国家自然科学基金(30570547)
- 作品数：6 被引量：27H指数：3
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- 乏氧诱导因子结构、表达及调控被引量：10
- 2006年
- 乏氧诱导因子(HIF)是乏氧应答中起重要作用的转录因子,一直是乏氧研究的焦点.HIF由α亚基和β亚基组成,α亚基包括HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α,其中α亚基因诱导条件不同通过选择性剪接产生不同变体.β亚基包括ARNT、ARNT2和ARNT3.α与β亚基在乏氧等应激反应时形成二聚体HIF启动靶基因转录表达,参与多种细胞生物学功能的调控.目前为止,大多数的研究都集中于野生型HIF-1α,对它的结构、表达调控及其调控做了相对全面而清楚的了解.后来通过多种策略及方法,陆续发现并克隆出了除HIF-1α外的HIF各亚基.研究不再局限于HIF-1α,而是扩展至HIF整个系统,如相继发现的HIF-2α和HIF-3α亚基,以及它们的变体,对HIF-1α的研究也更深入了,但是关于HIF-1α的变体、HIF-2α、HIF-3α及β亚基的表达调控及功能还不明确,是未来研究的方向.本文全面介绍HIF的最新研究进展,阐述HIF各亚基的结构、表达调控及其靶基因的表达情况.
- 柳永蕾宋现让
- 关键词：乏氧诱导因子变体
- HIF-1α基因沉默对裸鼠人肺癌移植瘤放射敏感性影响的观察被引量：10
- 2011年
- 目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因沉默对裸鼠肺癌移植瘤放射敏感性的影响。方法:采用A549和A549/HIF-1α(-)细胞株建立人肺癌移植瘤模型,分别给予5、10、15和20Gy单次剂量X射线照射,观察放射治疗对肿瘤的抑制作用,根据肿瘤生长延缓和照射剂量分析肿瘤剂量效应及HIF-1α基因沉默对在体肿瘤放射敏感性的影响。结果:放射治疗能明显抑制肿瘤生长,并观察到随照射剂量的增加肿瘤生长延缓愈显著,接受等剂量照射HIF-1α基因沉默肿瘤生长延缓更明显,根据肿瘤剂量效应曲线计算放射增敏比分别为1.40、1.34和1.31。结论:放射治疗能显著抑制A549和A549/HIF-1α(-)肿瘤生长,A549/HIF-1α(-)肿瘤对放射治疗更敏感。
- 李洁清于金明宋现让刘伟
- 关键词：细胞低氧辐射耐受性基因沉默
- 人HIF-1α基因沉默肺癌细胞株的筛选及鉴定
- 2006年
- 宋现让迟伟玲柳永蕾魏玲王兴武宋宝
- 关键词：肺癌RNA干扰慢病毒乏氧诱导因子
- 慢病毒shRNA表达载体介导人肿瘤细胞基因稳定沉默的影响因素被引量：5
- 2007年
- 目的:探讨慢病毒载体介导人肿瘤细胞RNA干扰的影响因素。方法:用介导RNAi的慢病毒载体Lenti6-HIF1α和Lenti6-HIF1β分别转导人肿瘤细胞系Hela、SPCA1和A549,筛选靶基因稳定表达沉默的细胞株。病毒RNA分子拷贝数和靶基因mRNA水平用实时定量RT-PCR确定。结果:针对不同靶基因的慢病毒转导肿瘤细胞的效率与靶基因无关、存在细胞类型特异性。8h内病毒转导效率与吸附时间呈正关,12h后继续延长吸附时间不能提高转导效率。对靶基因表达的特异性抑制效果与病毒量呈正相关。靶基因稳定沉默细胞株的RNAi效果与细胞类型无关,与靶细胞基因组整合的shRNA表达结构的拷贝数呈正相关。结论:慢病毒载体介导人肿瘤细胞RNA干扰,短期基因抑制效果取决于细胞类型、病毒量和病毒的吸附时间,稳定基因沉默效果与病毒整合到靶细胞基因组的拷贝数相关,筛选稳定基因沉默细胞株时,应尽可能提高病毒量以提高病毒整合的拷贝数。
- 宋现让迟伟玲魏玲王兴武柳永蕾宋宝
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰
- 乏氧诱导因子-1α基因沉默对肺癌细胞乏氧应答相关基因表达的影响被引量：2
- 2007年
- 乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)是肿瘤细胞适应乏氧微环境的关键调控因子,具有作为治疗靶基因的潜力,以克服乏氧诱导的治疗抗拒等效应.下调其表达可能影响肿瘤细胞内一系列乏氧应答相关基因的表达.本研究采用已构建的HIF-1αRNAi慢病毒载体转导肺腺癌A549细胞,经杀稻瘟素(blasticidin)筛选建立HIF-1α基因稳定沉默的A549细胞株.应用cDNA微阵列技术检测并比较HIF-1α基因沉默A549细胞株和其亲本细胞株在常氧和乏氧状态下的基因表达谱改变.应用定量RT-PCR方法验证部分cDNA芯片差异表达基因的表达改变.HIF-1α基因稳定沉默细胞株A549/HIF-1α(-),在常氧和乏氧条件下HIF-1α mRNA水平分别较A549细胞下降89.2%和88.1%,HIF-1α蛋白水平分别下降97.2%和88.4%.在乏氧条件下,cDNA微阵列检测的1280个基因中,52个基因表达上调,15个基因表达下调.HIF-1α基因沉默显著影响其中27个基因的乏氧诱导效应.定量RT-PCR验证其中ENO2、BCL-2、CXCR4和MMP11的表达水平,与cDNA芯片结果相符合.结果提示,HIF-1α基因沉默能够在一定程度上阻断肺癌细胞的乏氧应答,在克服乏氧导致的肺癌治疗抗拒方面具有潜力.
- 宋现让宋宝魏玲柳永蕾王兴武
- 关键词：乏氧诱导因子-1ΑRNA干扰A549细胞
- 长期缺氧对肺腺癌 SPCA1细胞谷胱甘肽转移酶表达及耐药性的影响
- 2007年
- 目的探讨长期缺氧对 SPCA1细胞谷胱甘肽转移酶(GST-π)表达的影响及耐药性的改变。方法 SPCA1细胞常氧(20%O_2)和缺氧(0.5%O_2)条件下作用16 h 后,提取 RNA 和蛋白,用定量 RT-PCR 的方法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和GST-π mRNA 的表达情况,用 Western blotting法检测 HIF-1α蛋白;制备细胞悬液,用流式细胞仪测定 GST-π表达;通过克隆形成实验分析 SPCA1细胞对阿霉素和丝裂霉素的药物敏感性。通过 RNA 干扰技术下调 HIF-1α表达后,分为对照组和干扰组,观察 GST-π的表达。结果设常氧组 GST-π mRNA 表达率为1,缺氧组为12.2。常氧组 GST-π蛋白阳性表达率为(35.78±1.25)%,缺氧组为(72.13±2.11)%。与常氧组比较缺氧组 HIF-1α表达明显增加。计算1%克隆存活的药物浓度,阿霉素处理细胞,常氧组浓度为(0.29±0.05)μg/ml;缺氧组浓度为(0.48±0.07)μg/ml;丝裂霉素处理细胞,常氧组浓度为(0.71±0.10)μg/ml;缺氧组浓度为(0.79±0.12)μg/ml。干扰 HIF-1α后,HIF-1α mRNA 与对照组比较下降了70%,而 GST-π mRNA稍有下降。GST-π蛋白表达常氧条件下对照组为(32.14±1.23)%,干扰组为(30.88±1.65)%;缺氧条件下对照组为(64.78±2.45)%,干扰组为(67.42±2.21)%。结论长期缺氧可诱导 SPCA1细胞HIF-1α和 GST-π表达增加,对阿霉素耐药性增加,对丝裂霉素没有影响,HIF-1α和 GST-π并没有直接的相关性。
- 柳永蕾宋现让王兴武魏玲李大鹏
- 关键词：肺肿瘤细胞低氧谷胱甘肽转移酶
