国家自然科学基金(81271025)
- 作品数：14 被引量：17H指数：2
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- 慢病毒介导环腺苷酸反应成分结合蛋白1特异性小干扰RNA对小鼠视网膜新生血管的抑制作用
- 2014年
- 目的 观察玻璃体腔注射慢病毒介导环腺苷酸反应成分结合蛋白1（CREB1）特异性小干扰RNA（siRNA）对小鼠视网膜新生血管的抑制作用.方法 构建针对小鼠靶基因CREB1 siRNA载体,筛选并进行慢病毒包装.将140只C57BL/6J小鼠均分为正常对照组、氧诱导视网膜病变（OIR）模型组、空载体组和CREB1干扰组.正常对照组小鼠在正常空气中饲养.OIR模型组、空载体组和CREB1干扰组小鼠均于出生后7d建立OIR模型.空载体组及CREB1干扰组小鼠于出生后5d分别行玻璃体腔注射慢病毒-绿色荧光蛋白（GFP）空载体和CREB1-RNA干扰慢病毒载体1.0μl.利用突破内界膜的新生血管内皮细胞核数和荧光血管造影视网膜铺片评价视网膜新生血管情况;计算小鼠视网膜新生血管和无灌注区面积;逆转录聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法检测小鼠视网膜CREB1 mRNA和磷酸化CREB1 （P-REB1）蛋白表达,以及血管内皮生长因子（VEGF）-A、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）的mRNA和蛋白表达情况.结果 OIR模型组、空载体组突破内界膜的血管内皮细胞核计数较正常对照组明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;CREB1干扰组突破内界膜的血管内皮细胞核计数较OIR模型组、空载体组明显减少,差异有统计学意义（P＜0.05）.OIR模型组、空载体组小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积均较正常对照组明显增大,CREB1干扰组小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积均较OIR模型组和空载体组明显缩小.4组小鼠视网膜新生血管面积和无灌注区面积比较,差异均有统计学意义（F=67.220、110.090,P＜0.05）.OIR模型组、空载体组小鼠视网膜CREB1 mRNA和P-CREB蛋白表达以及VEGF-A、Akt、PI3K mRNA和蛋白表达均较正常对照组明显增加;CREB1干扰组小鼠视网膜CREB1 mRNA和P-CREB蛋白表达以及VEGF-A、Akt、PI3K mRNA和蛋白表达较OIR模型组、�
- 温臣婷贺涛邢怡桥焦康为蔡维
- 关键词：视网膜新生血管化基因转移技术
- 下调热休克蛋白B8在视神经损伤中对小鼠视网膜神经节细胞的保护作用
- 2021年
- 目的观察敲低热休克蛋白B8(HspB8)对鼠视神经钳夹(ONC)后视网膜神经节细胞(RGC)及视网膜功能的影响。方法构建敲低HspB8的重组腺相关病毒(AAV)2-小发夹HspB8(shHspB8)-绿色荧光蛋白(GFP)。雄性C57BL/6J小鼠66只随机分为正常对照组、ONC组、AAV2-shHspB8组、ONC+AAV2-shHspB8组、ONC+AAV2组,分别为10、20、16、10、10只,双眼均作为实验眼。建模后3、7 d,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测小鼠视网膜HspB8蛋白相对表达变化;GFP免疫荧光染色确定AAV2-shHspB8-GFP转染情况。建模后5 d,视动反应(OMR)、暗适应全视野闪光视网膜电图(ff-ERG)检测各组小鼠视敏度、振荡电位(OPs)、明视负向反应(PhNR)振幅和潜伏期;视网膜铺片计数各组小鼠RGC。采用Mann-Whitney U检验、独立样本t检验、Welch法校正t检验、单因素方差分析、Bonferroni t检验对数据进行统计分析。结果与正常对照组比较,ONC3组小鼠视网膜中HspB8蛋白相对表达量明显增加,差异有统计学意义(F=43.63,P<0.01)。与正常对照组比较,ONC5组小鼠视敏度明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);a波、b波、OPs、PhNR振幅下降,b波潜伏期延长,差异均有统计学意义(P<0.05);ONC3组、ONC5组、ONC7组小鼠RGC存活率呈时间依赖性降低,差异有统计学意义(F=384.90,P<0.01)。病毒转染后4周,转染率达峰值。与正常对照组相比,AAV2-shHspB8组视敏度,a波和b波、OPs、PhNR振幅、RGC计数差异均无统计学意义(P>0.05);ONC5+AAV2-shHspB8组RGC计数较ONC5组明显升高,差异有统计学意义(F=10.62,P<0.01)。结论ONC诱导HspB8在视网膜中表达,导致RGC死亡并损害小鼠视功能;下调HspB8对ONC所致的RGC死亡具有保护作用。
- 谢斐葭贺涛杨宁杨家翼花蒂豪罗晋媛李宗媛邢怡桥
- 关键词：热休克蛋白质类视神经损伤视网膜神经节细胞
- DJ-1蛋白对视神经钳夹伤后小鼠视网膜神经节细胞及视功能的影响被引量：2
- 2021年
- 目的观察Park7基因编码的DJ-1蛋白对小鼠视神经钳夹损伤(ONC)后视网膜神经节细胞(RGC)及视功能的影响。方法健康雄性C57BL/6J小鼠37只和116只分别随机分为正常组、ONC 2 d组、ONC 5 d组、ONC 7 d组和对照组、Park7组、Park7-ONC组、ONC组、绿色荧光蛋白(GFP)-ONC组。ONC 2 d组、ONC 5 d组、ONC 7 d组小鼠分别于建立ONC模型后2、5、7 d处死取材,进行后续实验。Park7组、Park7-ONC组小鼠玻璃体腔注射敲低Park7基因的重组腺相关病毒(rAAV)1μl,GFP-ONC组小鼠玻璃体腔注射仅带有GFP的rAAV 1μl;注射后4周观察病毒转染情况。ONC组、Park7-ONC组、GFP-ONC组玻璃体腔注射后23 d,建立ONC模型,建模后5 d取材进行后续实验。视网膜铺片免疫荧光染色观察RGC平均密度变化;全视野闪光视网膜电图检测各组小鼠a波、b波和明视负向反应(phNR)潜伏期及振幅变化和振荡电位(OPs)振幅变化;视动反应(OMR)检测小鼠视敏度;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠视网膜中DJ-1、Bax、B淋巴细胞瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白相对表达水平。多组间数据比较采用单因素方差分析;组间两两比较采用最小显著差法t检验。结果与正常组比较,ONC 2 d组、ONC 5 d组小鼠视网膜DJ-1蛋白相对表达量均显著上升,差异有统计学意义(t=16.610、5.628,P<0.01、<0.05)。病毒转染后4周,Park7组小鼠视网膜RGC层、内丛状层可见强GFP表达。与对照组比较,ONC组小鼠视网膜RGC密度明显下降,差异有统计学意义(t=16.520,P<0.000);与ONC组比较,Park7-ONC组小鼠视网膜RGC密度明显下降,差异有统计学意义(t=6.074,P<0.01)。随刺激光亮度增加,对照组小鼠暗适应a波、b波潜伏期逐渐缩短,振幅逐渐增大。刺激光亮度3 cd·s/m^(2),对照组、Park7组、Park7-ONC组、ONC组、GFP-ONC组小鼠暗适应a波、b波潜伏期及振幅比较,差异均无统计学意义(潜伏期:F=0.503、2.592,P=0.734、0.068;振幅:F=0.439、1.451,P=0.779、0
- 欧阳灵艺贺涛邢怡桥
- 关键词：视神经损伤视网膜电描记术DJ-1蛋白
- Krüppel样因子7对视网膜缺血再灌注损伤小鼠视网膜神经节细胞存活及视网膜电图的影响被引量：5
- 2020年
- 目的观察Krüppel样因子7(KLF7)对视网膜缺血再灌注(RIR)损伤小鼠RGC存活及ERG的影响。方法采用随机数字表法将126只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、RIR组、正常-KLF7组、正常-绿色荧光蛋白(GFP)组、RIR-KLF7组、RIR-GFP组。小鼠8周龄时,正常-KLF7组及RIR-KLF7组小鼠玻璃体腔注射1.0×1012 vg/ml过表达KLF7的重组腺相关病毒载体(AAV2-KLF7-GFP)1μl;正常-GFP组及RIR-GFP组小鼠玻璃体腔注射同样滴度的仅带GFP的空白腺相关病毒载体1μl。小鼠11周龄时,RIR组、RIR-KLF7组、RIR-GFP组小鼠建立RIR模型并测量眼压。玻璃体腔注射AAV2-KLF7-GFP病毒载体4周后,利用视网膜冰冻切片观察病毒转染情况。RIR建模后第7天,利用视网膜铺片免疫荧光染色定量观察RGC存活率;行全视野ERG检查,观察其暗适应a、b波和振荡电位(Ops)、光负性反应(PhNR)振幅和潜伏期的变化;行视动反应检测,观察其视敏度的变化。玻璃体腔注射病毒4周后,采用Western bolt检测小鼠视网膜中KLF7的蛋白表达。结果与正常组比较,RIR组小鼠视网膜RGC存活率,ERG a、b波振幅,Ops、PhNR振幅以及视敏度均明显降低,差异有统计学意义(t=12.860、7.157、5.735、8.953、4.744、9.887,P<0.05)。随着刺激光强的增加,小鼠暗适应ERG a、b波振幅逐渐升高,其潜伏期逐渐缩短。与RIR组比较,RIR-KLF7组小鼠视网膜RGC存活率,ERG a、b波振幅,Ops、PhNR振幅以及视敏度均明显升高,差异有统计学意义(t=6.350、3.253、3.695、5.825、5.325、4.591,P<0.05)。Western bolt检测结果显示,正常-KLF7组小鼠视网膜中KLF7蛋白表达较正常组明显上调,差异有统计学意义(t=4.105,P<0.01)。结论KLF7过表达可提高RGC存活率,保护其电生理功能。
- 李宗媛杨宁罗晋媛杨家翼贺涛邢怡桥
- 关键词：视网膜神经节细胞视网膜电描记术
- 小干扰RNA介导丝氨酸蛋白酶HtrA1沉默对光损伤人视网膜色素上皮细胞的影响被引量：1
- 2016年
- 目的 观察丝氨酸蛋白酶HtrA1沉默对光损伤人视网膜色素上皮（RPE）细胞的影响。方法 体外培养人RPE细胞，取第8～12代生长良好的传代细胞用于实验。将细胞分为正常对照组、光损伤模型组。采用波长400 nm的蓝色节能灯以（2000±500） Lux持续光照RPE细胞6 h建立光损伤模型。建模后光损伤模型组再分为针对HtrA1的小干扰RNA（HtrA1 siRNA）组、阴性对照组、空白对照组。应用脂质体RNAimax将HtrA1 siRNA转染至HtrA1 siRNA组细胞；阴性对照组细胞转染非特异的阴性siRNA；空白对照组为单纯光损伤细胞。采用细胞计数试剂盒、transwell小室法及流式细胞仪检测各组细胞增生、迁徙、凋亡以及细胞周期情况；实时聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法检测细胞中HtrA1和血管内皮生长因子A（VEGF-A）mRNA、蛋白质表达。结果 光损伤模型组细胞中HtrA1 mRNA、蛋白表达均较正常对照组细胞明显升高，差异有统计学意义（t=17.62、15.09，P＜0.05）。与阴性对照组、空白对照组比较，HtrA1 siRNA组细胞增生（t=6.37、4.52）、迁徙能力（t=9.56、12.13）、凋亡率（t=23.37、29.08）明显下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；细胞停留在G0/G1期数目增多（t=6.24、4.93），差异有统计学意义（P＜0.05）；HtrA1、VEGF-A mRNA（t=17.36、11.32、7.29、4.05）和蛋白（t=12.02、15.28、4.98、6.24）表达均明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 特异性沉默HtrA1基因表达可降低蓝光对人RPE细胞增生、迁徙能力的损伤和细胞凋亡率；下调VEGF-A的表达。
- 余天邢怡桥陈长征
- 关键词：血管内皮生长因子A
- 人眼结膜吸吮线虫病一例被引量：2
- 2015年
- 患者,男,45岁,于2014年8月因“右眼异物感、眼痒1周余,家属发现跟内虫子半天”于我院眼科就诊。询问病史，患者既往身体健康，无山间农田作业．无养狗和猫等宠物史。但1个月前到乡下时有不明昆虫飞入眼内病史。眼部检查：双眼视力：右眼1．0．左眼1．0，眼压（10P）：右眼16．0mmHg，左眼15．3mmHg（1mmHg=0．133kPa）。
- 温臣婷刘诗亮
- 关键词：身体健康双眼视力眼部检查异物感右眼病史
- 阿司匹林与眼部新生血管的生成被引量：1
- 2017年
- 阿司匹林是重要的非甾体抗炎药，通过抑制全身的环氧合酶发挥解热、镇痛、抗炎和抗血小板的作用，在心脑血管疾病及风湿免疫性疾病中被广泛使用。新生血管本是机体的一种自我修复，但同时在肿瘤及眼科各种疾病中也扮演着破坏者的角色。阿司匹林对病理性新生血管的产生到底发挥着何种作用，目前尚处于争论阶段：一方面，阿司匹林对于新生血管产生作用最强的作用因子血管内皮生长因子（VEGF）有一定的抑制作用；另一方面，阿司匹林又因抑制抗新生血管最强的因子，即内皮抑素生成，从而促进VEGF的生成。再者，阿司匹林对于眼部的血-视网膜屏障也有破坏作用，这在某种程度上也能造成眼底新生血管的生成。同时，我们分析了出现眼部新生血管的疾病中阿司匹林的作用。今后的研究中，阿司匹林在眼科领域与脉络膜新生血管生成中的关系急需得到进一步阐明，应综合衡量阿司匹林在新生血管防治中的利弊。
- 江梦南沈吟邢怡桥
- 关键词：阿司匹林脉络膜新生血管血-视网膜屏障内皮抑素血管内皮生长因子
- IOL Master、Pentacam HR和UBM在近视患者前房深度测量中的应用比较被引量：5
- 2020年
- 目的比较IOL Master、Pentacam HR和超声生物显微镜(UBM)三者测量前房深度的差异,并分析三者测量结果的一致性。方法采用回顾性研究方法,收集52例(104只眼)屈光手术近视患者,患者平均年龄为(22.58±6.12)岁,等效球镜屈光度平均为(-8.15±2.68)D。分别采用IOL Master、Pentacam HR和UBM测量52例(104只眼)近视患者前房深度,比较3种方法测量值的差异性和一致性,并分析其相关性。结果Kolmogorov-Smirnov检验三组仪器测量的前房深度符合正态分布(P>0.05)。IOL Master、Pentacam HR和UBM测量前房深度的平均值分别为(3.24±0.22)、(3.30±0.24)和(3.28±0.24)mm。IOL Master与Pentacam HR和UBM之间的平均值差别分别为(-0.06±0.10)、(-0.04±0.15)mm,有统计学意义(α<0.05);而Pentacam HR和UBM之间的差值为(0.02±0.13)mm,无统计学意义(α>0.05),二者有较好的一致性。IOL Master与Pentacam HR和UBM测量结果的相关系数分别为0.91和0.80(均P<0.0001);Pentacam HR和UBM测量结果的相关系数为0.86(P<0.0001)。结论三种仪器在进行近视患者前房深度测量时,IOL Master测量值较Pentacam HR和UBM测量值偏小,Pentacam HR与UBM前房深度测量值一致性较好,可相互替代;而IOL Master与Pentacam HR、UBM测量结果有显著差异,不能完全相互替代。
- 纪开宝张青林赵益邢怡桥
- 关键词：前房深度UBM
- 白藜芦醇在眼科疾病中的保护作用
- 2023年
- 白藜芦醇是一种天然的多酚类物质,是红葡萄酒中主要的生物活性成分,其广泛存在于葡萄、花生、浆果、桑葚、蓝莓等植物中。白藜芦醇具有抗炎、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗凋亡、心血管保护和神经保护等多种生物活性。近年来,越来越多的研究表明白藜芦醇在干眼症、白内障、青光眼、黄斑变性以及糖尿病性视网膜病变中具有一定的保护作用,这意味着白藜芦醇可能成为治疗眼部疾病的潜在药物。本文就近年来关于白藜芦醇在常见眼科疾病中的作用及相关机制的研究进行综述,以期为进一步探索白藜芦醇的药用价值提供思路。
- 纪开宝谢丽萍邢怡桥
- 关键词：白藜芦醇干眼症青光眼黄斑变性糖尿病性视网膜病变
- 半乳糖凝集素与眼部新生血管形成被引量：1
- 2017年
- 多种眼部组织都可能形成新生血管,如角膜、虹膜、视网膜和脉络膜等。而病理性新生血管的产生是导致视力损害甚至致盲的重要原因之一,如增生型糖尿病视网膜病变和年龄相关性黄斑变性等。半乳糖凝集素(Galectin)作为凝集素超家族中的一个家族,在人和动物的许多组织中广泛分布。近来许多研究都表明半乳糖凝集素家族参与了细胞黏附、细胞凋亡、炎症反应和肿瘤转移等生理和病理过程,其在肿瘤新生血管中的作用也越来越受到重视,而糖基化也是哺乳动物蛋白转录后修饰的重要方式之一。本文就半乳糖凝集素在眼部新生血管中的作用进行综述。
- 杨宁贺涛邢怡桥
- 关键词：半乳糖凝集素新生血管内皮细胞
