论GDNF可上调PD大鼠黑质CB的表达,从而保护受损的多巴胺能神经元,NCAM对这一作用无明显影响。; 肖成华杨华高殿帅曹俊平余景考; 关键词：帕金森病多巴胺能神经元胶质细胞系源性神经营养因子钙结合蛋白神经细胞黏附分子

老年与成年大鼠纹状体多巴胺含量及黑质部凋亡相关蛋白表达的研究: 2011年; 目的研究老年与成年SD大鼠纹状体多巴胺含量及黑质部凋亡相关蛋白Bad、Bcl-2的表达情况,并探讨两者之间的关系。方法取老年SD大鼠6只作为老年组,成年SD大鼠6只作为成年组;采用高效液相色谱-质谱联用法测定纹状体内多巴胺含量;免疫印迹法检测黑质Bad、Bcl-2的表达。结果老年组纹状体DA含量(4.13±0.209 ng/mg)低于成年组(5.65±0.188ng/mg)(P<0.05);老年组黑质部抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(1.08±0.047)低于成年组(1.36±0.085)(P<0.05);促凋亡蛋白Bad的表达(0.79±0.051)高于成年组(0.57±0.071)(P<0.05)。结论老年SD大鼠纹状体DA含量降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡Bad表达增高。; 杨华徐建慧肖成华高殿帅; 关键词：BAD

Calbindin-D-28k对MPTP致小鼠黑质凋亡相关蛋白Bax表达的影响: 2009年; 目的探讨在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致小鼠黑质多巴胺(DA)能细胞发生凋亡时,calb ind in-D-28k(CB)抗细胞凋亡的作用机制。方法MPTP连续5天腹腔注射构建中脑黑质DA能细胞损伤的小鼠模型,模型鼠脑黑质致密部立体定位注射携带CB基因的高滴度慢病毒颗粒(CB-H IV-Ⅰ),W estern b lotting方法检测CB的在体过表达以及鼠脑黑质部位凋亡相关蛋白Bax的表达变化。结果与空白对照组(control)和黑质定位注射空病毒颗粒组(H IV-Ⅰ)相比,注射CB-H IV-Ⅰ的实验组的黑质中CB的表达量显著升高(P<0.05),而Bax的表达量明显降低(P<0.05)。结论病毒颗粒CB-H IV-Ⅰ携带的CB基因在黑质细胞中获得了高效的表达;凋亡相关蛋白Bax可能参与了CB对黑质DA能神经细胞的保护作用。; 高锦朱园园刘美英高殿帅; 关键词：细胞凋亡 BAX

GDNF对大鼠多巴胺能神经元CB表达的影响: 2007年; 目的研究胶质细胞系源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对损伤的多巴胺(dopamine,DA)能神经元的保护作用和神经细胞黏附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)在这一保护过程中的影响。方法以培养的新生大鼠中脑脑片损伤模型和在体帕金森病(Parkinson disease,PD)模型作为观察对象。实验分3组:对照组(在无血清培养基内加入PBS或在体黑质内注射PBS)、GDNF组(在无血清培养基内加入GDNF或在体黑质内注射GDNF)、NCAM阻断组(在无血清培养基内于加入GDNF30 min前加anti-NCAM或在体黑质内注射GDNF 30 min前注射anti-NCAM阻断NCAM)。采用免疫组织化学染色技术和Western blot技术,观察各组钙结合蛋白D28K(calbindin D28K,CB)表达的变化。结果GDNF组黑质中CB阳性神经元数目及表达的量明显多于对照组,差别有统计学意义。NCAM阻断组上述指标与GDNF组相比无显著性差异。结论GDNF可能通过增加CB的表达而保护受损的DA能神经元,但NCAM可能未参与这一作用。; 杨华肖成华曹俊平余景考高殿帅; 关键词：多巴胺能神经元胶质细胞系源性神经营养因子 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶神经细胞黏附分子

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